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一种检测高粱WAXY基因等位突变位点分型的引物及检测方法技术

技术编号：40357622 阅读：11 留言：0更新日期：2024-02-09 14:43

本发明专利技术提供了一种检测高粱WAXY基因突变位点分型的引物及检测方法，所属农业技术领域，包括以下步骤：样本处理；以处理后的样本为模板，对其进行PCR扩增；PCR扩增完成后，使用酶标仪读取荧光信号，再利用SNPWay软件解析转换荧光信号，从而得到清晰直观的分型图，并根据不同颜色，输出基因型结果；引物包括Wx<supgt;a</supgt;、Wx<supgt;b</supgt;、Wx<supgt;c</supgt;和Wx<supgt;d</supgt;四种等位突变位点的SNP标记引物；Wx<supgt;a</supgt;、Wx<supgt;b</supgt;、Wx<supgt;c</supgt;和Wx<supgt;d</supgt;四种等位突变位点的SNP标记引物用于鉴选高粱糯性种质；该方法利用Wx<supgt;a</supgt;、Wx<supgt;b</supgt;、Wx<supgt;c</supgt;和Wx<supgt;d</supgt;四种等位突变位点造成高粱籽粒直链淀粉含量存在差异，从而实现高通量、快速的鉴选出高粱中的糯性种质，并鉴定出WAXY基因等位变异的类型。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于农业，具体涉及一种检测高粱waxy基因突变位点分型的引物及检测方法。

技术介绍

1、高粱是全球重要的旱粮作物之一，高粱籽粒根据其胚乳中直链淀粉和支链淀粉含量不同可分为粳高粱和糯高粱，在粳高粱籽粒中直链淀粉含量约占总淀粉含量的20％～30％，支链淀粉含量约占总淀粉含量的70％～80％，而糯高粱籽粒中直链淀粉含量几乎没有，其淀粉颗粒均由支链淀粉组成。糯高粱籽粒因其淀粉颗粒与蛋白质结合较为松散，用于饲料也比粳高粱有较高的消化率，因此，糯高粱在酿酒、食用和饲用方面具有诸多优势。

2、目前，培育糯高粱杂交种时，需先培育糯高粱不育系和恢复系，但北方的高粱种质资源中糯性种质较少，因此在糯高粱种质创新的过程中大多采用粳高粱骨干系与糯高粱种质资源杂交的方法，通过f2代分离的方法分离出综合性状良好的糯性种质。

3、在现有的技术中，对杂交后代鉴选糯性种质的方法，大部分通过在实验室内对研磨的高粱粉末经过氢氧化钠提取之后，采用碘试剂染色的方法测定直链淀粉含量来确定糯或者粳性高粱种质，但采用此种技术并不能鉴定出waxy基因等位变异的类型，且不便于大批量、快速的鉴选出糯性种质。

技术实现思路

1、基于上述技术问题，本专利技术提供一种检测高粱waxy基因突变位点分型的引物及检测方法，该方法利用wxa、wxb、wxc和wxd四种等位突变位点造成高粱籽粒直链淀粉含量存在差异，从而实现高通量、快速的鉴选出高粱中的糯性种质，并鉴定出waxy基因等位变异的类型。

2、其具体技术方案为：

3、一种检测高粱waxy基因等位突变位点分型的方法，包括以下步骤：

4、s1：样本处理；

5、s2：以处理后的样本为模板，对其进行pcr扩增；

6、s3：pcr扩增完成后，使用酶标仪读取荧光信号，再利用snpway软件解析转换荧光信号，从而得到清晰直观的分型图，并根据不同颜色，输出基因型结果。

7、在上述技术方案中，步骤s1中，对样本处理时，先取长宽为1cm的叶片放入深孔板中；加入100μl的0.3m氢氧化钠，将研磨仪设置50hz，研磨2min，使样品完全磨损；研磨后3000rpm离心1min，沸水浴2min；再加入200μl 0.2m tirs-hcl混匀，再次沸水浴2min；水浴完成后再以3000rpm离心1min，取上清液稀释20倍，在-20℃的环境下冻存，作为后续pcr扩增的模板。

8、一种检测高粱waxy基因等位突变位点分型的引物，引物包括wxa、wxb、wxc和wxd四种等位突变位点的snp标记引物。

9、在上述技术方案中，wxa、wxb、wxc和wxd四种等位突变位点的snp标记引物用于鉴选高粱糯性种质。

10、本专利技术的一种检测高粱waxy基因突变位点分型的引物及检测方法，与现有技术相比，有益效果为：

11、1.利用wxa、wxb、wxc和wxd四种等位突变位点造成高粱籽粒直链淀粉含量存在差异，从而实现高通量、快速的鉴选出高粱中的糯性种质，并鉴定出waxy基因等位变异的类型。

12、2.便于工作人员了解糯性种质的直链淀粉含量的变化范围。

本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种检测高粱WAXY基因等位突变位点分型的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种检测高粱WAXY基因等位突变位点分型的方法，其特征在于，所述步骤S1中，对样本处理时，先取长宽为1cm的叶片放入深孔板中；加入100μL的0.3M氢氧化钠，将研磨仪设置50HZ，研磨2min，使样品完全磨损；研磨后3000rpm离心1min，沸水浴2min；再加入200μL 0.2M Tirs-HCl混匀，再次沸水浴2min；水浴完成后再以3000rpm离心1min，取上清液稀释20倍，在-20℃的环境下冻存，作为后续PCR扩增的模板。

3.一种检测高粱WAXY基因等位突变位点分型的引物，其特征在于，所述引物包括Wxa、Wxb、Wxc和Wxd四种等位突变位点的SNP标记引物。

4.根据权利要求3所述的一种检测高粱WAXY基因等位突变位点分型的引物，其特征在于，所述Wxa、Wxb、Wxc和Wxd四种等位突变位点的SNP标记引物用于鉴选高粱糯性种质。

【技术特征摘要】

1.一种检测高粱waxy基因等位突变位点分型的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种检测高粱waxy基因等位突变位点分型的方法，其特征在于，所述步骤s1中，对样本处理时，先取长宽为1cm的叶片放入深孔板中；加入100μl的0.3m氢氧化钠，将研磨仪设置50hz，研磨2min，使样品完全磨损；研磨后3000rpm离心1min，沸水浴2min；再加入200μl 0.2m tirs-hcl混匀，再次沸水浴2min；水...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈冰嬬，王鼐，于淼，唐玉劼，张丽霞，石贵山，周宇飞，刘新宇，乔钲岩，刘晓涵，
申请(专利权)人：吉林省农业科学院中国农业科技东北创新中心，
类型：发明
国别省市：

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