干细胞分化为睾丸间质细胞模型的构建及应用制造技术

本发明专利技术提供一种构建胚胎干细胞定向分化为睾丸间质细胞模型的方法，是将类固醇生成因子１和促黄体生成激素受体质粒共转染入ＥＳ细胞，然后用化合物或生长因子诱导ＥＳ细胞定向分化为睾丸间质细胞。本发明专利技术在细胞层面上对干细胞体外定向分化为睾丸间质细胞模型构建及其应用做了论证，对其中蕴藏的大量生物学信息进行初步探讨，所构建的细胞模型可为研究睾丸间质细胞分泌调节功能影响因素研究的替代模型；可用于以睾丸间质细胞为作用靶细胞的药物药效初步筛选与评价；可利用由干细胞分化而来的睾丸间质细胞移植作为一种新的补充睾酮的方法，提高睾丸间质细胞再生替代治疗的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种构建胚胎干细胞定向分化为睾丸间质细胞模型的方法，主要是将类固醇生成因子１和促黄体生成激素受体质粒共转染入胚胎干细胞，然后用化合物或生长因子诱导胚胎干细胞定向分化为睾丸间质细胞，通过以下步骤构建：将胚胎干细胞进行无饲养层培养，按有效转染试剂手册说明书进行质粒转染，６孔培养板中每孔４×１０↑［５］个ＥＳ细胞，并按以下试剂量操作：取两种待转质粒ＳＦ－１和ＬＨＲ各２μｇ溶于１００μｌ　ＥＣ缓冲液，再加入１６μｌ增强子ｅｎｈａｎｃｅｒ溶液，涡旋１ｓ混匀，室温放置２－５ｍｉｎ；然后加入２５μｌ有效转染溶液，涡旋１０ｓ，室温放置５－１０ｍｉｎ；再加入２．２ｍｌ培养液混匀，转染２４小时更换培养液后，加入诱导剂，５×１０↑［－７］ｍｏｌ／Ｌ维Ａ酸和１×１０↑［－３］ｍｏｌ／Ｌ　８－溴－环磷腺苷共同诱导转染了ＳＦ－１和ＬＨＲ质粒的胚胎干细胞定向分化为睾丸间质细胞，以检测睾丸间质细胞中类固醇合成相关蛋白：类固醇急性调节蛋白、血小板生长因子受体、胆固醇侧链裂解酶Ｐ４５０ｓｃｃ，和３β－羟甾脱氢酶１是否表达和是否具有分泌睾酮功能为评价指标。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：朱丹雁，葛仁山，楼宜嘉，张莹莹，周立民，崔荣，张翔南，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]