【技术实现步骤摘要】
本申请涉及一种可用于提高皮肤胶原蛋白含量的工程化病毒及其应用。
技术介绍
1、皮肤是人体最大的器官，而胶原蛋白是皮肤中的主要成分，含有85-90％的的i型胶原蛋白和10-15％的iii型胶原蛋白。皮肤主要由表皮层和真皮层组成，真皮层包含成纤维细胞，负责生产胶原蛋白和弹性蛋白。胶原蛋白通过提供机械完整性和其他功能维持皮肤的生理状态。皮肤老化由胶原蛋白密度下降、真皮层厚度降低以及重要结构蛋白的合成和更新下降导致。随着年龄增长发生的代谢变化以及成长带来的可见的内在特征均不可避免，例如皮肤干燥、出现皱纹等。吸烟和长期的压力是影响胶原蛋白的外在因素，尤其是吸烟使皮肤内未成熟的胶原蛋白降解，加速胶原蛋白流失造成的皱纹增长。已有研究证明损坏的胶原纤维可以通过替换来重新修复。补充胶原蛋白能够改善皮肤的完整性并延缓皮肤老化，对去除皱纹和皮肤恢复活力均有明显作用。由于高生物兼容性，i型胶原蛋白是医美领域应用最广泛的胶原蛋白。
2、目前胶原蛋白的来源主要包括天然提取、重组胶原蛋白和合成胶原蛋白。天然提取胶原蛋白的原料主要来源自猪、牛、羊和鸡等陆生动物的皮肤、腱和软骨等组织，另外也有部分来源自鱼的皮肤和鳍。尽管来源广泛，但是动物来源的胶原蛋白存在具有免疫原性和传播种属间疾病的风险。重组胶原蛋白和合成胶原蛋白可以避免天然提取胶原蛋白存在的上述风险，并且生产批间稳定，有利于规模化生产。目前重组胶原蛋白生产主要采用大肠杆菌和酵母等表达系统，但是重组蛋白的产量通常比较低，同时重组胶原蛋白在低等细胞中的修饰缺乏，例如在大肠杆菌中胶原蛋白无法进行脯氨酸
技术实现思路
1、本申请提供了一种高效、精准并且更加安全的胶原蛋白补充产品及方法，可解决现有技术中重组胶原蛋白稳定性差、产量低、生产成本高等问题。
2、具体的，本申请涉及：
3、1、一种重组单纯疱疹病毒(hsv)，其携带可在哺乳动物细胞中表达的外源核酸，所述外源核酸的序列包含：hsp47蛋白编码核酸序列及胶原蛋白编码核酸序列。
4、2、根据项1所述的重组hsv，其中所述胶原蛋白编码核酸序列为选自如下胶原蛋白的编码核酸序列：col1a1、col3a1、col4a1和/或col7a1。
5、在一些实施方案中，所述重组hsv携带的所述外源核酸序列包含hsp47蛋白编码核酸序列及col1a1编码核酸序列。
6、在一些实施方案中，所述重组hsv携带的所述外源核酸序列包含hsp47蛋白编码核酸序列及col1a1编码核酸序列，其中所述col1a1编码核酸序列包含如seq id no：1所示的核酸序列或与seq id no：1所示的核酸序列具有约70％、80％、85％、90％、95％或99％以上同一性的核酸序列。在一些实施方案中，所述重组hsv携带的所述外源核酸序列包含hsp47蛋白编码核酸序列及col1a1编码核酸序列，其中所述hsp47编码核酸序列包含如seq idno：2所示的核酸序列或与seq id no：2所示的核酸序列具有约70％、80％、85％、90％、95％或99％以上同一性的核酸序列。在一些实施方案中，所述重组hsv携带的所述外源核酸序列包含hsp47蛋白编码核酸序列及col1a1编码核酸序列，其中所述col1a1编码核酸序列包含如seq id no：1所示的核酸序列或与seq id no：1所示的核酸序列具有约70％、80％、85％、90％、95％或99％以上同一性的核酸序列，且所述hsp47编码核酸序列包含如seq id no：2所示的核酸序列或与seq id no：2所示的核酸序列具有约70％、80％、85％、90％、95％或99％以上同一性的核酸序列。
7、3、根据项1或2所述的重组hsv，其中所述hsv可以是任意对人体正常细胞毒性降低的hsv毒株。在一些实施方案中，所述hsv源于cctcc保藏号为v201810的单纯疱疹病毒或其后代。
8、4、根据项1-3中任一项所述的重组hsv，其下述一种或多种蛋白的基因被敲除或破坏：icp4，icp27，icp22，vhs，icp34.5和vp16。
9、5、根据项1-4中任一项所述的重组hsv，其中所述hsp47蛋白编码核酸序列及胶原蛋白编码核酸序列插入单纯疱疹病毒的相同位置和不同位置。
10、6、根据项1-5中任一项所述的重组hsv，其中所述hsp47蛋白编码核酸序列及胶原蛋白编码核酸序列插入单纯疱疹病毒的选自如下的一个或多个位置：icp4，icp27，icp22和icp34.5。
11、7、根据项1-6中任一项所述的重组hsv，其中所述hsp47蛋白编码核酸序列及胶原蛋白编码核酸序列插入单纯疱疹病毒的icp4和/或icp22和/或icp27基因位置处。
12、在一些实施方案中，所述hsp47蛋白编码核酸序列插入icp27基因位置处。
13、在一些实施方案中，所述hsp47蛋白编码核酸序列插入icp22基因位置处。
14、在一些实施方案中，所述胶原蛋白编码核酸序列插入icp4基因位置处。在一些实施方案中，所述两个拷贝的胶原蛋白编码核酸序列分别插入原icp4位于irs和/或trs的基因位置处。在一些实施方案中，所述hsp47蛋白编码核酸序列插入icp27基因位置处，且所述胶原蛋白编码核酸序列插入icp4基因位置处。在一些实施方案中，所述hsp47蛋白编码核酸序列插入icp22基因位置处，且所述胶原蛋白编码核酸序列插入icp4基因位置处。
15、8.根据项1-7中任一项所述的重组hsv，其中所述hsp47蛋白编码核酸序列及胶原蛋白编码核酸序列由相同启动子或不同启动子启动表达。
16、9、根据项8所述的重组hsv，其中所述hsp47蛋白编码核酸序列及胶原蛋白编码核酸序列由cmv或ef1启动子启动表达。
17、在一些实施方案中，所述hsp47蛋白编码核酸序列由cmv启动子启动表达。
18、在一些实施方案中，所述胶原蛋白编码核酸序列由ef1启动子启动表达。
19、在一些本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种重组单纯疱疹病毒(HSV)，其携带可在哺乳动物细胞中表达的外源核酸序列，所述外源核酸序列包含：Hsp47蛋白编码核酸序列及胶原蛋白编码核酸序列。
2.根据权利要求1所述的重组HSV，其中所述胶原蛋白编码核酸序列为选自如下一种或多种胶原蛋白的编码核酸序列：COL1A1、COL3A1、COL4A1和COL7A1。
3.根据权利要求1或2所述的重组HSV，其中所述HSV源于CCTCC保藏号为V201810的单纯疱疹病毒或其后代。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的重组HSV，其下述一种或多种蛋白的基因被敲除或破坏：ICP4，ICP27，ICP22，VHS，ICP34.5和VP16。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的重组HSV，其中所述Hsp47蛋白编码核酸序列及胶原蛋白编码核酸序列插入单纯疱疹病毒的相同位置或不同位置。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的重组HSV，其中所述Hsp47蛋白编码核酸序列及胶原蛋白编码核酸序列插入单纯疱疹病毒的选自如下的一个或多个蛋白的基因位置：ICP4，ICP27，ICP22和IC
7.包含根据权利要求1-6中任一项所述的重组HSV的基因组序列的核酸。
8.包含根据权利要求1-6中任一项所述的重组HSV的组合物。
9.包含权利要求1-6中任一项所述的重组HSV的工程化细胞。
10.一种补充皮肤胶原蛋白的方法，其包括使用根据权利要求1-6中任一项所述的重组HSV转导细胞，优选为皮肤细胞。
...【技术特征摘要】
1.一种重组单纯疱疹病毒(hsv)，其携带可在哺乳动物细胞中表达的外源核酸序列，所述外源核酸序列包含：hsp47蛋白编码核酸序列及胶原蛋白编码核酸序列。
2.根据权利要求1所述的重组hsv，其中所述胶原蛋白编码核酸序列为选自如下一种或多种胶原蛋白的编码核酸序列：col1a1、col3a1、col4a1和col7a1。
3.根据权利要求1或2所述的重组hsv，其中所述hsv源于cctcc保藏号为v201810的单纯疱疹病毒或其后代。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的重组hsv，其下述一种或多种蛋白的基因被敲除或破坏：icp4，icp27，icp22，vhs，icp34.5和vp16。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的重组...
【专利技术属性】
技术研发人员：李劲风，李小鹏，赵锐，刘家家，周华，孙春阳，田超，赵婧姝，
申请(专利权)人：北京唯源立康生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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