【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物工程领域，具体公开了一种从酿酒酵母细胞发酵液中提纯β-1,3-葡聚糖的新工艺。
技术介绍
1、β-1,3葡聚糖是一类具有以β-1,3葡聚糖连接的具有多种生物活性的葡萄糖聚合物。应用实验中的功效表现为：保湿、抗炎、抗衰老、去皱、去头屑、退黄、加快修复、增加皮肤弹性、辅助抗菌、增强机体免疫力、辅助降血糖、降血脂改善胃肠功能等。广泛应用在医药、食品、化妆品、动物饲料添加剂等多个领域。
2、具体的，β-1,3葡聚糖能够活化巨噬细胞与嗜中性白血球等，因此能提高白细胞素、细胞分裂素和特殊抗体含量，全面刺激机体免疫系统。那么，机体就有更多准备去抵抗微生物引起的疾病。β-葡聚糖能使受伤机体淋巴细胞产生细胞因子(il-1)的能力迅速恢复正常，有效调节机体免疫机能。大量实验表明，β-葡聚糖可促进体内igm抗体产生，以提高体液免疫能力。这种葡聚糖活化细胞会激发宿主非专一性防御机制，故应用在肿瘤、感染病与治疗创伤方面深受瞩目。经特殊步骤萃取且不含内毒素β-1,3葡聚糖在美国fda已认定是种安全的物质，可添加于一般食品，许多报导显示老鼠口服酵母β-1,3葡聚糖，可增加强腹膜细胞抗菌吞噬作用。
3、酵母等真菌的细胞壁中含有较多量的β-1,3葡聚糖，因此目前的β-1,3葡聚糖主要通过酵母制备，比如利用啤酒产业中的废酵母进行提取，如cn201010214448.5公开了一种同时制备酵母抽提物和β-1，3-葡聚糖的方法，该方法包括啤酒废酵母脱苦除杂，啤酒废酵母的酶解与灭活，酵母抽提物的分离与干燥，β-1，3-葡聚糖的酸碱
4、cn201510159347.5公开了一种提高空间诱变酵母菌株β-葡聚糖含量的培养基及其应用，所述培养基的原料成分组成及含量为：葡萄糖3.45～3.70g、玉米浆3.60～3.95g、酵母膏2.80～3.10g、甘油0.45～0.70g，水补足至100ml；培养条件为：以4％(v/v)的接种量接入50l发酵罐中，内装上述培养基，26-28℃，450r/min下振荡培养72h。是以酿酒酵母细胞壁为原料，采用单因素实验与响应面分析对培养基中的碳源、氮源、无机离子与酶激活剂进行优化，对酿酒酵母突变菌株(saccharomycescerevisiae)fflm2.0016进行发酵罐培养，提高β-葡聚糖的含量。
5、但是上述发酵过程中，需要特定的诱变菌株，β-1,3葡聚糖的产量均不到5g/l，导致成本居高不下，产品缺乏市场竞争力。因此，有必要寻找新的酿酒酵母发酵工艺来提高β-1,3葡聚糖的产量，并相应的寻找合适的提纯方法，以实现工业实际上可行的生产工艺。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种从酿酒酵母细胞发酵液中提纯β-1,3-葡聚糖的新工艺，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
2、本专利技术采用以下的技术方案：
3、一种从酿酒酵母细胞发酵液中提纯β-1,3-葡聚糖的新工艺，包括以下步骤：1)酿酒酵母发酵液的制备，2)β-1,3-葡聚糖的提纯；
4、所述1)酿酒酵母发酵液的制备中，使用以下的初始培养基进行发酵罐培养，包括：
5、
6、进一步的，上述一种从酿酒酵母细胞发酵液中提纯β-1,3-葡聚糖的新工艺，所述1)酿酒酵母发酵液的制备中，初始培养基的酵母接种量为2-6×106个/ml。
7、进一步的，上述一种从酿酒酵母细胞发酵液中提纯β-1,3-葡聚糖的新工艺，所述发酵罐为30l发酵罐。
8、进一步的，上述一种从酿酒酵母细胞发酵液中提纯β-1,3-葡聚糖的新工艺，所述1)酿酒酵母发酵液的制备包括以下具体步骤：
9、11)种子液体的制备
10、将保存的酿酒酵母甘油菌种划线于麦芽汁培养基平板上，放置28～30℃培养箱中培养至长出单菌落；
11、在上述单菌落中挑取饱满的单菌落划线接种于麦芽汁培养基平板上，于28～30℃培养箱中培养1～2天，再挑取饱满的菌种接入液体麦芽汁培养基中，28～30℃，200～250r/min摇瓶培养过夜，得到种子液；
12、12)发酵罐发酵
13、将步骤11)制备所得种子液以11～13％的接种量接入初始培养基中开始发酵培养，发酵培养采用31～33℃，搅拌通气100-150r/min；自发酵培养10h开始补糖，补糖采用预先配制的浓度为200g/ml的蔗糖溶液，每隔12h补糖一次，每次补入1.50～2.0ml/l；发酵0-24h控制在ph6.8-7.2；24-48h后控制在6.7-6.9；最后阶段控制在7.0以上，发酵培养60～72h后终止发酵。
14、进一步的，上述一种从酿酒酵母细胞发酵液中提纯β-1,3-葡聚糖的新工艺，其特征在于，所述2)β-1,3-葡聚糖的提纯包括以下步骤：
15、21)将酿酒酵母发酵液1000-2000g离心后分离酵母泥；
16、22)用去离子水将步骤21)所得酵母泥配制成悬浮液，以酵母干重计悬浮液的重量百分数为25-30％，调节ph至5.5-6.5，然后向悬浮液中加入木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶，在40～65℃下作用16～24h，灭酶活，离心得到上清液和沉淀物；
17、23)向步骤22)得到的沉淀物中加入1～4倍沉淀物重量的碱溶液，其中，碱溶液重量百分浓度为1～5％，在60～90℃下作用2～4h，冷却至室温后1500-2000g离心，去上清，保留沉淀物；
18、24)向步骤23)得到的沉淀物中加入0.2-0.4mol/l的乙酸溶液进行悬浮，其中，沉淀物与乙酸溶液的质量体积比为1∶5，65-70℃处理1h，冷却至室温后离心，洗涤沉淀，得到泥状β-1,3-葡聚糖；
19、25)将步骤24)得到的泥状β-1,3-葡聚糖采用真空冷冻干燥处理25～35h，得到粉状β-1,3-葡聚糖。
20、进一步的，上述一种从酿酒酵母细胞发酵液中提纯β-1,3-葡聚糖的新工艺，本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种从酿酒酵母细胞发酵液中提纯β-1,3-葡聚糖的新工艺，其特征在于，包括以下步骤：1)酿酒酵母发酵液的制备，2)β-1,3-葡聚糖的提纯；
2.根据权利要求1所述的种从酿酒酵母细胞发酵液中提纯β-1,3-葡聚糖的新工艺，其特征在于，所述1)酿酒酵母发酵液的制备中，初始培养基的酵母接种量为2-6×106个/mL。
3.根据权利要求1所述的一种从酿酒酵母细胞发酵液中提纯β-1,3-葡聚糖的新工艺，其特征在于，所述发酵罐为30L发酵罐。
4.根据权利要求1所述的一种从酿酒酵母细胞发酵液中提纯β-1,3-葡聚糖的新工艺，其特征在于，所述1)酿酒酵母发酵液的制备包括以下具体步骤：
5.根据权利要求1所述的一种从酿酒酵母细胞发酵液中提纯β-1,3-葡聚糖的新工艺，其特征在于，所述2)β-1,3-葡聚糖的提纯包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述的一种从酿酒酵母细胞发酵液中提纯β-1,3-葡聚糖的新工艺，其特征在于,所述步骤22)中的木瓜蛋白酶添加量为1500-1800U/L,菠萝蛋白酶的添加量为500-1000U/L。
...【技术特征摘要】
1.一种从酿酒酵母细胞发酵液中提纯β-1,3-葡聚糖的新工艺，其特征在于，包括以下步骤：1)酿酒酵母发酵液的制备，2)β-1,3-葡聚糖的提纯；
2.根据权利要求1所述的种从酿酒酵母细胞发酵液中提纯β-1,3-葡聚糖的新工艺，其特征在于，所述1)酿酒酵母发酵液的制备中，初始培养基的酵母接种量为2-6×106个/ml。
3.根据权利要求1所述的一种从酿酒酵母细胞发酵液中提纯β-1,3-葡聚糖的新工艺，其特征在于，所述发酵罐为30l发酵罐。
4.根据权利要求1所述的一种从酿酒酵母细胞发酵液中提纯β-1,3-葡聚糖的新工艺，其特征在于，所述1)酿酒酵母发酵液的制备包括以下具体步骤：
5.根据权利要求1所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：涂舒欢，杨克栋，覃卫，汪静，杨洪安，
申请(专利权)人：武汉诺见生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。