一种微生物来源的生物农药的制备方法技术

本发明专利技术属于医药技术领域，涉及一种微生物来源的生物农药的制备方法，其通过一株筛选到的真菌，该真菌为燕麦镰孢菌Ｆｕｓａｒｉｕｍａｖｅｒｅｎａｃｅｕｍ（ＣｏｒｄａｅｘＦｒ．）Ｓａｃｃ：保藏日期：２０１０年５月１１号；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（ＣＧＭＣＣ），保藏编号ＣＧＭＣＣＮｏ．３８２３。利用本发明专利技术所涉及的种子培养基、发酵培养基和本发明专利技术所使用的工艺流程生产微生物农药，制备的农药具有广谱的预防与治疗农作物病害的作用，对番茄晚疫病、辣椒晚疫病、甘蓝枯萎病有特效。产品质量稳定、高效、无毒、对人体安全，无污染，保护生态环境，能取代化学农药用于农业生产，适应“绿色农业”的发展要求。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物农药领域，涉及，具体涉 及一种微生物农药的菌种筛选、菌液及其制剂的制备方法。
技术介绍
农作物病虫害是造成农作物减产的主要原因之一，病虫害严重的可导致大幅度减 产，甚至颗粒无收。据联合国粮农组织调查，全世界每年被病虫害夺去的谷物收成为20% 40%，由此造成的经济损失达1200亿美元。因此农药在农业生产过程中具有重要地位。当 前国内外农药年生产200多万吨，化学农药占绝对主导地位，但是化学农药造成环境污染、 生态失衡、致畸、致癌、中毒身亡等恶果越来越突出。因此早在1992年召开的“世界环境与 发展大会”明确指出，“要在全球范围内控制化学农药的销售和使用，生物农药的用量应达 60%以上”。目前西方许多国家已逐渐减少化学农药的使用，而改用生物防治和生物农药来取 代化学农药。生物农药的最大优点就是对人畜安全，无毒害，无残留，不污染环境，只杀病虫 害，不易产生抗性，是发展绿色农业的唯一选择。随着我国经济实力的增长和人民健康意识 和环保意识的加强，公众对绿色食品的要求也与日俱增。同时，我国加入世界贸易组织之 后，在国际农产品和食品贸易中，将面对苛刻的农药残留标准，这些都在呼唤无公害生物农 药。当前，国际上生物农药占全部农药的市场份额仅2. 5%左右，其中仅Bt杀虫剂就 占了 90%。在我国，Bt杀虫剂只占市场的2%，棉铃虫病毒杀虫剂占0. 2%，农用抗生素占 9%。根据国内外专家较为一致的看法，今后10年内，生物农药将取代20%以上的化学农 药。因此，生物农药发展潜力是巨大的。
技术实现思路
本专利技术提供一种微生物农药的生产方法。本专利技术生产所用菌种GB-2-8是从自然界中分离出来的2200个菌种中筛选出 来的 Fusarium averenaceum (CordaexFr. ) Sacc (燕麦镰孢菌)。该菌株已经于 2010 年5月11号送交位于北京中关村的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心 (CGMCC)保藏，保藏编号为CGMCC No. 3823。该菌在PDA培养基上呈现砖红色菌丝，无厚 垣孢子，分生孢子只有大孢子，镰刀状，无色，3 4隔，大小为30 54*3 5um。经过 考察培养特征、菌丝形态学、以及从遗传学角度考察其ITS序列，确定该菌株为Fusarium averenaceum (CordaexFr. ) Sacc (燕麦键抱菌),属半知茵亚门(Deuteromycotina)、丝抱纲 (Hyphomycetes)、瘤座孢目 (Tuberculariales)、瘤座孢科(Tuberculariaceae镰孢属 真菌。本专利技术提供一种微生物农药的生产方法，包括原始菌种的活化、摇瓶种子培养、罐 上种子培养、发酵培养、终止发酵、离心、浓缩、添加辅料、可湿性粉剂制备。其生产工艺是脱脂牛奶冻干管菌种一斜面活化一摇瓶种子培养一种子罐培养一发酵罐发酵一 离心获得上清液一添加适量的防腐剂、乳化剂及紫外保护剂一喷雾干燥一加入各种助剂一 过325目筛一袋混一检测一包装所述的种子培养和发酵培养的培养基，其单位容积所含有的各种原料干物质重量 如下种子培养基葡萄糖15-30g/L，花生饼粉 l_5g/L，NH4C1 l_5g/L，KH2P04l-5g/L, MgS04. 7H20 l_5g/L，CH3C00Na l_5g/L，CaC03l_5g/L，常水配制；发酵培养基葡萄糖5_20g/L，花生饼粉5_20g/L，黄豆饼粉5_20g/L，玉米淀粉 20-40g/L，鱼粉 2-10g/L，KH2P041_5g/L，MgS04. 7H20 l_5g/L，NH4N031_5g/L，CH3C00Nal_5g/L，常水配制。本专利技术所述的脱脂牛奶冻干管菌种，是指生产菌种的一种保存方式。它是在培养好的斜面试管中加入所需要比例的无菌脱脂牛奶溶液，使用接菌环轻轻刮下菌丝体并尽量 打散，使之均勻分散成悬浮液。用无菌长滴管将悬浮液分装入无菌洁净安瓿管底部(0.9毫 升/每支)。然后将分装好的安瓿管在-25至-40°C之间的干冰酒精中预冻1小时之后，将 安瓿管放入真空器中，开动真空泵进行干燥，最后封管。本专利技术所述的菌种斜面活化是指打开保存的冻干管，挑取菌种后均勻涂布在斜面 培养基上，于28°C培养7天。本专利技术所述的摇瓶种子培养是指采用菌株生长所需要的碳源、氮源、无机盐等，经 过灭菌后，挖取适量斜面菌丝体，转移到种子摇瓶中，种子摇瓶中在自动旋转摇瓶机上震荡 培养，获得摇瓶种子。本专利技术所述的种子罐培养是指采用菌株生长所需要的碳源、氮源、无机盐、消泡剂 等，经过灭菌后，按照一定的接种量比例(8-16% )，加入摇瓶种子，继续搅拌培养一段时 间，获得种子罐种子。罐上种子培养生产工艺为灭菌前培养基pH = 6. 0-6. 5，通风量为1 0. 8-1. 2， 操作罐压力为0. 5公斤/厘米2，搅拌转数150-200rpm，温度为25_28°C，培养时间为20-26 小时。本专利技术所述的发酵罐培养是指采用菌株生长所需要的碳源、氮源、无机盐、消泡剂 等，经过灭菌后，按照一定的接种量比例(10-15% )，加入发酵罐种子，继续搅拌培养一段 时间，获得发酵代谢产物。发酵培养生产工艺为灭菌前培养基pH = 6. 8-7. 2，接种后通风量为 1 1.0-1.5，操作罐压力为0.5公斤/厘米2，搅拌转数180-220rpm，温度为25-28°C，培养 时间为110-130小时。本专利技术所述的培养过程中使用的消泡剂是指有机硅、聚醚、豆油或者它们的混合 物。本专利技术所述的发酵液的浓缩方法是指在室温、常压下，使用转速为4000rpm的离 心机分离发酵液，收集上清液，应用真空泵进行抽滤，在40-50°C进行水分的蒸发和浓缩。离心获得的发酵上清液，经过浓缩、添加辅料、喷雾干燥即得微生物农药原药。本专利技术所述的添加适量的防腐剂、乳化剂及紫外保护剂是指常使用于农药中的各 种制剂辅料，包括硅酸土、粘土、防腐剂和助剂。所得微生物农药原药经325目超微气流粉碎，并加入同样细度的农药助剂，制得 微生物农药GB-2-8可湿性粉剂。所用农药助剂包括崩解剂、粘结剂、润湿剂、分散剂、填充剂，所述的崩解剂为微晶 纤维素、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素钠中的一种或两种；粘结剂为工业淀粉，羧甲 基纤维素或聚乙烯吡咯烷酮，润湿剂为月桂醇基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠或十二烷基硫 酸钠，分散剂为木质素磺酸钠、羟基萘甲醛聚合物、二丁基萘磺酸钠中的一种或两种，填充 剂为乳糖、硫酸钙、蔗糖、滑石粉或轻质碳酸钙。本专利技术所制备的农药具有如下理化性质A、形状固体粉末B、溶解性溶于水，微溶于乙醇、甲醇、氯仿等有机溶剂C、温度的影响取样品，溶解于水中，100°C作用30分钟，杀菌活性消失；60°C作用 30分钟，杀菌活性降低20% ；样品溶液在室温下放置3天、7天、15天、30天其杀菌效果与 未经放置的样品比较，变化不显著。D、抗紫外线能力样品于阳光下照射3天、7天、15天，30天其杀菌效果与未经紫 外照射的样品比较，变化不显著。酸碱度影响样品溶液在PH= 5. 5-8范围内稳定，杀菌效果无显著变化。E、使用方法微生物农药GB-2-8可湿性粉剂可直接投入盛水的喷雾器中对水喷雾使用。本专利技术的特点1、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种生物来源的微生物农药的制备方法，包括原始菌种的活化、摇瓶种子培养、罐上种子培养、发酵培养、终止发酵、离心、浓缩、添加辅料、可湿性粉剂制备，其特征在于，所使用的原始菌种ＣＧＭＣＣＮｏ．３８２３．的ＧＢ－２－８为Ｆｕｓａｒｉｕｍａｖｅｒｅｎａｃｅｕｍ（ＣｏｒｄａｅｘＦｒ．）Ｓａｃｃ（燕麦镰孢菌），属半知茵亚门（Ｄｅｕｔｅｒｏｍｙｃｏｔｉｎａ）、丝孢纲（Ｈｙｐｈｏｍｙｃｅｔｅｓ）、瘤座孢目（Ｔｕｂｅｒｃｕｌａｒｉａｌｅｓ）、瘤座孢科（Ｔｕｂｅｒｃｕｌａｒｉａｃｅａｅ）、镰孢菌属真菌，菌丝为洋红色，无厚垣孢子，分生孢子只有大孢子，镰刀状，无色，３－４隔，大小为３０～５４×３～５ｕｍ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张怡轩，王勇，吴春福，
申请(专利权)人：沈阳药科大学，
类型：发明
国别省市：89[中国|沈阳]