【技术实现步骤摘要】
本申请涉及生物检测，具体涉及一种同步分析生物源样本中多环芳烃和羟基多环芳烃的前处理方法和检测方法。
技术介绍
1、环境污染物对人体健康造成的危害效应已经成为全球共同关注的重要问题。多环芳烃(polycyclic aromatic hydrocarbons，pahs)是其中非常重要的一类有机污染物，由两个或两个以上的苯环或环戊二烯稠合而成。其广泛存在于自然界中，主要来源于各种有机物或矿物质燃料的热解或不完全燃烧，如煤、煤焦油、石油、木材和香烟等。自然界中存在的母体多环芳烃(parent polycyclic aromatic hydrocarbons，ppahs)及其衍生物有几百种，美国国家环境保护局根据pahs的毒性、在环境中分布的普遍性以及人群暴露的健康风险等，将其中的16种列为优先控制的污染物。ppahs可以通过呼吸、饮食和皮肤吸收等多种途径进入人体，在细胞内质网混合功能氧化酶的作用下被代谢为羟基多环芳烃(hydroxylated polycyclic aromatic hydrocarbons，oh-pahs)。由于个体之间吸收和代谢能力存在差异，仅测定一类物质的含量难以准确评估pahs的真实暴露水平，因此同时测定生物体内这两类物质的含量是指示pahs环境暴露情况的重要方式。pahs有致癌、致畸和致突变作用，可以导致多种不良健康结局。因此，对人群pahs暴露水平的准确测量对于评价pahs暴露对人体健康的影响以及对污染物控制政策的制定都具有重要意义。
2、ppahs具有亲脂性，容易穿过生物膜，进入人体后可以扩散并
3、生物样品不同于植物、土壤等介质，往往存在多种复杂的生物大分子，如脂肪、蛋白质、多肽、色素等，不仅可以与目标物质结合，而且会干扰其准确定量，需要先将目标物质从生物大分子中解离出来。另外，ppahs和oh-pahs的性质有所不同，前者主要存在于脂肪中，后者则主要与葡萄糖醛酸或硫酸结合，导致二者的解离、萃取、净化和测定方法等不尽相同，难以通过一次前处理同时提取分析。因此，目前的检测方法多为仅检测某种生物标本(如毛发、血液、尿液等)中的ppahs或者oh-pahs，不仅不能同时检测ppahs和oh-pahs，而且生物样本不同前处理方法也不同。目前多使用无机碱(如氢氧化钠等)对毛发样品进行前处理，使用葡萄糖醛酸酶和硫酸酯酶对血液或尿液进行前处理分析，其中，解离的关键步骤是将部分葡萄糖醛酸化/硫酸化代谢产物转化为羟基化合物的脱偶联过程。但是，葡萄糖醛酸酶和硫酸酯酶对生物标本中水解及游离态酚类代谢物质的回收会产生负面影响，从而低估酚类代谢物的水平，因此酶促水解并不是量化oh-pahs的理想策略。
4、由于非职业暴露人群体内ppahs和oh-pahs的含量比较低，若针对两类物质分别进行前处理所需要的样品量会比较大，但是由于人体标本的珍贵性和唯一性，常常在样品量上难以满足要求。此外，生物源标本的前处理过程在目标物质浓度测定的整个过程中所占的比重比较大，而环境流行病学研究的样本量往往较大，这就要求前处理方法能够快速实现批量前处理。
5、综上所述，需要开发一个多种生物标本通用、能够实现ppahs和oh-pahs同步测定、大大降低样本量和前处理成本的方法。
技术实现思路
1、本申请提供一种同步分析生物源样本中多环芳烃和羟基多环芳烃的前处理方法和检测方法。本申请提供一种多种生物标本通用、能够实现ppahs和oh-pahs同步分析测定、大大降低样本量和前处理成本的方法。
2、第一方面，本申请提供的一种同步分析生物源样本中多环芳烃和羟基多环芳烃的前处理方法，采用如下技术方案：
3、一种同步分析生物源样本中多环芳烃和羟基多环芳烃的前处理方法，所述前处理方法包括以下步骤：
4、s100、用碱水解法处理所述生物源样本，以水解所述生物源样本中的蛋白质，得到碱性水解液；向所述水解液中先加入破乳剂进行破乳，再加入第一萃取剂并进行离心分离，得到含有ppahs的上清液和下层溶液；
5、用酸水解法处理所述下层溶液，得到酸性水解液；向所述酸性水解液中加入第二萃取剂并进行离心分离，得到含有oh-pahs的上清液；
6、其中，所述破乳剂选自c1～c3有机醇；
7、所述第一萃取剂包含体积比为(7～11):1的正己烷和甲基叔丁基醚；
8、所述第二萃取剂包含体积比(3～5):1的环己烷和乙酸乙酯；
9、s200、处理所述含有ppahs的上清液并得到含有ppahs的待检测溶液：
10、s300、处理所述含有oh-pahs的上清液并得到含有oh-pahs的待检测溶液。
11、在本申请的一些可选实施方案中，所述碱水解法所用碱性溶液选自碱金属氢氧化物的水溶液。
12、在本申请的一些可选实施方案中，所述碱金属氢氧化物的水溶液选自氢氧化钠的水溶液和氢氧化钾的水溶液中至少一种。
13、在本申请的一些具体实施方案中，所述碱金属氢氧化物的水溶液选自氢氧化钾的水溶液。
14、在本申请的一些可选实施方案中，所述碱金属氢氧化物的水溶液的浓度为1～5mol/l；如2mol/l、2.5mol/l、3mol/l、3.5mol/l、4mol/l、4.5mol/l或5mol/l等。
15、在本申请的一些可选实施方案中，所述生物源样本选自液体样本或固体样本；所述液体样本选自血清、血浆和尿液中的至少一种；所述固体样本选自头发、指甲和组织样品中的至少一种。
16、在本申请的一些可选实施方案中，在步骤s100中，各生物源样本的推荐使用量(包括范围和最佳值)如表1所示。
17、表1各生物源样本的推荐使用量(包括范围和最佳值)
18、
19、其中，若生物源样本选自液体样本，所述碱金属氢氧化物的水溶液的浓度选自3.5～4.5mol/l(如3.6mol/l、3.7mol/l、3.8mol/l、3.9mol/l、4mol/l、4.1mol/l、4.2mol/l、4.3mol/l或4.4mol/l等)、用量选自150～250微升(如160微升、170微升、180微升、190微升、200微升、210微升、220微升、230微升或240微升等)。
20、若生物源样本选自固体样本，所述碱金属氢氧化物的水溶液的浓度选自1.5～2.5mol/l(如1.6mol/l、1.7mol/l、1.8mol/l、1.9mo本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种同步分析生物源样本中多环芳烃和羟基多环芳烃的前处理方法，其特征在于，所述前处理方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，所述碱水解法所用碱性溶液选自碱金属氢氧化物的水溶液；
3.根据权利要求2所述的前处理方法，其特征在于，所述生物源样本选自液体样本和/或固体样本；所述液体样本选自血清、血浆和尿液中的至少一种；所述固体样本选自头发、指甲和组织样品中的至少一种；
4.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，所述水解的温度为55～65℃、时间为50～90分钟。
5.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，所述C1～C3有机醇选自甲醇、乙醇、正丙醇和异丙醇中的至少一种；
6.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，所述第一萃取剂包含体积比为(8～10):1的正己烷和甲基叔丁基醚；
7.根据权利要求1至6任一项所述的前处理方法，其特征在于，步骤S200中处理所述含有PPAHs的上清液并得到含有PPAHs的待检测溶液，包括以下步骤：
8.根据权利要求1至6任一项所
9.一种同步分析生物源样本中多环芳烃和羟基多环芳烃的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括权利要求1至8任一项所述前处理方法、检测所述含有PPAHs的待检测溶液中的PPAHs浓度、以及检测所述含有OH-PAHs的待检测溶液中的OH-PAHs浓度；
...【技术特征摘要】
1.一种同步分析生物源样本中多环芳烃和羟基多环芳烃的前处理方法，其特征在于，所述前处理方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，所述碱水解法所用碱性溶液选自碱金属氢氧化物的水溶液；
3.根据权利要求2所述的前处理方法，其特征在于，所述生物源样本选自液体样本和/或固体样本；所述液体样本选自血清、血浆和尿液中的至少一种；所述固体样本选自头发、指甲和组织样品中的至少一种；
4.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，所述水解的温度为55～65℃、时间为50～90分钟。
5.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于，所述c1～c3有机醇选自甲醇、乙醇、正丙醇和异丙醇中的至少一种；
6.根据权利要求1所...
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