【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及农作物抗虫研究，特别涉及一种基于虫体长度的水稻抗稻瘿蚊鉴定方法及其应用。
技术介绍
1、亚洲稻瘿蚊是一种毁灭性的水稻害虫。为了减少对化学农药的依赖，保障农业的可持续，增施营养物质以提高水稻抗病虫害能力已有广泛应用；此外，培育抗虫品种是虫害综合防治中最有效的方法。因此，广泛收集、系统研究和合理利用抗虫种质资源，开发简便、准确、高效的抗性鉴定技术，进行种质资源评估和突变体筛选，通过多种途径聚合抗性基因，培育抗虫品种并加以利用，对防治稻瘿蚊爆发和危害具有重大意义。营养元素是作物生长、发育不可缺少的组成部分，近年来利用营养元素改善作物抗病虫害能力的报道已越来越多。因此，开发一种水稻对稻瘿蚊营养抗性鉴定的方法，对认识水稻抗稻瘿蚊机理，保证水稻安全生产有重大意义。
2、目前，水稻苗期抗稻瘿蚊的表型鉴定方法和抗性评级参考的是国际水稻所1978年制定评级标准，即托盘不划分区组，按宽边均匀划分12小区，选取中间2个小区播种实验抗、感对照品种，其余10个小区播种测试品种(系)，每个小区播种20粒，每盘接入受孕稻瘿蚊12头。稻瘿蚊抗性国际分级标准进行评级：标葱率0为1级，1-5％为3级，6-15％为5级，15-50％为7级，50％以上为9级，1-3级为高抗(hr)，5级为中抗(mr)，7级为感(s)，9级为高感(hs)。感性对照品种标葱率达60％时，认为实验有效。该方法的缺点是易受环境、操作等因素的影响，易出现稻瘿蚊空间分布不均，导致大量水稻幼苗未接上虫却被计入总数，致使标葱率偏低。而水稻对稻瘿蚊营养抗性鉴定的方法规范，目前
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的是提供水稻苗期抗稻瘿蚊鉴定实验方法和水稻对稻瘿蚊营养抗性鉴定实验方法。在开展水稻苗期抗稻瘿蚊鉴定时，该方法准确性及重复性好；在开展水稻对稻瘿蚊营养抗性鉴定实验时，出于研究目的，可以用于特定元素的营养抗性鉴定。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
3、一种基于虫体长度的水稻抗稻瘿蚊鉴定方法，该方法包括以下步骤：
4、1)供试虫源培养室的准备：准备养虫笼，网罩和网套；2)供试虫源的繁育；3)种质材料的育苗管理与接虫；4)抗虫鉴定与评级；
5、所述步骤3)种质材料的育苗管理与接虫包括用于水稻苗期抗稻瘿蚊表型鉴定的托盘法和水稻对稻瘿蚊营养抗性鉴定的水培法。
6、本专利技术中，进一步地，所述采用托盘法进行种质材料的育苗管理与接虫的方式包括以下步骤：根据鉴定水稻品种数量在育苗托盘内选择2等份区组每小区播种16粒、3等份区组每小区播种10粒和4等份区组每小区播种10粒；根据可供实验用虫数，对2等份区组的每盘接入受孕稻瘿蚊24头；对3等份区组的每盘接入受孕稻瘿蚊24头或36头；对4等份区组的每盘接入受孕稻瘿蚊24头或36头或48头。
7、上述托盘法在不同的播种和接虫实验方案中，筛选到6种实验方案，分别是2等份区组的每盘接入受孕稻瘿蚊24头；3等份区组的每盘接入受孕稻瘿蚊24头或36头；4等份区组的每盘接入受孕稻瘿蚊24头或36头或48头，这些方案与国际水稻所设定的实验方案相比，通量更大、鉴定效率更高、具有重复性验证。
8、本专利技术中，进一步地，所述采用水培法进行水稻对稻瘿蚊营养抗性鉴定的育苗管理与接虫的方式包括以下步骤：催芽露白后的种子放置在48孔底部镂空的塑料板，每板间隔播种24粒水稻，并放置在特制的15格水培盆，一个编号3次重复即一个编号3格共计72株苗；幼苗在生长到2叶期前用全营养液培养，2叶期后用待测营养液培养1周后便可接虫，每盆接入受孕稻瘿蚊18头，并覆盖网罩；接虫后2天揭开网罩，在接虫后第5、7、9、11、13、15天每板取4株测定稻瘿蚊幼虫长度。
9、本专利技术中，进一步地，所述抗虫鉴定方法如下：将水稻幼苗取回后放置进-20℃低温冰箱冷冻固定，1小时后取出在室温下复温10分钟，在体式显微镜下用解剖刀切除水稻幼苗的根部，同时沿向地方向将幼苗生长点部位的组织切开，用解剖针和细胞夹将幼虫取出，放置在黑色吸光玻璃板上，用体式显微镜配套的应用软件测量每一个幼虫的长度。
10、本专利技术中，进一步地，所述抗虫评级的方法如下：接虫后15天，按照以下公式统计平均虫长：平均虫长＝∑单株虫长/幼苗总数；根据稻瘿蚊的特性，从0毫米开始，每0.5毫米设置一个区间，共设置10个等级，其中等级0为“0-0.5毫米”，等级9为“大于4.5毫米”。等级越小表明抗稻瘿蚊能力越强。
11、本专利技术中，进一步地，所述抗虫评级方法仅统计在解剖后出现稻瘿蚊幼虫的植株，未发现幼虫的不计入幼苗总数。
12、本专利技术中，进一步地，所述播种育苗过程中种质材料包括试验对照品种9311或tn1(感虫品种)、抗蚊青占(抗性品种)及供试品种；所述供试品种为前一年收获的储存良好的饱满籽粒，种子活力高。
13、本专利技术中，进一步地，所述种质材料的育苗管理与接虫过程中受孕稻瘿蚊为体型基本一致的稻瘿蚊。
14、本专利技术中，进一步地，所述种质材料的育苗管理与接虫步骤中，包括在接虫前先对网罩或网套进行杀虫灭虫处理的操作，杀灭蜘蛛、蚂蚁以及寄生蜂天敌。
15、本专利技术中，进一步地，所述种质材料的育苗管理与接虫过程中在接入受孕稻瘿蚊后，保持养虫笼温度为25-30℃、空气湿度大于80％。
16、本专利技术中，进一步地，所述步骤2)中供试虫源的繁育在开展前要将养虫笼彻底打扫干净并且杀灭天敌如蜘蛛、蚂蚁以及寄生蜂，并且要保障好饲养虫源的受体即感性水稻材料已经准备就绪。
17、上述一种基于虫体长度的水稻抗稻瘿蚊鉴定方法应用于选育抗稻瘿蚊水稻中。
18、本专利技术至少具有以下有益效果：
19、1.本专利技术的水稻抗稻瘿蚊的鉴定方法通过两种方式实现，一是在育秧托盘(塑料或铝质均可)按设定的方式播种和接虫，可以高效鉴定水稻品种(系)苗期抗稻瘿蚊表型和抗稻瘿蚊突变株系筛选(也称托盘法)；二是用水培法所设定的方式播种、育苗和接虫，通过设定不同元素、不同浓度的缺陷营养液或超量营养液培养水稻，可以用于评价营养元素对增强水稻抗稻瘿蚊能力的效果。以上方法解决水稻苗期抗稻瘿蚊表型鉴定过程中精确度低、无法鉴定微量抗性及水稻对稻瘿蚊营养抗性鉴定方法缺乏等问题，加快推进了抗虫品种的选育及推广应用。
20、2.本专利技术采用稻瘿蚊虫体长度作为抗性评级指标，可以避免未被产卵的幼苗计入总数所造成的误差，准确度远高于以标葱率作为指标。
21、3.本专利技术采用大小固定的育苗容器和养虫笼，可控的播种密度和接虫数量，保证鉴定方法的准确性和重复性。
22、4.本专利技术将育苗托盘、育苗杯移入玻璃温室内，可以延长鉴定时期，相对稳定的外部环境保证了实验的准确性及重复性。
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1.一种基于虫体长度的水稻抗稻瘿蚊鉴定方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种基于虫体长度的水稻抗稻瘿蚊鉴定方法及其应用，其特征在于，所述抗虫评级的方法如下：接虫后15天，按照以下公式统计平均虫长：平均虫长＝∑单株虫长/含虫幼苗数；根据稻瘿蚊的特性，从0毫米开始，每0.5毫米设置一个区间，共设置10个等级，其中等级0为“0-0.5毫米”，等级9为“大于4.5毫米”；等级越小表明抗稻瘿蚊能力越强。
3.根据权利要求1所述的一种基于虫体长度的水稻抗稻瘿蚊鉴定方法，其特征在于，所述播种育苗过程中种质材料包括试验对照品种9311或TN1、抗蚊青占及供试品种；所述供试品种为前一年收获的储存良好的饱满籽粒，种子活力高。
4.根据权利要求1所述的一种基于虫体长度的水稻抗稻瘿蚊鉴定方法，其特征在于，所述种质材料的育苗管理与接虫过程中受孕稻瘿蚊为体型基本一致的稻瘿蚊。
5.根据权利要求1所述的一种基于虫体长度的水稻抗稻瘿蚊鉴定方法，其特征在于，所述种质材料的育苗管理与接虫步骤中，包括在接虫前先对网罩或网套进行杀虫灭虫处理的
6.根据权利要求1所述的一种基于虫体长度的水稻抗稻瘿蚊鉴定方法，其特征在于，所述种质材料的育苗管理与接虫过程中在接入受孕稻瘿蚊后，保持养虫笼温度为25-30℃，空气湿度大于80％。
...【技术特征摘要】
1.一种基于虫体长度的水稻抗稻瘿蚊鉴定方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种基于虫体长度的水稻抗稻瘿蚊鉴定方法及其应用，其特征在于，所述抗虫评级的方法如下：接虫后15天，按照以下公式统计平均虫长：平均虫长＝∑单株虫长/含虫幼苗数；根据稻瘿蚊的特性，从0毫米开始，每0.5毫米设置一个区间，共设置10个等级，其中等级0为“0-0.5毫米”，等级9为“大于4.5毫米”；等级越小表明抗稻瘿蚊能力越强。
3.根据权利要求1所述的一种基于虫体长度的水稻抗稻瘿蚊鉴定方法，其特征在于，所述播种育苗过程中种质材料包括试验对照品种9311或tn1、抗蚊青占及供试品种；所述...
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