【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及免疫分析，具体涉及一种心型脂肪酸结合蛋白的检测试剂盒及其应用。
技术介绍
1、脂肪酸结合蛋白(fatty acidbinding protein，fabp)分布于哺乳动物的心肌、小肠、肝脏、脂肪、脑、表皮等组织细胞中，已发现的fabp包括心脏型(h-fabp)等九种类型。h-fabp特异地存在于心肌组织中，约占心脏全部可溶性蛋白质的4％-8％。h-fabp与心肌细胞内的长链脂肪酸相结合，将其从细胞质膜向脂化和氢化部位运输，从而进入能量代谢体系氧化分解最终生成三磷酸腺苷(atp)，为心肌收缩提供能量。h-fabp是急性心肌梗死(ami)很早期的一个生物标志物。急性心肌梗死时，血清h-fabp在胸痛发生后2小时即出现显著升高，8.5小时左右达到峰值。如果在发病时及时介入诊断，辨别和对症治疗，对于提高患者生存率，改善预后意义重大，已逐渐被认为是心肌梗死早期诊断的重要生化指标之一。
2、传统的心肌标志物测定有心肌肌酸激酶、肌酸激酶同工酶(ck-mb)、肌钙蛋白i(ctni)、肌钙蛋白t(ctnt)和肌红蛋白(myo)等。在检测及时性上，ami发病时，见图1，h-fabp和myo在2小时内即升高，在诊断上具有与myo相同的时效性，明显早于ck-mb、ctni和ctnt(约4-6小时后开始升高，12小时后达到峰值)，由于肌肉组织中的myo含量两倍于心脏，在骨骼肌损伤时myo可大量释放进入血液，而h-fabp特异地存在于心肌组织中，所以h-fabp的特异性优于myo。
3、目前心型脂肪酸结合蛋白(h-fa
技术实现思路
1、为克服上述缺陷，本专利技术提供一种心型脂肪酸结合蛋白的检测试剂盒及其应用。
2、本专利技术提供一种心型脂肪酸结合蛋白的检测试剂盒，包括试剂r1和试剂r2，所述试剂r1包括包括缓冲液、促凝剂、表面活性剂和阻断剂，所述试剂r2包括缓冲液和h-fabp抗体共价偶联纳米微球。
3、进一步的，所述h-fabp抗体共价偶联纳米微球中的h-fabp抗体包括2-4种h-fabp单克隆抗体。
4、进一步的，所述试剂r1和试剂r2的缓冲液各自独立地选自磷酸缓冲液、tris缓冲液、甘氨酸缓冲液、hepes缓冲液、硼酸缓冲液、醋酸缓冲液中的一种或多种，所述试剂r1和所述试剂r2的缓冲液的浓度各自独立地在10-500mm之间，ph值各自独立地在4-9之间。
5、进一步的，所述促凝剂为peg或pvp，所述促凝剂的分子量为400-40000da，所述促凝剂的浓度在0.2-5％(w/v)。
6、进一步的，所述阻断剂为主动阻断剂或被动阻断剂，所述主动阻断剂为鼠抗人hama抗体或兔抗人hama抗体，所述被动阻断剂为鼠igg或兔igg，浓度为0.02-5％。
7、进一步的，所述表面活性剂为tween系列表面活性剂、triton系列表面活性剂中的任意一种或多种，所述表面活性剂的浓度为0.02-0.5％(w/v)，所述tween系列表面活性剂为tween-20、tween-21、tween-40、tween-60、tween-61、tween-80、tween-81或tween-85，triton系列表面活性剂为tritonx-15、triton x-45、triton x-100或triton x-405。
8、进一步的，所述试剂r1和试剂r2还包括保护剂，所述保护剂为牛血清白蛋白(bsa)、小牛血清、卵清蛋白、蔗糖、海藻糖、葡萄糖和甘油中的任意一种或多种，浓度为0.05-20％(w/v)。
9、进一步的，所述试剂r1和试剂r2还包括防腐剂，所述防腐剂为叠氮钠、硫柳汞和proclin300中的任意一种或多种，浓度在0.02％-0.5％(w/v)。
10、进一步的，所述h-fabp抗体共价偶联纳米微球中的纳米微球为聚苯乙烯微球、聚丙烯酸微球和聚丙烯酸酯微球中的任意一种或多种，平均直径为130-380nm，浓度为0.02-0.5％(w/v)。和/或，所述纳米微球的表面修饰有官能团，所述官能团可为羧基或氨基。
11、进一步的，所述试剂盒还包括校准品和质控品，所述校准品和质控品包含缓冲液、防腐剂、保护剂和已知浓度的h-fabp，所述校准品中的h-fabp的浓度为0ng/ml、8.13ng/ml、16.25ng/ml、32.5ng/ml、65ng/ml、130ng/ml以及上述浓度之间的2-6个浓度，所述质控品中的h-fabp的浓度为5-15ng/ml和15-40ng/ml。
12、本专利技术还提供一种如上述的心型脂肪酸结合蛋白的检测试剂盒的制备方法，所述h-fabp抗体共价偶联纳米微球的制备包括以下步骤：
13、s1.使用活化缓冲液稀释纳米微球，之后加入活化剂，在2-37℃条件下进行活化反应0.5-2小时后，离心去上清，向沉淀中加入ph为5.0-8.5的活化缓冲液，分散得到活化的纳米微球悬浊液；
14、s2.向活化的纳米微球悬浊液中加入2-4种h-fabp单克隆抗体，在2-37℃条件下条件下反应3-8小时；
15、s3.加入足量的乙醇胺封闭剂封闭4-18小时；
16、s4.离心去上清，用ph为7的tris缓冲液清洗1-4次，再次离心去上清，用ph为7的tris缓冲液重悬，得到h-fabp抗体共价偶联纳米微球。
17、进一步的，所述活化缓冲液磷酸缓冲液、醋酸缓冲液或mes缓冲液。
18、进一步的，所述活化剂为n-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐。
19、进一步的，所述步骤s2的2-4种h-fabp单克隆抗体同时加入、先后加入或各自分别偶联后合并加入。
20、本专利技术还提供一种心型脂肪酸结合蛋白的检测方法，使用如上述的试剂盒，包括以下步骤：
21、(1)将待测样本、校准品或纯水加入试剂r1中，搅拌混匀，温育约3-5min；
22、(2)再加入试剂r2，搅拌，温育反应25-40s，采用650-700nm检测波长，读取第一点吸光度a1，继续反应3-5min，读取第二点吸光度a2；
23、(3)用公式△od＝a2-a1计算吸光度变化差值，以纯水作空白，将不同浓度校准品的吸光度变化差本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种心型脂肪酸结合蛋白的检测试剂盒，其特征在于，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包括包括缓冲液、促凝剂、表面活性剂和阻断剂，所述试剂R2包括缓冲液和H-FABP抗体共价偶联纳米微球。
2.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述H-FABP抗体共价偶联纳米微球中的H-FABP抗体包括2-4种H-FABP单克隆抗体。
3.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1和试剂R2的缓冲液各自独立地选自磷酸缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸缓冲液、HEPES缓冲液、硼酸缓冲液、醋酸缓冲液中的一种或多种，所述试剂R1和所述试剂R2的缓冲液的浓度各自独立地在10-500mM之间，pH值各自独立地在4-9之间。
4.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述促凝剂为PEG或PVP，所述促凝剂的分子量为400-40000Da，所述促凝剂的浓度在0.2-5％(w/v)；
5.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1和试剂R2还包括保护剂，所述保护剂为牛血清白蛋白(BSA)、小牛血清、卵清蛋白、蔗糖、海藻糖、葡萄糖
6.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述H-FABP抗体共价偶联纳米微球中的纳米微球为聚苯乙烯微球、聚丙烯酸微球和聚丙烯酸酯微球中的任意一种或多种，平均直径为130-380nm，浓度为0.02-0.5％(w/v)；
7.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括校准品和质控品，所述校准品和质控品包含缓冲液、防腐剂、保护剂和已知浓度的H-FABP，所述校准品中的H-FABP的浓度为0ng/mL、8.13ng/mL、16.25ng/mL、32.5ng/mL、65ng/mL、130ng/mL以及上述浓度之间的2-6个浓度，所述质控品中的H-FABP的浓度为5-15ng/mL和15-40ng/mL。
8.一种如权利要求1-7任一项所述的心型脂肪酸结合蛋白的检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述H-FABP抗体共价偶联纳米微球的制备包括以下步骤：
9.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述活化缓冲液磷酸缓冲液、醋酸缓冲液或MES缓冲液；
10.一种心型脂肪酸结合蛋白的检测方法，其特征在于，使用如权利要求1-7任一项所述的试剂盒，包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种心型脂肪酸结合蛋白的检测试剂盒，其特征在于，包括试剂r1和试剂r2，所述试剂r1包括包括缓冲液、促凝剂、表面活性剂和阻断剂，所述试剂r2包括缓冲液和h-fabp抗体共价偶联纳米微球。
2.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述h-fabp抗体共价偶联纳米微球中的h-fabp抗体包括2-4种h-fabp单克隆抗体。
3.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂r1和试剂r2的缓冲液各自独立地选自磷酸缓冲液、tris缓冲液、甘氨酸缓冲液、hepes缓冲液、硼酸缓冲液、醋酸缓冲液中的一种或多种，所述试剂r1和所述试剂r2的缓冲液的浓度各自独立地在10-500mm之间，ph值各自独立地在4-9之间。
4.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述促凝剂为peg或pvp，所述促凝剂的分子量为400-40000da，所述促凝剂的浓度在0.2-5％(w/v)；
5.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂r1和试剂r2还包括保护剂，所述保护剂为牛血清白蛋白(bsa)、小牛血清、卵清蛋白、蔗糖、海藻糖、葡萄糖和甘油中的任意一种或多种，浓度为0.05-20％(w/...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘威，黎琼，陈小茹，吴向东，
申请(专利权)人：深圳上泰生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：
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