【技术实现步骤摘要】
一种猪繁殖与呼吸综合征病毒的棉签拭子产品及应用，属于生命科学。
技术介绍
1、猪繁殖与呼吸综合征(the porcine reproductive and respiratory syndrome，prrs)是一种以母猪生殖功能障碍，如不孕、流产或弱胎，各种年龄猪(特别是仔猪)呼吸困难为特征的高度传染性疾病，已成为世界上最重要的猪疾病之一。该病于1987年在美国首次被发现，并在几年内传播到世界各地，给全球的猪肉产业造成了重大经济损失。猪繁殖与呼吸综合征病毒(prrsv)是猪繁殖与呼吸综合征的直接病原体。prrsv目前尚无特效治疗药，主要采取疫苗接种措施对其进行预防。然而，针对prrsv研制出的商品化疫苗保护作用有限，防控效果并不理想。因此，prrsv感染的早期发现和诊断对于控制其进一步传播、降低经济损失至关重要。
2、检测prrsv的“金标准”方法是从临床样本中分离出病毒的病毒学诊断。然而，菌株的广泛变异性限制了该方法的有效性，且prrsv在细胞培养批次和细胞类型中具有选择性。在寻找替代品的过程中，已经报道了使用免疫组织化学和免疫荧光检测组织中prrsv抗原的方法，但这些方法费时且灵敏度低。基于聚合酶链式反应(pcr)的检测方法因其特异性和敏感性已成为研究的热点。然而，它需要高精度的扩增仪器和精确的扩增率，以及检测扩增产物的复杂程序，不适合在现场或基层实验室中使用。因此，开发一种简单、快速、低成本、具有理想特异性和敏感性的prrsv检测方法是非常必要的。
3、在各种检测技术中，比色生物传感检测方法因其简单
技术实现思路
1、针对当前检测技术的不足，本专利技术的目的在于通过构建一种基于智能手机的猪繁殖与呼吸综合征病毒棉签拭子及其应用的方法，当目标病毒存在时通过夹心法使负载指示剂的显色纳米颗粒与棉签拭子偶联，通过手机软件对比色检测结果图像信息进行采集和智能分析，实现目标病毒的超灵敏检测。
2、本专利技术的技术方案为：
3、一种猪繁殖与呼吸综合征病毒的棉签拭子及应用，包括以下步骤：
4、(1)聚多巴胺载银纳米颗粒的制备
5、将50mg盐酸多巴胺溶解于含200μl 1.25m feso4.7h2o、0.2m h2o2、25ml tris-buffer和25ml无水乙醇的混合液中，室温避光搅拌45min后，10000rpm，10min离心洗涤3次后获得沉淀，冷冻干燥后得到pdans。取2mg pdans超声分散于5ml h2o中，加入1ml 0.278g/ml的柠檬酸钠溶液和新鲜配制的20ml 0.025m的硝酸银溶液，室温下搅拌3h，随后10000rpm离心10min，并用超纯水洗涤3次，获得pdans@ag。
6、(2)信号探针sp的修饰
7、100μl 2μm sp加入到1000μl 2mg/ml pdans@ag溶液中，37℃振荡孵育12h后，用超纯水离心洗涤3遍，重悬于1ml水中，以获得pdans@ag/sp。
8、(3)百里酚酞tp的负载
9、向1ml pdans@ag/sp溶液中加入400μl 10mm tp溶液，37℃振荡孵育2h后，用超纯水离心洗涤3遍，重悬于1ml水中，得到pdans@ag/sp/tp。
10、(4)棉签拭子的活化
11、将棉签拭子浸泡在含2mm kio4和100μl浓硫酸混合溶液中，浸泡体积为800μl，室温下避光过夜，用大量超纯水洗涤3次获得活化的棉签拭子。
12、(5)捕获探针cp的修饰
13、取400μl0.25μm捕获探针cp，放入已活化的棉签拭子37℃温育过夜，用ph为7.4的1/15m磷酸缓冲液洗涤3次后将棉签拭子转移到总体积为400μl 400mm nacnbh3还原剂和1/15m磷酸缓冲液1∶1混合的溶液中37℃孵育2h，后用400μl 1％bsa封闭1h并用1/15m磷酸缓冲液洗涤3次。
14、(6)病毒检测
15、将棉签拭子放入50μl prrsv病毒rna提取液与350μl 1/15m磷酸缓冲液的混合溶液中，37℃孵育30min，用1/15m磷酸缓冲液洗涤3次后，将棉签拭子放入200μl pdans@ag/sp/tp与200μl pb缓冲液的混合溶液中，37℃反应30min，洗涤3次后加入200μl ph值为13的碱性naoh溶液，使得富集在拭子上的显色纳米颗粒发生显色反应，释放出大量颜色信号，利用智能手机测定显色剂tp颜色信号分析，即可对放大后的颜色信号进行获取和分析。
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1.一种猪繁殖与呼吸综合征病毒的棉签拭子产品及应用，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的棉签拭子产品及应用，其特征是所述的显色纳米颗粒表面修饰的的信号探针即Sp序列为：5′-NH2-(CH2)6-AAAAAAACGACAAATGCGTGGTTATCATTTGC-3′，所述的棉签拭子表面修饰的捕获探针即Cp序列为：5′-ACGTGGTGGGCAGGGGCCAGAATAAAAAA-(CH2)6-NH2-3′。
【技术特征摘要】
1.一种猪繁殖与呼吸综合征病毒的棉签拭子产品及应用，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的棉签拭子产品及应用，其特征是所述的显色纳米颗粒表面修饰的的信号探针即sp序列为：...
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