【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于天然药物化学研究领域，提供了一种从仿刺参中提取分离海参烷型皂苷单体cladolosidesb的制备方法。
技术介绍
1、仿刺参(apostichopus japonicus selenka)属棘皮动物门(echinopermata)、海参纲(holothuroidea)、楯手目(aspidochirotida)、刺参科(stichopodidae)、仿刺参属(apostichopus)海洋生物，主要分布于中国、日本、朝鲜和俄罗斯等地。仿刺参为名贵的海参品种，是我国传统的食材与中药材，被誉为“参中之冠”。传统医学认为仿刺参具有滋补功效，可以治疗经血亏损、虚弱劳祛、阳痿梦遗、小便频数和肠燥便艰等多种症状。仿刺参中含有皂苷、脑苷脂、神经节苷脂、酸性粘多糖及凝集素等次生代谢产物，其中皂苷类化合物大多属于羊毛甾醇型三萜类寡糖苷，是由苷元和糖链通过β-糖苷键结合而成。
2、仿刺参中皂苷的苷元分为四环三萜和五环三萜，按照苷元的结构可以将其分为海参烷型(holostane-type)和非海参烷型(non-holostane-type)两种。海参烷型苷元一般含有18(20)-内酯环，而非海参烷型苷元有18(16)-内酯环或无内酯环结构。cladolosidesb是仿刺参中海参烷型皂苷的一种，对白色念球菌、热带念珠菌、红色毛藓菌石膏状小孢子菌都有很强的抑制作用，(王增蕾.仿刺参和一种肉芝软珊瑚化学成分及生物活性研究[d].上海:第二军医大学,2009.)。有两篇文献报道从海参中分离得到cladolosidesb(文献1：s
技术实现思路
1、本专利技术提供了一种利用仿刺参提取分离海参烷型皂苷单体化合物cladolosidesb制备方法。本专利技术所述cladolosidesb的结构式如下。
2、
3、鉴于cladolosidesb可以作为评价仿刺参质量的指标之一，也可以用于仿刺参总皂苷的一种含测指标，同时又因为cladolosidesb具有良好的抗菌生物活性，有望在保健食品、抗菌药物以及其他医药领域得到广泛应用。因此本专利技术对其制备方法进行了深入研究，完成了本专利技术。
4、本专利技术的具体
技术实现思路
如下：
5、以仿刺参或其内脏为原料，用乙醇-水混合溶剂提取，提取液利用大孔吸附树脂进行吸附，先用低浓度乙醇洗脱杂质，再用高浓度乙醇洗脱海参皂苷，洗脱液tlc检测，收集含海参烷型皂苷部分，此部分洗脱液减压回收溶剂，干燥，得到海参总皂苷。取海参总皂苷进行硅胶柱层析，ods柱层析，制备型高效液相色谱分离纯化，得到3β-o-{(3-o-甲基-β-d-吡喃葡萄糖-(1→3)-β-d-吡喃木糖-(1→4)-β-d-吡喃喹诺糖-(1→2)-[β-d-吡喃葡萄糖-(1→4)]-β-d-吡喃木糖}-海参烷-9，25-二烯-16酮(cladolosidesb)。
6、所述仿刺参的提取方法为：取新鲜的仿刺参或其内脏洗净，利用破壁机搅碎，用30％-85％乙醇水溶液回流提取。
7、所述的大孔吸附树脂为d101、ab-8、d4020、hp20或d301型大孔吸附树脂。
8、所述的仿刺参提取液经大孔吸附树脂吸附后，先用15％-95％的乙醇溶液洗脱杂质，再用浓度为95％-100％的乙醇溶液洗脱海参皂苷，洗脱液中含有3β-o-{(3-o-甲基-β-d-吡喃葡萄糖-(1→3)-β-d-吡喃木糖-(1→4)-β-d-吡喃喹诺糖-(1→2)-[β-d-吡喃葡萄糖-(1→4)]-β-d-吡喃木糖}-海参烷-9，25-二烯-16酮，此洗脱液减压回收乙醇后干燥，得到海参总皂苷。
9、取海参总皂苷以体积比为6:1:0.1～4:1:0.1的二氯甲烷-甲醇-水混合溶液为洗脱液进行硅胶柱层析梯度洗脱，tlc检验，合并含有cladolosidesb的组分，减压回收溶剂。将所得含cladolosidesb的组分，以体积比为1.5:1～3:1丙酮-水的混合溶液为洗脱液进行ods柱层析梯度洗脱，tlc检验，合并含cladolosidesb组分，减压回收溶剂。将所得的含cladolosidesb组分，利用制备型高效液相色谱以乙腈-水(43:57)为流动相等度洗脱，收集cladolosidesb色谱峰，减压回收溶剂，干燥，得到cladolosidesb单体。
10、所述的仿刺参可以是新鲜的仿刺参，也可以是冷冻仿刺参或仿刺参干燥品。所述的仿刺参内脏是指仿刺参加工过程中产生的其胃肠等废弃物。本专利技术主要采用仿刺参内脏提取分离cladolosidesb单体，能大大降低cladolosidesb的制备成本。
11、本专利技术利用nmr等手段对分得的cladolosidesb单体的化学结构进行了鉴定，鉴定过程及具体数据如下。
12、cladolosidesb为白色粉末。liebermann-burchard反应和molish反应阳性，推测其可能为皂苷类成分。
13、13c-nmr低场区有1个酮羰基碳信号(δc 213.30)，1个内酯羰基碳信号(占δc176.17)，1个三取代的乙烯基碳信号(δc 111.23，151.52)和1个末端双键碳信号(δc110.69，145.74)；谱图δc 60-106范围内显示30个连氧c信号，其中δc 102-106区域有5个糖的端基碳信号，提示分子内可能存在5个单糖。
14、1h-nmr显示6个具有海参烷骨架结构特征的甲基信号δh 0.998(h→32)，δh 1.273(h→30)，δh 1.379(h→31)，δh 1.461(h→21)，δh 1.49(h→19)，δh 1.725(h→27)以及5个糖的端基质子信号(δh4.63(1h,d,j＝7.80hz)，δh4.74(1h,d,j＝7.82hz)，δh4.93(1h,d,j＝7.81hz)，δh5.05(1h,d,j＝7.55hz)，δh5.20(1h,d,j＝7.40hz))且其偶合常数均大于6.9，推测单糖均为β构型。
15、将cladolosidesb单体的13c-nmr数据与文献(王增蕾.仿刺参和一种肉芝软珊瑚化学成分及生物活性研究[d].上海:第二军医大学,2009.)数据对照，两者基本一致，确定此化合物为3β-o-{(3-o-甲基-β-d-吡喃葡萄糖-(1→3)-β-d-吡喃木糖-(1→4)-β-d-吡喃喹诺糖-(1→2)-[β-d-吡喃葡萄糖-(1→4)]-β-d-吡喃木糖}-海参烷-9，25-二烯-16酮，即cladol本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种海参烷型皂苷单体及其制备方法，即3β-O-{(3-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖-(1→3)-β-D-吡喃木糖-(1→4)-β-D-吡喃喹诺糖-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)]-β-D-吡喃木糖}-海参烷-9，25-二烯-16酮(CladolosidesB)的制备方法，其特征在于以仿刺参为原料，用乙醇-水混合溶剂提取，提取液经大孔吸附树脂吸附，先用低浓度乙醇洗脱杂质，再用高浓度乙醇洗脱海参皂苷，洗脱液减压回收溶剂，干燥，得到含有CladolosidesB的海参总皂苷，取此海参总皂苷依次进行硅胶柱层析，ODS柱层析，制备型高效液相色谱分离纯化，得到CladolosidesB。
2.权利要求1所述的低浓度乙醇是浓度15％-95％的乙醇溶液，高浓度乙醇是浓度为95％-100％的乙醇溶液。
3.权利要求1所述的乙醇-水混合溶剂为30％-85％乙醇溶液。
4.权利要求1所述的大孔吸附树脂为AB-8、D4020、HP20或D301的一种。
5.权利要求1所述的硅胶柱层析流动相是体积比为6:1:0.1～4:1:0.1的二氯甲烷
6.权利要求1所述的ODS柱层析流动相是体积比为1.5:1～3:1丙酮-水的混合溶液。
7.权利要求1所述的制备型高效液相色谱流动相为乙腈-水(43:57)。
8.权利要求1所述的用于制备CladolosidesB的仿刺参原料为仿刺参或仿刺参的内脏。
...【技术特征摘要】
1.一种海参烷型皂苷单体及其制备方法，即3β-o-{(3-o-甲基-β-d-吡喃葡萄糖-(1→3)-β-d-吡喃木糖-(1→4)-β-d-吡喃喹诺糖-(1→2)-[β-d-吡喃葡萄糖-(1→4)]-β-d-吡喃木糖}-海参烷-9，25-二烯-16酮(cladolosidesb)的制备方法，其特征在于以仿刺参为原料，用乙醇-水混合溶剂提取，提取液经大孔吸附树脂吸附，先用低浓度乙醇洗脱杂质，再用高浓度乙醇洗脱海参皂苷，洗脱液减压回收溶剂，干燥，得到含有cladolosidesb的海参总皂苷，取此海参总皂苷依次进行硅胶柱层析，ods柱层析，制备型高效液相色谱分离纯化，得到cladolosidesb。
2.权利要求1所述的低浓度乙醇是浓度1...
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