【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于免疫检测，具体涉及一种fe3o4@qds标记物、免疫标记物及免疫层析检测多模态分析方法。
技术介绍
1、在生化领域中，通常需要利用与抗原相应的抗体进行抗原检测，而为了便于操作，都是先将与抗原相应的抗体制备成抗原试剂检测盒，在检测过程中，只需要加入抗原试剂检测盒就能完成对抗原的检测。
2、免疫层析技术常用来检测抗原，如胶体金免疫层析技术、彩色微球标记的免疫层析技术、荧光微球标记的免疫层析技术、荧光免疫层析技术、磁性免疫层析技术以及时间分辨荧光免疫层析技术，但是目前所应用的这些免疫层析技术还存在诸多问题，如胶体金免疫层析技术和彩色微球标记的免疫层析技术只能进行定性分析，灵敏度低、只能定性检测、无法定量检测、易误判结果。以量子点、磁性纳米颗粒、镧系元素为标记物的免疫层析技术虽然能实现定量分析，但都只能检测单一信号进行定量分析，检测结果不够准确、具有偶然性。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种fe3o4@qds标记物、免疫标记物及免疫层析检测多模态分析方法，利用所述免疫标记物可实现在单一免疫标记物上检测出磁、荧光双重信号，实现磁、荧光、可见光三重信号并行分析的免疫层析技术，解决定量分析结果偶然性问题，使检测结果更准确。
2、本专利技术提供了一种fe3o4@qds标记物的制备方法，包括以下步骤：在fe3o4磁性纳米颗粒的表面包裹硅壳并进行氨基功能化，得氨基fe3o4磁性纳米颗粒；
3、利用所述氨基fe3o4磁性纳米颗粒与羧基量子点
4、优选的，利用化学沉淀法在fe3o4磁性纳米颗粒的表面包裹硅壳。
5、本专利技术还提供了利用上述制备方法制备得到的fe3o4@qds标记物。
6、本专利技术还提供了一种基于上述fe3o4@qds标记物制备得到的fe3o4@qds@ab免疫标记物。
7、优选的，所述fe3o4@qds@ab免疫标记物上偶联抗原的标记抗体。
8、本专利技术还提供了一种检测抗原或抗体的免疫层析试纸条，包括：样品垫、硝酸纤维素膜、吸水纸和底板；
9、在所述硝酸纤维素膜上制备检测线和质控线，所述检测线上涂覆抗原捕获抗体，所述质控线上涂覆羊抗鼠igg多克隆抗体。
10、本专利技术还提供了一种检测抗原或抗体的免疫层析试剂盒，包括上述免疫层析试纸条和上述fe3o4@qds@ab免疫标记物。
11、优选的，当所述抗原为腺病毒时，所述fe3o4@qds@ab免疫标记物上标记腺病毒02抗体，检测线上涂覆腺病毒捕获抗体ab01。
12、本专利技术还提供了一种非诊断目的的检测抗原或抗体的方法，包括利用上述免疫层析试剂盒中的fe3o4@qds@ab免疫标记物洗脱包含测试者病原体抗原或抗体信息的样本，对洗脱液进行孵育，得检测样品；
13、将所述检测样品滴加到免疫层析试纸条的样品垫上，层析反应15min后判断结果。
14、优选的，所述结果的判断，包括以下任一种：
15、(1)利用磁定量免疫分析仪检测磁信号，同时利用荧光免疫分析仪检测荧光信号，根据磁信号和荧光信号进行双模式定量分析；
16、(2)对试纸条上磁可见光进行拍照，根据灰度值进行半定量分析；
17、(3)直接肉眼定性判读结果。
18、有益效果：本专利技术提供了一种以fe3o4@qds为标记物的新型三模式磁光免疫层析检测系统，用于对抗原或抗体的快速检测，根据在试纸条上同时检测出的磁信号和荧光信号对抗原或抗体进行双定量分析。当无专业检测设备时，根据可见光信号的灰度值进行半定量分析。将具有强磁性和高荧光强度的fe3o4@qds标记物与抗原特异性抗体结合制备出immuno-magqds，用于之后的免疫层析实验。检测原理如图1所示，如用于腺病毒(adv)的检测，将adv添加到上样缓冲液中，再将免疫标记物加入上样缓冲液中，孵育5min后，取60μl样本滴加在层析试纸条的样品垫上，利用毛细力作为驱动使immuno-magqds-adv磁性免疫复合物在硝酸纤维素膜上朝着吸水纸方向不断层析。层析过程中，捕获到adv的免疫标记物会被提前固定在t线上的adv特异性抗体捕获，其余的免疫标记物会继续层析至c线与羊抗鼠igg抗体结合。层析15min后，试纸上t、c线可在紫外光365nm的激发下发射出625nm的红色荧光，可通过荧光免疫分析仪采集荧光信号，之后将试纸插入磁定量免疫分析仪中，采集t、c线上的磁信号，之后使用普通拍照设备对试纸进行可见光图像采集，根据采集到的磁、荧光信号进行标准曲线的绘制进而完成双模式定量分析，根据计算可见光信号灰度值进行半定量分析，最终确定检测adv的浓度。
19、本专利技术在单一免疫标记物可检测出两种信号(磁信号、荧光信号)，能够将大量量子点偶联在磁性纳米颗粒上，层析检测后根据磁定量免疫分析仪和荧光免疫分析仪可以实现在单一标记物上同时检测出两种信号(磁信号、荧光信号)，并根据检测出的磁光信号共同定量分析待测腺病毒浓度。以此提高整个检测的准确性。本专利技术所述试剂盒及检测方法，不局限于应用场景。本专利技术所述试剂盒和检测方法，对于adv的检测，检测灵敏度高、检测范围宽，最低检测限为1.2×103copies/ml，检测范围为(1.2×103-5.0×107)copies/ml。检测范围较同类型免疫层析技术扩宽10倍。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种Fe3O4@QDs标记物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：在Fe3O4磁性纳米颗粒的表面包裹硅壳并进行氨基功能化，得氨基Fe3O4磁性纳米颗粒；
2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，利用化学沉淀法在Fe3O4磁性纳米颗粒的表面包裹硅壳。
3.利用权利要求1或2所述制备方法制备得到的Fe3O4@QDs标记物。
4.一种基于权利要求3所述Fe3O4@QDs标记物制备得到的Fe3O4@QDs@Ab免疫标记物。
5.根据权利要求4所述Fe3O4@QDs@Ab免疫标记物，其特征在于，所述Fe3O4@QDs@Ab免疫标记物上偶联抗原的标记抗体。
6.一种检测抗原或抗体的免疫层析试纸条，其特征在于，包括：样品垫、硝酸纤维素膜、吸水纸和底板；
7.一种检测抗原或抗体的免疫层析试剂盒，其特征在于，包括权利要求6所述免疫层析试纸条和权利要求4或5所述Fe3O4@QDs@Ab免疫标记物。
8.根据权利要求7所述免疫层析试剂盒，其特征在于，当所述抗原为腺病毒时，所述Fe3O4@QDs@Ab免疫标记物上
9.一种非诊断目的的检测抗原或抗体的方法，其特征在于，包括利用权利要求7或8所述免疫层析试剂盒中的Fe3O4@QDs@Ab免疫标记物洗脱包含测试者抗原或抗体信息的样本，对洗脱液进行孵育，得检测样品；
10.根据权利要求9所述方法，其特征在于，所述结果的判断，包括以下任一种：
...【技术特征摘要】
1.一种fe3o4@qds标记物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：在fe3o4磁性纳米颗粒的表面包裹硅壳并进行氨基功能化，得氨基fe3o4磁性纳米颗粒；
2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，利用化学沉淀法在fe3o4磁性纳米颗粒的表面包裹硅壳。
3.利用权利要求1或2所述制备方法制备得到的fe3o4@qds标记物。
4.一种基于权利要求3所述fe3o4@qds标记物制备得到的fe3o4@qds@ab免疫标记物。
5.根据权利要求4所述fe3o4@qds@ab免疫标记物，其特征在于，所述fe3o4@qds@ab免疫标记物上偶联抗原的标记抗体。
6.一种检测抗原或抗体的免疫层析试纸条，其特征在于，包括...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘琪琦，王菲，周喆，李小燕，赵昶旭，柯丽婷，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。