【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于荧光标记生物样本处理，涉及淬灭剂在荧光淬灭中的应用以及淬灭剂在制备用于荧光标记的生物样本中的应用，具体涉及一种用于荧光淬灭的淬灭剂、淬灭剂在制备用于荧光标记的生物样本中的应用。
技术介绍
1、现阶段荧光染色技术已经在生物医药领域得到了广泛的使用，其中，荧光标记技术(包括免疫荧光标记以及荧光染料标记技术等)是生物医学研究领域使用最广泛染色技术之一，有多种方法和工具可用于实现荧光标记，荧光标记技术主要由探针和检测两部分组成，探针包括荧光染料、荧光蛋白、免疫荧光，检测设备包括荧光显微镜等。由于荧光标记技术可以实现对生物分子和细胞的荧光标记，所以在生物医学研究中具有广泛的应用，如细胞成像、蛋白质相互作用研究、基因表达分析、组织和器官成像、药物筛选和治疗监测等领域。该标记技术具有高度敏感性，多色标记能力及高分辨力，其能够优秀地可视化蛋白质、糖类和小的生物和非生物分子等亚细胞显微结构。
2、然而，大多数的被检测生物样本都具有固有荧光背景，其会减低特异标记荧光信号的信噪比以及对标记信号的检测能力，极大的干扰研究者对特异标记信号的鉴别及检测能力。生物样本固有荧光来源广泛，其可来自组织内天然成分，包括黄酮类化合物、卟啉、叶绿素(在植物中)、胶原蛋白、弹性蛋白、红细胞和脂褐素等。这些成分通常会在可见光谱的绿色和黄色部分具有较强的自发荧光。另外，除了组织固有的自发背景荧光外，免疫染色过程也可能会引入外来的背景荧光，如组织固定中使用醛类化合物(甲醛，福尔马林以及戊二醛等)。这些固定剂通过与蛋白质之间共价结合作用，将细胞组织结构
3、荧光淬灭是指荧光物质的荧光强度降低的任何过程。许多过程都会导致淬灭现象，例如激发态反应、能量转移、配合物的形成和碰撞淬灭。荧光淬灭是一种减少荧光发射的过程。荧光淬灭可以由各种机制引起，包括静态淬灭、动态淬灭以及光漂白等。目前主流的去除生物样本固有荧光的方法是使用自发荧光淬灭试剂，其包括苏丹黑(sudan blackb)，硼氢化物衍生物，以及商用自发荧光淬灭试剂，包括trueblack(biotium)以及trueview(vectorlabs)等。自发荧光淬灭试剂的使用方法简单，其可直接滴加到染色生物样本表面，加入的自发荧光淬灭试剂中的离子可通过碰撞方式，捕获自发荧光光源分子发出的电子，阻止该电子从激发态回归基态进而辐射背景荧光。然而，所有使用自发荧光淬灭试剂去除生物样本固有背景荧光的方案都有几个重要的缺点：
4、第一，生物样本往往含有多种自发荧光分子，且不同的生物样本含有的自发荧光分子种类及数量往往差异很大，因此使用荧光淬灭试剂的效果可能具有很大差异，其很难实现对生物样本固有荧光背景的完全去除。如各类生物样本(石蜡切片、爬片、冰冻组织)，因为组织本身的组份、醛类试剂的固定及高温处理等原因，会导致样品组织及组织内组份(例如黄素、卟啉、植物叶绿素、胶原蛋白、弹性蛋白、红细胞、脂褐素等都会产生较强的自发荧光)等产生显著的自发荧光，进而极大干扰特异荧光标记。
5、第二，自发荧光淬灭试剂在观测样本内一直存在，虽然其可压制样本固有背景荧光，但同时也会降低特异标记荧光的亮度。
6、第三，自发荧光淬灭试剂本身有可能在不同的荧光通道引入新的背景荧光。
7、因此，如何找到一种更为适宜的方式，能够用于去除荧光标记的生物样本存在的固有背景荧光或外来荧光干扰，解决现有的上述方式存在的缺陷，已成为业内诸多一线研究人员亟待解决的问题之一。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供淬灭剂在荧光淬灭中的应用以及淬灭剂在制备用于荧光标记的生物样本中的应用，特别是一种用于荧光淬灭的淬灭剂。本专利技术提供的淬灭剂应用于背景荧光淬灭法对样本固有荧光分子的淬灭具有不可逆性，而且能够实现快速精准的荧光淬灭，并且完全不会影响后期标记的特异荧光分子的亮度，反而由于背景荧光的完全去除，会进一步增强特异荧光标记的信噪比及特异性。
2、本专利技术提供了淬灭剂在荧光淬灭中的应用；
3、所述淬灭剂为提供自由基的淬灭剂；
4、所述自由基包括·oh和/或·ho2。
5、优选的，所述淬灭剂中还包括ho2-；
6、所述淬灭剂为h2o2溶液或含有h2o2的混合液。
7、优选的，所述淬灭剂包括h2o2水溶液、h2o2和naoh混合液、h2o2和nahco3混合液、h2o2和cuso4混合液、h2o2和fecl3混合液、h2o2和过氧化氢酶混合液中的一种或多种；
8、所述荧光淬灭具体为差异荧光淬灭法。
9、优选的，所述差异荧光淬灭法的具体步骤包括以下步骤：
10、1)基于要淬灭的生物样本的荧光激发光波长，调整淬灭光源的波长和强度，将采用液体保护的生物样本和淬灭剂置于盛物装置上，在光源的照射和滤光装置的作用下，对生物样本进行光淬灭后，得到消除荧光后的生物样本；
11、所述生物样本具体为经过前处理的生物组织；
12、所述前处理包括细胞爬片、冰冻切片、包埋、切片、烤片、脱蜡至水和抗原修复中的一步或多步；
13、所述光源的波长在200～1600nm内可调；
14、所述光源光照的强度在10～2000klx内可调。
15、优选的，所述液体保护的液体包括水和/或pbs缓冲液；
16、所述光淬灭的时间为1～300min；
17、所述光淬灭的温度为1～70℃；
18、所述光淬灭的湿度为5％～95％；
19、所述消除荧光后的生物样本包括用于进行荧光标记的生物样本。
20、优选的，所述应用的具体方式为，将淬灭剂和待光淬灭的生物样本一同置于淬灭装置中进行应用；
21、所述淬灭装置，包括：
22、光源；
23、设置在光源发射的光线下方的滤光片；
24、设置在滤光片下方的透明盛物装置；
25、设置在透明盛物装置下方的光反射装置。
26、优选的，所述光源具体为平面板状光源；
27、所述光源包括可以发射多种波长本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.淬灭剂在荧光淬灭中的应用；
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述淬灭剂中还包括HO2-；
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述淬灭剂包括H2O2水溶液、H2O2和NaOH混合液、H2O2和NaHCO3混合液、H2O2和CuSO4混合液、H2O2和FeCl3混合液、H2O2和过氧化氢酶混合液中的一种或多种；
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述差异荧光淬灭法的具体步骤包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述液体保护的液体包括水和/或PBS缓冲液；
6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用的具体方式为，将淬灭剂和待光淬灭的生物样本一同置于淬灭装置中进行应用；
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述光源具体为平面板状光源；
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述光反射装置包括镜面光反射装置；
9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述荧光淬灭包括背景荧光淬灭、自发荧光、外界物质引入荧光和人工荧光染料荧光中的
10.权利要求1～9任意一项所述的应用中的淬灭剂在制备用于荧光标记的生物样本中的应用。
...【技术特征摘要】
1.淬灭剂在荧光淬灭中的应用；
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述淬灭剂中还包括ho2-；
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述淬灭剂包括h2o2水溶液、h2o2和naoh混合液、h2o2和nahco3混合液、h2o2和cuso4混合液、h2o2和fecl3混合液、h2o2和过氧化氢酶混合液中的一种或多种；
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述差异荧光淬灭法的具体步骤包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述液体保护的液体包括水和/或pbs缓冲液；<...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴德华，赵成建，曹丹，刘茂森，
申请(专利权)人：成都明虹天成生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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