【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，涉及一种检测(1-3)-β-d葡聚糖的免疫层析试纸及其制备方法和应用。
技术介绍
1、(1-3)-β-d葡聚糖广泛存在于真菌细胞壁中，占真菌细胞干质量的50%以上。由d-葡聚糖聚合而成，以β-1,3糖苷键连接的葡萄糖残基骨架作为主链，分支状β-1,6糖苷键连接的葡萄糖残基作为侧链。除结合菌（主要是根霉菌和毛霉菌）外，所有真菌胞壁成分中都含有(1-3)-β-d葡聚糖，以酵母样真菌含量最高，人体细胞、病毒、原核生物等不含该成分，这一特点使其成为检测深部真菌感染的理想标志物。当真菌侵入人体血液或深部组织并引起深部感染时，真菌细胞被吞噬细胞吞噬消化后，从细胞壁中释出(1-3)-β-d葡聚糖，导致血液及体液中该成分显著增加。而当感染浅部组织及定植真菌时，(1-3)-β-d葡聚糖很少释放到血液中，在体液中的含量不高。(1-3)-β-d葡聚糖有2种存在形式：一种是以单链形式存在的低级结构，另一种是以双股螺旋或三股螺旋形式存在的高级结构(1-3)-β-d葡聚糖呈中性，并含有少量的β-1,6糖苷键连接结构，在分子内多羟基作用下，形成致密的三螺旋结构，具有高免疫活性低溶解度的特点。因此，(1-3)-β-d葡聚糖定量检测是诊断深部真菌感染的有力依据，可用于侵袭性真菌病（invasive fungal disease, ifd）的鉴定。
2、由于ifd危险性大，发病率高，越来越成为危害人类健康及生命安全的重要因素，特别是免疫功能低下者或伴有严重基础疾病住院患者等。因此，快速准确的早期诊断深部真菌感染具有重要意义。目前，已
3、荧光免疫层析法应用于ifd检测，具有操作简便、检测快速，对设备要求不高，插卡式读数，结果易于判断，大大缩短了检测时间。为易感人群的检测提供了一种有效的辅助手段。
4、综上所述，目前缺少针对于真菌(1-3)-β-d葡聚糖进行检测的免疫层析试纸，现有检测方法及试剂盒的检测准确度低，灵敏性不够高。如何提供一种检测(1-3)-β-d葡聚糖的免疫层析试纸及其制备方法，无需加热处理的同时提高检测的准确性和灵敏性，已成为目前生物
亟待解决的问题之一。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足和实际需求，本专利技术提供一种检测(1-3)-β-d葡聚糖的免疫层析试纸及其制备方法和应用，能够一次性检测真菌(1-3)-β-d葡聚糖，无需加热处理，灵敏度和准确度高，重复性和稳定性好。
2、为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、第一方面，本专利技术提供了一种检测(1-3)-β-d葡聚糖的免疫层析试纸，所述免疫层析试纸包括样品垫、荧光垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；所述荧光垫包被有荧光微球标记的抗体；所述荧光垫为经过处理的荧光垫，所述处理的方法包括：使用处理液1浸泡荧光垫后烘干，所述处理液1含有硼砂、葡萄糖和牛血清蛋白。
4、本专利技术的荧光免疫层析试纸条能够一次性检测真菌(1-3)-β-d葡聚糖，无需加热处理，灵敏度和准确度高，重复性和稳定性好。
5、本专利技术采用双抗体夹心荧光免疫层析技术，检测人血清样本中的真菌(1-3)-β-d葡聚糖。在荧光垫上包埋荧光微球标记的真菌(1-3)-β-d葡聚糖抗体和荧光微球标记的鸡igy抗体，在检测线（t）和质控线（c）上分别包被真菌(1-3)-β-d葡聚糖抗体和兔抗鸡igy抗体。若检测样本为阳性，则样本中的真菌(1-3)-β-d葡聚糖与荧光微球标记的真菌(1-3)-β-d葡聚糖抗体结合形成复合物，在层析作用下复合物沿纸条向前移动，经过检测线（t）时与预包被的真菌(1-3)-β-d葡聚糖抗体反应，形成免疫复合物而呈现荧光条带，荧光标记鸡igy抗体则在质控线（c）与兔抗鸡igy抗体结合显现荧光条带。若检测样本为阴性，不会形成免疫复合物，在检测线处不会出现条带，仅在质控线（c）出现条带。质控线（c）在检测样本时均应出现条带，所显现的荧光条带是判定层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。使用荧光免疫分析仪扫描检测区得到荧光信号，显示真菌(1-3)-β-d葡聚糖的浓度值。
6、优选地，所述硼砂的浓度为10~25 mmol/l。
7、上述10~25 mmol/l中的具体点值可以选择10 mmol/l、12 mmol/l、14 mmol/l、18mmol/l、20 mmol/l、21 mmol/l、22 mmol/l、23 mmol/l、24 mmol/l、25 mmol/l等。
8、优选地，所述处理液1中葡萄糖的质量百分比为2~4%。
9、上述2~4%中的具体点值可以选择2%、3%、4%等。
10、优选地，所述处理液1中牛血清蛋白的质量百分比为4~8%。
11、上述4~8%中的具体点值可以选择4%、5%、6%、7%、8%等。
12、优选地，所述烘干的时间为2~5 h；温度为30~37℃；湿度小于<30%。
13、上述2~5 h中的具体点值可以选择2 h、3 h、4 h、5 h等。
14、上述30~37℃中的具体点值可以选择30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、35℃、36℃、37℃等。
15、优选地，所述荧光微球标记的抗体包括真菌(1-3)-β-d葡聚糖抗体和鸡igy抗体。
16、优选地，所述荧光微球包括时间分辨荧光微球。
17、优选地，所述荧光微球表面修饰官能团包括羟基。
18、优选地，所述硝酸纤维素膜为经过处理的硝酸纤维素膜。
19、优选地，所述处理的方法包括：处理液2浸泡后烘干。
20、优选地，所述处理液2含有氯化钠和聚乙烯醇。
21、优选地，所述处理液2中氯化钠的质量百分比为0.8~1%。
22、上述0.8~1%中的具体点值可以选择0.8%、0.9%、1%等。
23、优选地，所述处理液2中聚乙烯醇的质量百分比为0.05~0.1%。
24、上述0.05~0.1%中的具体点值可以选择0.05%、0.06%、0.07%、0.08%、0.09%、0.1%等。
25、优选地，所述浸泡的时间为5~20 min。
26、上述5~20 min中的具体点值可以选择5 min、6 min、7 min、8 min、10 min、12min、14 min、16 min、20 min。
27、优选地，所述烘干的时间为2~5 h；温度为30~37℃；湿度小于<30%。
28、上述2~5 h中的具体点值可以选择2 h、3 h、4 h、5本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种检测(1-3)-β-D葡聚糖的免疫层析试纸，其特征在于，所述免疫层析试纸包括样品垫、荧光垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；
2.根据权利要求1所述的免疫层析试纸，其特征在于，所述硼砂的浓度为10~25 mmol/L；
3.根据权利要求1所述的免疫层析试纸，其特征在于，所述荧光微球标记的抗体包括真菌(1-3)-β-D葡聚糖抗体和鸡IgY抗体；
4.根据权利要求1所述的免疫层析试纸，其特征在于，所述硝酸纤维素膜为经过处理的硝酸纤维素膜；
5.根据权利要求1所述的免疫层析试纸，其特征在于，所述样品垫为经过处理的样品垫；
6.一种制备权利要求1-5中任一项所述的免疫层析试纸的方法，其特征在于，所述方法包括：
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述荧光微球标记抗体的方法包括以下步骤：
8.一种检测真菌(1-3)-β-D葡聚糖的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-5中任一项所述的检测真菌(1-3)-β-D葡聚糖的免疫层析试纸。
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂
10.权利要求1-5中任一项所述的检测真菌(1-3)-β-D葡聚糖的免疫层析试纸或权利要求8或9所述的检测真菌(1-3)-β-D葡聚糖的试剂盒在检测真菌中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种检测(1-3)-β-d葡聚糖的免疫层析试纸，其特征在于，所述免疫层析试纸包括样品垫、荧光垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；
2.根据权利要求1所述的免疫层析试纸，其特征在于，所述硼砂的浓度为10~25 mmol/l；
3.根据权利要求1所述的免疫层析试纸，其特征在于，所述荧光微球标记的抗体包括真菌(1-3)-β-d葡聚糖抗体和鸡igy抗体；
4.根据权利要求1所述的免疫层析试纸，其特征在于，所述硝酸纤维素膜为经过处理的硝酸纤维素膜；
5.根据权利要求1所述的免疫层析试纸，其特征在于，所述样品垫为经过处理的样品垫；
6.一种制备权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：翟栓柱，罗迪，付成华，粟艳，周泽奇，
申请(专利权)人：丹娜天津生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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