重组肠道病毒７１型病毒ＶＰ１抗原的纯化方法技术

本发明专利技术涉及基因工程重组蛋白的纯化方法，旨在提供一种重组肠道病毒７１型病毒ＶＰ１抗原的纯化方法。该方法包括：利用大肠杆菌表达生产重组肠道病毒７１型病毒ＶＰ１蛋白，得到该蛋白的包涵体；将包涵体溶解于增溶液中；在水浴和磁力搅拌条件下向复性液中逐滴加入包涵体溶液，然后在搅拌复性４８小时。本发明专利技术提出通过蛋白复性能使以包涵体形式存在的蛋白变成可溶性蛋白，大大提高了表达产物的回收率。采用亲和层析一步纯化，纯度大于９５％。纯化的方法操作简单、方便、省时，有利于大规模的工业化生产。具有成本低廉、工艺简便，纯化蛋白纯度高等优点，可以为ＥＶ７１型诊断试剂的开发和血清流行病学调查提供诊断用抗原。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种重组肠道病毒７１型病毒ＶＰ１抗原的纯化方法，包括以下步骤：　　（１）利用大肠杆菌表达生产重组肠道病毒７１型病毒ＶＰ１蛋白，得到该蛋白的包涵体；　　（２）按每１ｇ包涵体∶１５ｍｌ增溶液的比例，将包涵体溶解于增溶液中；所述增溶液的ｐＨ值为８．５，其组成及配比浓度为：盐酸胍４～６Ｍ、ＥＤＴＡ　１～１０ｍＭ、Ｔｒｉｓ　５～２０ｍＭ，余量为Ｈ２Ｏ；　　（３）在２０～２５℃的水浴和磁力搅拌条件下，向复性液中逐滴加入包涵体溶液，使复性液中的ＶＰ１蛋白浓度控制在０．１～１ｍｇ／ｍｌ；然后在１５℃搅拌复性４８小时；所述复性液的ｐＨ值为７．２，其组成及配比浓度为：ＰＢ　５～２０ｍＭ，Ａｒｇ　０．１～１ｍｏｌ／Ｌ，浓度为１～２０％且分子量为５０００～３００００道尔顿的ＰＥＧ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吴强，周林福，
申请(专利权)人：杭州浙大紫金生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]