【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于多肽化合物合成，具体涉及一种抗菌肽及其制备方法和应用。
技术介绍
1、金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus)是一种重要的致病性革兰氏阳性菌，是引起临床感染的最常见和致病的病原体之一，能产生多种毒素和侵入性酶，引起多重感染，诸如呼吸道感染、心内膜炎、败血症和尿路感染。随着青霉素等抗生素的应用，金黄色葡萄球菌感染得到了有效控制。然而金黄色葡萄球菌可产生多种抗药性基因，从而导致对抗生素的抗药性，继续危害人类健康。其中，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus，mrsa)已成为引起机会性感染的重要病原菌，对多种临床使用抗生素具有抗药性，给治疗带来很大困难。mrsa已成为威胁全球的公共卫生问题，给社会和患者造成严重的安全威胁。因此新一类抗生素的研制已成为当务之急和国际上的热点。
2、抗菌肽是一类由天然存在或设计合成的肽组成的化合物，它能够抑制或杀死细菌、真菌及其他微生物。抗菌肽作用机制独特，通常能克服传统抗生素所面临的耐药性问题。部分抗菌肽还可以与细菌中靶点蛋白结合，下调细菌生物膜及毒力因子相关基因的表达，抑制细菌生物被膜的形成，多途径发挥抗菌作用。此外，部分抗菌肽具有抗炎活性。细菌感染常伴随炎症，表现为红、肿、热、痛和功能障碍，因此，具有抗炎活性的抗菌肽能够在抑菌的同时发挥抗炎作用，有助于改善感染预后，加速感染的好转。
3、然而，目前抗菌肽本身还存在着较难表达或合成导致的生产成本高等缺陷，已报道的部分兼具抗
技术实现思路
1、为了解决上述技术问题，本申请以海参来源lectin蛋白中抗菌活性片段h9为模板序列进行抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcusaureus，mrsa)抗菌肽的设计优化。h9对金黄色葡萄球菌具有良好的抗菌活性，但对mrsa抗菌效果弱。我们通过氨基酸的替换以增加两亲性，设计合成了一系列多肽序列，其中仅cgs19和cgs20具有显著的抗mrsa活性。此外，基于已报道的部分抗菌肽兼具抗炎活性，我们对设计的一系列多肽进行了抗炎活性测试，意外发现cgs20的具备良好的抗炎作用。
2、具体的，本申请的技术方案如下：
3、本专利技术提供了一种抗菌肽cgs20，抗菌肽cgs20尤其对金黄色葡萄球菌及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌具有较强的抑制作用(mic 3μm)，且溶血性弱，低细胞毒性，说明cgs20对mrsa及金黄色葡萄球菌的抗菌选择性好，毒副作用低。
4、在测试抗菌肽cgs20的抗菌作用时，本专利技术人还意外发现了cgs20具有良好的抗炎作用，对细菌内毒素引起的炎症和促炎因子增多具有明显的抑制作用。
5、一种抗菌肽，所述的抗菌肽的氨基酸序列为：
6、arg-arg-arg-leu-ala-arg-arg-leu-ile-phe-phe-ile-arg-arg-ala-trp，即精氨酸-精氨酸-精氨酸-亮氨酸-丙氨酸-精氨酸-精氨酸-亮氨酸-异亮氨酸-苯丙氨酸-苯丙氨酸-异亮氨酸-精氨酸-精氨酸-丙氨酸-色氨酸。
7、一种抗菌肽衍生物，命名为抗菌肽cgs20，所述抗菌肽衍生物为权利要求1所述的抗菌肽的氨基酸序列的碳端酰胺化的产物
8、arg-arg-arg-leu-ala-arg-arg-leu-ile-phe-phe-ile-arg-arg-ala-trp-nh2。
9、所述抗菌肽cgs20包含16个氨基酸残基，分子量为2185.69da，等电点为12.78。
10、本专利技术还提供上述抗菌肽cgs20的制备方法，包括根据抗菌肽cgs20的氨基酸序列，用自动多肽合成仪合成其全序列，通过hplc反相柱层析脱盐纯化。
11、抗菌肽cgs20在制备抗炎药物或组合物中的应用。
12、抗菌肽cgs20在制备抗菌药物或组合物、防腐剂或动物饲料添加剂中的应用。
13、进一步的，所述应用包括使用抗菌肽cgs20作为主要成分，添加医药学上可接受的载体，制备为抗炎药物、抗菌药物、防腐剂或动物饲料添加剂中的任一种。
14、更进一步的，所述抗菌药物的形式包括但不限于漱口水、内服式药物、外敷式药物。
15、本专利技术的有益效果在于：
16、1.本专利技术的抗菌肽cgs20为人工合成，具有分子量小、人工合成方便，杀菌作用强等优点，此外抗菌肽cgs20还具有极低溶血活性和真核细胞毒性的特点。抗菌肽cgs20对金黄色葡萄球菌及耐药的金黄色葡萄球菌均具有较强的抑菌作用(mic 3μm)，且溶血性弱，低细胞毒性，说明抗菌肽cgs20对mrsa及金黄色葡萄球菌的抗菌选择性好，毒副作用低，优于已报道的lassomycin；
17、2.本专利技术意外发现了抗菌肽cgs20具有良好的抗炎作用，对细菌内毒素引起的炎症和促炎因子增多具有明显的抑制作用，优于已报道cgs7。经小鼠皮肤伤口感染试验验证，抗菌肽cgs20具有良好的伤口抑菌作用，且无明显毒副作用；
18、3.本专利技术的抗菌肽cgs20具有双功能抗mrsa菌的作用机制，其能通过破坏细菌细胞膜完整性发挥抗菌作用，又能在进入细菌胞膜后与甲酸四氢叶酸连接酶结合(结合常数kd:3.68μm)，进而抑制金黄色葡萄球菌叶酸通路。
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1.一种抗菌肽，其特征在于，所述的抗菌肽的氨基酸序列为：Arg-Arg-Arg-Leu-Ala-Arg-Arg-Leu-Ile-Phe-Phe-Ile-Arg-Arg-Ala-Trp。
2.一种抗菌肽衍生物，其特征在于，命名为抗菌肽CGS20，所述抗菌肽衍生物为权利要求1所述的抗菌肽的氨基酸序列的碳端酰胺化的产物Arg-Arg-Arg-Leu-Ala-Arg-Arg-Leu-Ile-Phe-Phe-Ile-Arg-Arg-Ala-Trp-NH2。
3.如权利要求2所述的一种抗菌肽衍生物，其特征在于，所述抗菌肽CGS20包含16个氨基酸残基，分子量为2185.69 Da，等电点为12.78。
4.权利要求2所述的抗菌肽CGS20在制备抗炎药物或组合物中的应用。
5.权利要求2所述的抗菌肽CGS20在制备抗菌药物或组合物、防腐剂或动物饲料添加剂中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种抗菌肽，其特征在于，所述的抗菌肽的氨基酸序列为：arg-arg-arg-leu-ala-arg-arg-leu-ile-phe-phe-ile-arg-arg-ala-trp。
2.一种抗菌肽衍生物，其特征在于，命名为抗菌肽cgs20，所述抗菌肽衍生物为权利要求1所述的抗菌肽的氨基酸序列的碳端酰胺化的产物arg-arg-arg-leu-ala-arg-arg-leu-ile-phe...
【专利技术属性】
技术研发人员：李春磊，夏雪奎，张立新，殷欣，刘安昌，
申请(专利权)人：山东大学齐鲁医院，
类型：发明
国别省市：
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