【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分析化学，具体涉及一种基于硼亲和作用的高选择性木犀草素检测方法。
技术介绍
1、木犀草素是一种天然黄酮类化合物，其化学名为3',4',5,7-四羟黄酮，最初是从木犀草属的草本植物木犀草中分离出而得名。木犀草素在花生壳、忍冬和马鞭草等药材中广泛存在。近年来，木犀草素因具有抗炎、抗菌、抗肿瘤、抗氧化和抗病毒等多重药理活性而在医药和临床领域得到了广泛的关注。然而，在中药材中木犀草素含量低且中药提取液基质复杂，因此，开发一种简便、灵敏的木犀草素检测方法对药物质量控制和临床医学研究均具有重要意义。
2、目前，木犀草素的检测方法有很多且存在诸多不足：
3、高效液相色谱法分析成本高，液相色谱仪价格及日常维护费用贵，分析时间一般比气相色谱法长，甲醇和乙腈等流动相成本高。如安捷伦液相色谱仪(通用型1260infinityii)市场价约30万元。
4、用紫外可见分光光度计对木犀草素直接进行定性分析时，必须用木犀草素标准品与相应的色谱峰进行对比，或与其他方法(如质谱、光谱)联用，才能获得直接肯定的结果。在定量分析时，常需要用木犀草素纯样品对检测后输出的信号进行校正。
5、毛细管电泳法在测定成分时存在几个弊端，首先，由于进样量少，因而制备能力差；其次，由于毛细管直径小，使光路太短，灵敏度较低；此外，电渗会因样品组成而变化，进而影响分离重现性。
6、电化学分析法精密度较差，当要求精密度较高时不宜采用此法，电极点位值的重现性受实验条件的影响较大。
7、上述方法在木犀草素检
技术实现思路
1、为了克服现有技术的不足，本专利技术提供一种基于硼亲和作用的高选择性木犀草素检测方法，用于解决现有技术在检测木犀草素时存在仪器昂贵、操作复杂、耗时等的技术问题，从而达到可对木犀草素进行快速检测并且具有高灵敏度的目的。
2、为解决上述问题，本专利技术所采用的技术方案如下：
3、一种基于硼亲和作用的高选择性木犀草素检测方法，包括以下步骤：
4、步骤s1：量子点的制备及纯化：将3-羧基苯基硼酸和3-氨基苯基硼酸溶解在纯净水中，进行加热反应后，冷却至室温得到初步的量子点，将所述初步的量子点用水透析除去杂质，并进行干燥后得到纯化后的量子点；
5、步骤s2：量子点的表征：利用傅里叶变换红外光谱确定所述纯化后的量子点表面是否含有丰富的硼酸基团，若是，则认为所述纯化后的量子点适合用于木犀草素的检测；
6、步骤s3：待测液的制备：将待测样品干燥后进行粉碎得到样品粉末，称取所述样品粉末，用乙醇溶液进行回流提取得到一提取液，将所述提取液进行离心去除杂质后，取上清液进行稀释得到木犀草素待测液；
7、步骤s4：木犀草素检测：对所述纯化后的量子点进行稀释得到稀释的量子点，将所述稀释的量子点与pbs缓冲溶液和木犀草素待测液进行混合后，得到一反应溶液，测量所述反应溶液在415nm的激发波长下经历一段孵育时间后的荧光强度，根据所述荧光强度，并利用木犀草素线性回归方程进行换算后，得到所述木犀草素待测液中木犀草素的含量。
8、作为本专利技术优选的实施方式，在所述步骤s1中，所述3-羧基苯基硼酸的用量为0.5-1.0g，所述3-氨基苯基硼酸的用量为0.3-0.6g，所述纯净水的用量为20-40ml。
9、作为本专利技术优选的实施方式，在所述步骤s1中，所述加热反应的具体条件包括：加热温度为120-200℃，加热时间为6-8h。
10、作为本专利技术优选的实施方式，在所述步骤s1中，所述透析的具体条件包括：截留分子量为1000道尔顿，透析时间为48-72h。
11、作为本专利技术优选的实施方式，所述步骤s3具体为：用75％乙醇溶液回流提取30min得到一提取液，将所述提取液以4000r/min离心30min以除去杂质。
12、作为本专利技术优选的实施方式，在所述步骤s4中，所述稀释的具体过程为：称取所述纯化后的量子点用水稀释20倍得到所述稀释的量子点。
13、作为本专利技术优选的实施方式，在所述步骤s4中，所述反应溶液的具体制备过程为：将所述稀释的量子点、所述pbs缓冲溶液以及所述木犀草素标准溶液以1：1：1的体积比进行混合，得到所述反应溶液。
14、作为本专利技术优选的实施方式，在所述步骤s4中，所述木犀草素线性回归方程的建立过程，包括：依照所述步骤s4对梯度浓度的木犀草素标准溶液进行检测，建立木犀草素浓度以10为底的对数值与相应荧光强度间的木犀草素线性回归方程。
15、作为本专利技术优选的实施方式，在所述步骤s4中，所述pbs缓冲溶液ph值的确定过程，包括：将稀释的量子点、木犀草素标准溶液以及梯度ph值的pbs缓冲溶液进行混合，得到梯度ph值的反应溶液，测量所述梯度ph值的反应溶液的荧光强度，得到其中最低荧光强度所对应pbs缓冲溶液的ph值，即为用于木犀草素检测的pbs缓冲溶液的ph值。
16、作为本专利技术优选的实施方式，在所述步骤s4中，所述孵育时间的确定过程，包括：将稀释的量子点、木犀草素标准溶液以及pbs缓冲溶液进行混合，得到一反应溶液，测量所述反应溶液在415nm的激发波长下经历不同孵育时间后的荧光强度，得到其中荧光强度不再发生变化时的孵育时间，即为在415nm的激发波长下，用于木犀草素检测的孵育时间。
17、相比现有技术，本专利技术的有益效果在于：
18、(1)本专利技术采用荧光检测法检测木犀草素，高检测灵敏度荧光分光光度计f93市场价约1.2万元，因此采用荧光检测法相较于现有的高效液相色谱法分析成本更低，另外本专利技术采用荧光检测法检测木犀草素时，无需有机流动相或者载气，有效避免了有机试剂和氮气等的使用；
19、(2)本专利技术基于木犀草素与量子点结合后分子能量变化从而引起光学信号变化的原理实现木犀草素的检测，检测结果可直观反映，因此无需额外联用其他检测或分离设备，而现有的紫外可见分光光度计对木犀草素直接进行定性分析时，必须用木犀草素标准品与相应的色谱峰进行对比，或与其他方法(如质谱、光谱)联用，才能获得直接肯定的结果；
20、(3)本专利技术制备得到的量子点表面含有丰富的硼酸基团，可充分利用苯硼酸功能化的量子点可特异性地与木犀草素含有的顺式二醇结构结合从而导致荧光淬灭的特性，实现对木犀草素的高灵敏度检测；
21、(4)本专利技术制备得到的量子点对木犀草素具有高选择性，从而能进一步地保证木犀草素检测的高灵敏度；
22、(5)本专利技术从量子点的制备到待测液的制备，以及最后的木犀草素检测，过程均较为简单，从而实现了木犀草素的快速检测。
23、下面结合附图和具体实施方式对本专利技术作进一步详细说明。
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1.一种基于硼亲和作用的高选择性木犀草素检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的基于硼亲和作用的高选择性木犀草素检测方法，其特征在于，在所述步骤S1中，所述3-羧基苯基硼酸的用量为0.5-1.0g，所述3-氨基苯基硼酸的用量为0.3-0.6g，所述纯净水的用量为20-40ml。
3.根据权利要求1所述的基于硼亲和作用的高选择性木犀草素检测方法，其特征在于，在所述步骤S1中，所述加热反应的具体条件包括：加热温度为120-200℃，加热时间为6-8h。
4.根据权利要求1所述的基于硼亲和作用的高选择性木犀草素检测方法，其特征在于，在所述步骤S1中，所述透析的具体条件包括：截留分子量为1000道尔顿，透析时间为48-72h。
5.根据权利要求1所述的基于硼亲和作用的高选择性木犀草素检测方法，其特征在于，所述步骤S3具体为：用75％乙醇溶液回流提取30min得到一提取液，将所述提取液以4000r/min离心30min以除去杂质。
6.根据权利要求1所述的基于硼亲和作用的高选择性木犀草素检测方法，其特征在于，
7.根据权利要求1所述的基于硼亲和作用的高选择性木犀草素检测方法，其特征在于，在所述步骤S4中，所述反应溶液的具体制备过程为：将所述稀释的量子点、所述PBS缓冲溶液以及所述木犀草素标准溶液以1：1：1的体积比进行混合，得到所述反应溶液。
8.根据权利要求1所述的基于硼亲和作用的高选择性木犀草素检测方法，其特征在于，在所述步骤S4中，所述木犀草素线性回归方程的建立过程，包括：依照所述步骤S4对梯度浓度的木犀草素标准溶液进行检测，建立木犀草素浓度以10为底的对数值与相应荧光强度间的木犀草素线性回归方程。
9.根据权利要求1所述的基于硼亲和作用的高选择性木犀草素检测方法，其特征在于，在所述步骤S4中，所述PBS缓冲溶液pH值的确定过程，包括：将稀释的量子点、木犀草素标准溶液以及梯度pH值的PBS缓冲溶液进行混合，得到梯度pH值的反应溶液，测量所述梯度pH值的反应溶液的荧光强度，得到其中最低荧光强度所对应PBS缓冲溶液的pH值，即为用于木犀草素检测的PBS缓冲溶液的pH值。
10.根据权利要求1所述的基于硼亲和作用的高选择性木犀草素检测方法，其特征在于，在所述步骤S4中，所述孵育时间的确定过程，包括：将稀释的量子点、木犀草素标准溶液以及PBS缓冲溶液进行混合，得到一反应溶液，测量所述反应溶液在415nm的激发波长下经历不同孵育时间后的荧光强度，得到其中荧光强度不再发生变化时的孵育时间，即为在415nm的激发波长下，用于木犀草素检测的孵育时间。
...【技术特征摘要】
1.一种基于硼亲和作用的高选择性木犀草素检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的基于硼亲和作用的高选择性木犀草素检测方法，其特征在于，在所述步骤s1中，所述3-羧基苯基硼酸的用量为0.5-1.0g，所述3-氨基苯基硼酸的用量为0.3-0.6g，所述纯净水的用量为20-40ml。
3.根据权利要求1所述的基于硼亲和作用的高选择性木犀草素检测方法，其特征在于，在所述步骤s1中，所述加热反应的具体条件包括：加热温度为120-200℃，加热时间为6-8h。
4.根据权利要求1所述的基于硼亲和作用的高选择性木犀草素检测方法，其特征在于，在所述步骤s1中，所述透析的具体条件包括：截留分子量为1000道尔顿，透析时间为48-72h。
5.根据权利要求1所述的基于硼亲和作用的高选择性木犀草素检测方法，其特征在于，所述步骤s3具体为：用75％乙醇溶液回流提取30min得到一提取液，将所述提取液以4000r/min离心30min以除去杂质。
6.根据权利要求1所述的基于硼亲和作用的高选择性木犀草素检测方法，其特征在于，在所述步骤s4中，所述稀释的具体过程为：称取所述纯化后的量子点用水稀释20倍得到所述稀释的量子点。
7.根据权利要求1所述的基于硼亲和作用的高选择性木犀草素检测方法，其特征在于，在所述步骤s4...
【专利技术属性】
技术研发人员：丁立新，王永强，陈晓义，侯星羽，孙雪，
申请(专利权)人：佳木斯大学，
类型：发明
国别省市：
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