【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及试剂检测领域，具体涉及一种检测双亲性接枝聚合物的接枝率的方法。
技术介绍
1、透明质酸或透明质酸钠(hyaluronic acid，简称ha)，又称玻尿酸，是由d-葡萄糖醛酸通过β-1,4糖苷键与n-乙酰葡糖胺通过β-1,3糖苷键组成的双糖单位糖胺聚糖。广泛用于化妆品领域或眼科手术中，也可作为软组织充填剂用以修复皱纹以及一些软组织缺陷。为避免透明质酸受到透明质酸酶的降解，可通过对透明质酸侧链进行疏水化改性，降低透明质酸酶对透明质酸的亲和性，可有效提高透明质酸酶对透明质酸的接触概率，从而提高透明质酸在体内的停留时间。
2、因此，近年来新出现了一些以透明质酸为骨架结构的双亲性(同时存在亲水基团和疏水基团)的接枝共聚物。然而双亲性接枝共聚物的接枝率测试是较为困难，因为其对测试溶剂的选择十分苛刻。
3、目前已有的透明质酸双亲性接枝共聚物有透明质酸与乳酸-乙醇酸共聚物(ha-b-plga)的接枝共聚物、透明质酸与聚乳酸(ha-b-pla，消旋)的接枝共聚物，它们的接枝率测试尚有办法，因为plga和pla的溶解性较好，可在各种极性溶剂中溶解，能够在四氢呋喃、丙酮、dmso等有机溶剂中溶解。因此可以选用氘代dmso作为测试溶剂，因其能够同时溶解透明质酸部分和接枝部分。
4、然而氘代dmso仅能用来测试分子量小于100kda的ha。对于以分子量较高的ha作为骨架部分和/或以疏水性更强、可选溶剂更少的化合物作为接枝部分的双亲性接枝共聚物，目前尚没有方式能够测试接枝率。
5、随着研究的进
技术实现思路
1、为了克服现有技术的不足，本专利技术提供了一种测试双亲性接枝共聚物的接枝率的方法。本专利技术的方法能够测试高分子量和/或疏水性强的双亲性接枝共聚物的接枝率，并能够达到很高的准确率。
2、本专利技术提供了一种检测双亲性接枝共聚物的接枝率的方法，包括以下步骤：
3、(1)将所述双亲性接枝共聚物与第一溶剂进行第一混合得到第一物料；
4、(2)所述第一物料与第二溶剂进行第二混合得到第二物料；
5、(3)将所述第二物料进行核磁共振；
6、其中，
7、所述双亲性接枝共聚物包括亲水性的骨架部分和疏水性的接枝部分，所述骨架部分来自于聚合物a，所述接枝部分来自于聚合物b；
8、所述第一溶剂为氘代水，所述第二溶剂为氘代六氟异丙醇。
9、所述核磁共振测得接枝率其中，
10、g为接枝率，单位为％；mb为所述接枝部分的重均分子量，单位为da；mb为所述聚合物b中结构单元的相对分子质量，单位为da；c为接枝部分的特征峰的积分面积；a为骨架部分的特征峰的积分面积。
11、其中，所述特征峰需满足不受所述第一溶剂和第二溶剂的干扰。
12、通过所述步骤(1)，使得亲水性的骨架部分溶解于所述第一溶剂中；通过所述步骤(2)，使得疏水性的接枝部分溶解于所述第二溶剂中。由于所述第一溶剂和所述第二溶剂能够互溶，因此该混合溶液能够进行核磁共振。经过核磁共振分别得到接枝部分和骨架部分的特征峰的峰面积，并通过上述计算公式计算得到接枝率。
13、具体地，所述第一混合可以在第一超声下进行，例如包括：将所述双亲性接枝共聚物与所述第一溶剂的共混物进行第一超声得到所述第一物料。
14、具体地，所述第一超声的条件可以包括：功率为500～1000w(例如500、600、700、800、900、1000w)，时间为1～4h(例如1、2、3、4h)。
15、具体地，所述第二混合可以在第二超声下进行，例如包括：将所述第一物料与所述第二溶剂进行混合操作(例如反复摇匀、搅拌、振荡等)然后进行第二超声，得到所述第二物料。
16、所述聚合物b为疏水性聚酯类化合物。
17、在一实例中，所述聚合物b选自聚消旋乳酸(pla)、聚左旋乳酸(plla)、聚右旋乳酸(pdla)和聚己内酯(pcl)中的一种或多种，优选聚左旋乳酸(plla)。
18、所述聚合物a为具有多糖结构的高分子，例如透明质酸盐或其衍生物、硫酸软骨素、肝素、壳聚糖、明胶和结冷胶中的一种或多种。
19、优选地，所述透明质酸盐或其衍生物包括：透明质酸钠、透明质酸钾、透明质酸钙、透明质酸镁、透明质酸铵、透明质酸四丁基铵、透明质酸铋和透明质酸锌中的任一种；
20、更优选地，所述聚合物a为透明质酸钠。
21、本专利技术采用第一溶剂为氘代水，第二溶剂为氘代六氟异丙醇。
22、本专利技术通过先加入氘代水溶解接枝共聚物，氘代水能够插入到透明质酸钠分子链间，破坏透明质酸钠分子间氢键，从而破坏透明质酸钠分子间氢键和其晶格结构，参与ha分子间形成氢键耦合，保证透明质酸钠在水中充分舒展，保证透明质酸被核磁信号捕捉，因此，先加入氘代水溶解透明质酸钠，能够保证该部分核磁信号被充分捕捉；然后在体系中加入氘代六氟异丙醇溶解聚左旋乳酸部分，由于两种溶剂能够混溶，此时ha与plla都高度自由伸展变为真溶液态，保证了ha与plla两部分核磁信号都能被充分捕捉，测试结果准确。
23、如果先加入氘代六氟异丙醇，plla被溶解，而氘代六氟异丙醇无法破环ha分子间氢键和晶格结构，而自由伸展的plla分子链会迁移至ha表面并形成部分疏水层，该疏水层导致后续加入氘代水溶剂也不能充分破坏ha分子间氢键和晶格结构，导致ha分子链活动受限，无法完全舒展，因此核磁测试中ha部分核磁信号不能充分捕捉，而影响测试结果的准确性。
24、如果两种溶剂同时加入，由于氘代六氟异丙醇为ha的不良溶剂，一方面减弱了氘代水破坏ha分子间氢键和晶格结构的能力，同时也阻碍了ha向混合溶剂中舒展，即使超声也不能改善溶解状态，从而影响ha分子链的自由度；另一方面被六氟异丙醇溶解的plla也会在ha表面形成部分疏水层，使得ha无法完全舒展，ha部分核磁信号不能够完全被捕捉，影响测试结果的准确性。
25、经过所述第一混合和所述第二混合将所述双亲性接枝共聚物进行完全溶解，得到核磁测试溶液。将该核磁测试溶液(所述第二物料)加入核磁管中进行核磁共振仪，测试氢谱。通过公式计算得到接枝率。
26、具体地，所述mb为聚合物b中结构单元的相对分子质量。
27、为了说明具体测试方式以及凸显本专利技术的测试方法的有益效果，以下以透明质酸钠-b-聚左旋乳酸接枝共聚物(ha-b-plla)作为检测对象。本领域人员能够理解各种双亲性接枝共聚物均能够适用于本专利技术的方法，以ha-b-plla为举例并不能够构成对本专利技术的限制。
28、所述ha-b-plla无法通过目前已知的方法测得接枝率。其原因主要在于：plla的溶解性很差，能够将plga和pla溶解的有机溶剂(如四氢呋喃、丙酮、dmso等)均无法溶解plla。而本专利技术的方法能够准确有效本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种检测双亲性接枝共聚物的接枝率的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，所述核磁共振测得接枝率其中，
3.根据权利要求1所述的方法，所述亲水性骨架部分来自于聚合物A，所述疏水性接枝部分来自于聚合物B；
4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述聚合物A选自透明质酸盐或其衍生物、硫酸软骨素、肝素、壳聚糖、明胶和结冷胶中的一种或多种；
5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述聚合物A为透明质酸钠，所述聚合物B为聚左旋乳酸，所述双亲性接枝共聚物为透明质酸钠-b-聚左旋乳酸接枝共聚物；
6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述聚左旋乳酸的重均分子量为3kDa～200kDa，比旋光度范围为-155°～-160°；和/或，
7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述透明质酸钠的重均分子量为100kD～2000kDa。
8.根据权利要求5所述的方法，其中，所述透明质酸钠-b-聚左旋乳酸接枝共聚物在所述第一溶剂中的浓度为5mg/ml～20mg/ml。
9.根据权利要求5所述的
10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述第二溶剂和所述第一溶剂的体积比为(0.1-0.2)：1；透明质酸钠-b-聚左旋乳酸接枝共聚物在所述第一溶剂中的浓度为10mg/mL～15mg/mL。
...【技术特征摘要】
1.一种检测双亲性接枝共聚物的接枝率的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，所述核磁共振测得接枝率其中，
3.根据权利要求1所述的方法，所述亲水性骨架部分来自于聚合物a，所述疏水性接枝部分来自于聚合物b；
4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述聚合物a选自透明质酸盐或其衍生物、硫酸软骨素、肝素、壳聚糖、明胶和结冷胶中的一种或多种；
5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述聚合物a为透明质酸钠，所述聚合物b为聚左旋乳酸，所述双亲性接枝共聚物为透明质酸钠-b-聚左旋乳酸接枝共聚物；
6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述聚左旋乳酸的重均分子量为3...
【专利技术属性】
技术研发人员：谷诗伟，李睿智，娄升凤，张堃，
申请(专利权)人：爱美客技术发展股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。