【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物分子生物学，具体涉及香青兰内参基因及其引物与应用。
技术介绍
1、香青兰(dracoephalam moidavical l.)是唇形科青兰属一年生草本植物。分布于我国内蒙古自治区、青海省、新疆维吾尔自治区、陕西省北部以及俄罗斯、欧洲、克什米尔地区等地，多生于干燥山地、山谷、河滩处，喜光、耐干旱，适应性强。香青兰是蒙古族与维吾尔族习用药材,是极具开发潜力和民族特色的天然药用植物。以全草入药，味辛、苦、性凉，有清肺解表、晾干止血的功效，用于喉痛、痢疾、吐血等症状。现代医学研究表明，香青兰含有的挥发油、萜类、黄酮类、氨基酸、微量元素等，具有心血管舒张、抗炎、降血脂、防治哮喘等作用。除了作为草药外，香青兰还是制备柠檬香系香料的重要原料，是重要的香料植物。香青兰全株尤其是花中可蒸馏获得挥发油，其挥发油中含有大量挥发性萜类化合物，例如柠檬醛、香叶醇、肉桂醇，具有花香，清香，果香香韵，香气持久稳定，可调配食用、日用等多种类型香精。香青兰多生于干燥山谷、河滩，具有较强的抗旱性，是研究植物抗旱分子机制以及研究分子生态学的优良材料。香青兰是种极具开发潜力的资源植物，目前已对其展开药用、保健、工业等多种用途的开发研究；而对香青兰抗逆性研究还较为罕见，尤其对其抗旱性分子机制研究尚未见报道，关于香青兰的遗传背景与基因研究仍处空白阶段。
2、实时荧光定量pcr技术(qrt-pcr)是检测基因表达的重要方法之一。因其具有灵敏度高、可靠性强、操作简便等优势被广泛用于分子生物学研究中。然而正因为qrt-pcr灵敏性高，其结果的准确
技术实现思路
1、本专利技术要解决的技术问题是香青兰中暂无针对性内参基因。
2、本专利技术的技术方案是香青兰内参基因，所述内参基因为18s rrna、his4、hsp70、28s rrna、arf、cac、ef1α、samdc、gapdh、eif4α、tub或actin中的至少一个；其核苷酸序列分别如seq id no.29～40所示。
3、本专利技术还提供了所述内参基因的扩增引物，所述扩增引物为扩增18s rrna、actin、his4、hsp70、28s rrna、arf、cac、ef1α、samdc、gapdh、eif4α或tub的引物对中的至少一对：扩增18s rrna的引物对如seq id no.1和seq id no.2所示；扩增actin的引物对如seq id no.3和seq id no.4所示；扩增his4的引物对如seq id no.5和seq id no.6所示；扩增hsp70的引物对如seq id no.7和seq idno.8所示；扩增28s rrna的引物对如seq idno.9和seq id no.10所示；扩增arf的引物对如seq idno.11和seq id no.12所示；扩增cac的引物对如seq id no.13和seq id no.14所示；扩增ef1α的引物对如seq id no.15和seqid no.16所示；扩增samdc的引物对如seq id no.17和seq id no.18所示；扩增gapdh的引物对如seq id no.19和seq id no.20所示；扩增eif4α的引物对如seq id no.21和seq idno.22所示；扩增tub的引物对如seq id no.23和seq id no.24所示。
4、本专利技术还提供了所述内参基因和/或所述扩增引物在计算香青兰各组织目标基因表达量中的应用。
5、具体的，所述应用为计算胁迫条件下香青兰各组织目标基因表达量。
6、特别的，所述胁迫为干旱处理。
7、进一步的，所述干旱处理时的目标基因为nox或hpac1。
8、优选的，所述nox的核苷酸序列如seq id no.41。
9、优选的，所述hpac1的核苷酸序列如seq id no.42。
10、本专利技术还提供了一种计算香青兰各组织目标基因表达量的方法，包括如下步骤：
11、a、提取香青兰组织rna，反转录获得cdna；
12、b、以权利要求1所述内参基因进行qrt-pcr；计算目标基因表达量。
13、具体的，所述内参基因为18s rrna、his4、hsp70、28s rrna、arf、cac、ef1α、samdc、gapdh、eif4α、tub或actin中的至少一个。
14、特别的，所述内参基因的扩增引物为扩增18s rrna、actin、his4、hsp70、28srrna、arf、cac、ef1α、samdc、gapdh、eif4α或tub的引物对中的至少一对：扩增18s rrna的引物对如seq id no.1和seq id no.2所示；扩增actin的引物对如seq id no.3和seq idno.4所示；扩增his4的引物对如seq id no.5和seq id no.6所示；扩增hsp70的引物对如seq id no.7和seq id no.8所示；扩增28srrna的引物对如seq id no.9和seq id no.10所示；扩增arf的引物对如seq id no.11和seq id no.12所示；扩增cac的引物对如seq idno.13和seq id no.14所示；扩增ef1α的引物对如seq id no.15和seq id no.16所示；扩增samdc的引物对如seq id no.17和seq id no.18所示；扩增gapdh的引物对如seq id no.19和seq id no.20所示；扩增eif4α的引物对如seq id no.21和seq id no.22所示；扩增tub的引物对如seq id no.23和seq id no.24所示。
15、其中，步骤b中rt-pcr的扩增体系为：模板cdna 1μl，上游引物(10μmol/l)1μl，下游引物(10μmol/l)1μl，2×rapid taq master mix 7μl，ddh2o 10μl，共计20μl。
16、具体的，步骤b中rt-pcr的扩增程序为：95℃预变本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.香青兰内参基因，其特征在于：所述内参基因为18S rRNA、HIS4、HSP70、28S rRNA、ARF、CAC、EF1α、SAMDC、GAPDH、eIF4α、TUB或ACTIN中的至少一个；其核苷酸序列分别如SEQID No.29～40所示。
2.权利要求1所述内参基因的扩增引物，其特征在于：所述扩增引物为扩增18S rRNA、ACTIN、HIS4、HSP70、28S rRNA、ARF、CAC、EF1α、SAMDC、GAPDH、eIF4α或TUB的引物对中的至少一对：扩增18S rRNA的引物对如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示；扩增ACTIN的引物对如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示；扩增HIS4的引物对如SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示；扩增HSP70的引物对如SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所示；扩增28S rRNA的引物对如SEQ IDNo.9和SEQ ID No.10所示；扩增ARF的引物对如SEQ ID No.11和SEQ ID No.12所示；扩增CAC的引物对如SEQ ID N
3.权利要求1所述内参基因和/或权利要求2所述扩增引物在计算香青兰各组织目标基因表达量中的应用。
4.根据权利要求3所述应用，其特征在于：所述应用为计算胁迫条件下香青兰各组织目标基因表达量。
5.根据权利要求4所述应用，其特征在于：所述胁迫为干旱处理。
6.根据权利要求5所述应用，其特征在于：所述干旱处理时的目标基因为NOX或HPAC1。
7.根据权利要求4所述应用，其特征在于：所述NOX的核苷酸序列如SEQ ID No.41；所述HPAC1的核苷酸序列如SEQ ID No.42。
8.一种计算香青兰各组织目标基因表达量的方法，其特征在于：包括如下步骤：
9.根据权利要求8所述方法，其特征在于：步骤b中RT-PCR的扩增体系为：模板cDNA 1μL，上游引物(10μmol/L)1μL，下游引物(10μmol/L)1μL,2×Rapid Taq Master Mix 7μL,ddH2O 10μL，共计20μL。
10.根据权利要求8所述方法，其特征在于：步骤b中RT-PCR的扩增程序为：95℃预变性2min,95℃变性30s,60℃退火30s，72℃延伸15s，循环30次；最终延伸72℃延伸5min，4℃保存。
...【技术特征摘要】
1.香青兰内参基因，其特征在于：所述内参基因为18s rrna、his4、hsp70、28s rrna、arf、cac、ef1α、samdc、gapdh、eif4α、tub或actin中的至少一个；其核苷酸序列分别如seqid no.29～40所示。
2.权利要求1所述内参基因的扩增引物，其特征在于：所述扩增引物为扩增18s rrna、actin、his4、hsp70、28s rrna、arf、cac、ef1α、samdc、gapdh、eif4α或tub的引物对中的至少一对：扩增18s rrna的引物对如seq id no.1和seq id no.2所示；扩增actin的引物对如seq id no.3和seq id no.4所示；扩增his4的引物对如seq id no.5和seq id no.6所示；扩增hsp70的引物对如seq id no.7和seq id no.8所示；扩增28s rrna的引物对如seq idno.9和seq id no.10所示；扩增arf的引物对如seq id no.11和seq id no.12所示；扩增cac的引物对如seq id no.13和seq id no.14所示；扩增ef1α的引物对如seq id no.15和seq id no.16所示；扩增samdc的引物对如seq id no.17和seq id no.18所示；扩增gapdh的引物对如seq id no.19和seq id no.20所示；扩...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈尘，李莎莎，鬲晓敏，寻路路，卜洁，
申请(专利权)人：陕西省西安植物园陕西省植物研究所，
类型：发明
国别省市：
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