【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术总体上涉及的领域为细菌多糖、其纯化、其与多肽的缀合，以及包含这种多糖-多肽缀合物的免疫原性组合物。
技术介绍
1、细菌细胞壁和细胞膜与许多聚合物分子(包括糖缀合物和多糖(ps))有关，它们在细菌中发挥各种结构和功能作用。在革兰氏阴性菌(gram-negative)中，外膜主要包含脂多糖(lps)。革兰氏阳性菌没有外膜，但具有含有特殊多糖的厚肽聚糖层。革兰氏阴性菌和革兰氏阴性菌的一些菌株还含有有助于毒力的结合肽聚糖的荚膜多糖。
2、诱导针对许多ps(包括诸如脑膜炎球菌、hib和肺炎球菌等细菌的那些)的免疫力，可以提供对抗疾病的保护，并且已经研发出许多有效的疫苗。然而，大规模疫苗生产需要同样大规模和具有成本效益的供应的不含其他细胞成分的纯且同质的多糖。一些纯化多糖的传统方法依赖于苛刻的条件(例如浓氢氟酸)，这带来了安全问题，并限制了生产规模的扩大。此外，许多纯化方法在一定程度上降解目标多糖，从而降低产率或产生具有有限或降低免疫原性的低分子量多糖。因此，人们需要更安全、更高产和更有效的多糖生产方法。
3、a组链球菌(group a streptococcus)(gas)是每年在全世界引起700百万例咽炎(“链球菌性咽喉炎”)的主要人类病原体，并且增加严重侵袭性感染、败血症、坏死性筋膜炎、中耳炎和中毒性休克综合征的病例。gas也造成感染后免疫介导的风湿性心脏病(rhd)，这是发展中国家的主要死亡病因。目前约有3000万人受到rhd的影响，每年超过30多万人死亡(60％<70岁)，1150万伤残调整
技术实现思路
1、本文公开了多肽-多糖缀合物，其包含：(a)gas多肽抗原或非gas载体多肽，其包含至少一个非天然氨基酸(nnaa)；(b)纯化的细胞壁多糖或结合肽聚糖的荚膜多糖，其分子量为至少约10kda至至少约40kda。
2、本文描述了包含a组链球菌(gas)c5a肽酶多肽抗原、gas链球菌溶血素o(slo)多肽抗原和多肽-多糖缀合物的免疫原性组合物。多肽-多糖缀合物可包含：(i)化脓性链球菌(streptococcus pyogenes)粘附和分裂(spyad)缀合多肽或其片段，其包含至少一个非天然氨基酸(nnaa)，其中所述至少一个nnaa包含点击化学反应性基团；和(ii)gas多糖或其变体，其缺乏免疫显性n-乙酰氨基葡萄糖(glcnac)侧链。gas多糖或其变体的约8mol％至约20mol％的多糖重复单元可以通过接头衍生。多肽-多糖缀合物的平均分子量可以为约185kda至约700kda、或约190kda至约700kda。
3、本文还公开了从细菌细胞中纯化细胞壁多糖或结合肽聚糖的荚膜多糖的方法，该方法包括：(a)在包含碱和还原剂的溶液中水解所述细菌细胞以形成包含多糖的溶菌产物；和(b)将包含多糖的溶菌产物与胞壁溶解酶(muralytic enzyme)孵育以形成游离多糖溶液。
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1.一种多肽-多糖缀合物，其包含：
2.根据权利要求1所述的多肽-多糖缀合物，其中所述纯化的细胞壁多糖缺乏免疫显性N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)侧链。
3.根据权利要求1或2所述的多肽-多糖缀合物，其中所述GAS多肽抗原是全长GAS多肽抗原或全长GAS多肽抗原的片段。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的多肽-多糖缀合物，其中所述细胞壁多糖是GAS多糖或其变体。
5.根据权利要求4所述的多肽-多糖缀合物，其中所述GAS多糖或其变体的约8mol％至约20mol％的多糖重复单元是通过接头衍生的。
6.根据权利要求4或5所述的多肽-多糖缀合物，其中所述GAS多糖或其变体的约10mol％至约20mol％的多糖重复单元是通过接头衍生的。
7.根据权利要求4-6中任一项所述的多肽-多糖缀合物，其中所述GAS多糖或其变体的约10mol％至约18mol％的多糖重复单元是通过接头衍生的。
8.根据权利要求1-6中任一项所述的多肽-多糖缀合物，其中平均分子量为约185kDa至约700kDa。
9.根据
10.根据权利要求1-9中任一项所述的多肽-多糖缀合物，其中所述多肽-多糖缀合物的平均分子量为约300kDa至约600kDa。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的多肽-多糖缀合物，其中所述多肽-多糖缀合物的平均分子量为约400kDa至约500kDa。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的多肽-多糖缀合物，其中所述至少一个nnAA取代所述GAS多肽抗原或所述非GAS载体多肽中的赖氨酸、亮氨酸、异亮氨酸或精氨酸。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的多肽-多糖缀合物，其中所述至少一个nnAA选自：2-氨基-3-(4-叠氮基苯基)丙酸(pAF)、2-氨基-4-叠氮基丁酸、2-叠氮基-3-苯基丙酸、2-氨基-3-叠氮基丙酸、2-氨基-3-(4-(叠氮基甲基)苯基)丙酸(pAMF)、2-氨基-3-(5-(叠氮基甲基)吡啶-2-基)丙酸、2-氨基-3-(4-(叠氮基甲基)吡啶-2-基)丙酸、2-氨基-3-(6-(叠氮基甲基)吡啶-3-基)丙酸、和2-氨基-5-叠氮基戊酸。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的多肽-多糖缀合物，其中所述至少一个nnAA是pAMF。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的多肽-多糖缀合物，其中所述GAS多肽抗原选自：C5a肽酶、链球菌溶血素O(SLO)、SpyAD、Sib35和Sfb1。
16.根据权利要求1-15中任一项所述的多肽-多糖缀合物，其中所述GAS多肽抗原是SpyAD多肽或其片段。
17.根据权利要求16所述的多肽-多糖缀合物，其中所述SpyAD多肽包含与SEQ ID NO:33至少95％相同的氨基酸序列。
18.根据权利要求16所述的多肽-多糖缀合物，其中所述SpyAD多肽与SEQ ID NO:33至少95％相同。
19.根据权利要求16-18中任一项所述的多肽-多糖缀合物，其中所述SpyAD多肽在SEQID NO:33的K64、K287、K386和K657位置处包含pAMF取代。
20.根据权利要求16-19中任一项所述的多肽-多糖缀合物，其中所述SpyAD多肽包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列。
21.根据权利要求16-19中任一项所述的多肽-多糖缀合物，其中所述SpyAD多肽具有SEQ ID NO:34的氨基酸序列。
22.根据权利要求16-19中任一项所述的多肽-多糖缀合物，其中所述SpyAD多肽包含SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:82或SEQ ID NO:83的氨基酸序列。
23.根据权利要求16-19中任一项所述的多肽-多糖缀合物，其中所述SpyAD多肽具有SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:82或SEQ ID NO:83的氨基酸序列。
24.根据权利要求1-2或4-14中任一项所述的多肽-多糖缀合物，其中所述非GAS载体多肽选自：ADI、铁蛋白、蛋白D和eCRM197。
25.根据权利要求24所述的多肽-多糖缀合物，其中所述非GAS载体多肽为eCRM197。
26.根据权利要求25所述的多肽-多糖缀合物，...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种多肽-多糖缀合物，其包含：
2.根据权利要求1所述的多肽-多糖缀合物，其中所述纯化的细胞壁多糖缺乏免疫显性n-乙酰氨基葡萄糖(glcnac)侧链。
3.根据权利要求1或2所述的多肽-多糖缀合物，其中所述gas多肽抗原是全长gas多肽抗原或全长gas多肽抗原的片段。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的多肽-多糖缀合物，其中所述细胞壁多糖是gas多糖或其变体。
5.根据权利要求4所述的多肽-多糖缀合物，其中所述gas多糖或其变体的约8mol％至约20mol％的多糖重复单元是通过接头衍生的。
6.根据权利要求4或5所述的多肽-多糖缀合物，其中所述gas多糖或其变体的约10mol％至约20mol％的多糖重复单元是通过接头衍生的。
7.根据权利要求4-6中任一项所述的多肽-多糖缀合物，其中所述gas多糖或其变体的约10mol％至约18mol％的多糖重复单元是通过接头衍生的。
8.根据权利要求1-6中任一项所述的多肽-多糖缀合物，其中平均分子量为约185kda至约700kda。
9.根据权利要求1-7中任一项所述的多肽-多糖缀合物，其中平均分子量为约200kda至约700kda。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的多肽-多糖缀合物，其中所述多肽-多糖缀合物的平均分子量为约300kda至约600kda。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的多肽-多糖缀合物，其中所述多肽-多糖缀合物的平均分子量为约400kda至约500kda。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的多肽-多糖缀合物，其中所述至少一个nnaa取代所述gas多肽抗原或所述非gas载体多肽中的赖氨酸、亮氨酸、异亮氨酸或精氨酸。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的多肽-多糖缀合物，其中所述至少一个nnaa选自：2-氨基-3-(4-叠氮基苯基)丙酸(paf)、2-氨基-4-叠氮基丁酸、2-叠氮基-3-苯基丙酸、2-氨基-3-叠氮基丙酸、2-氨基-3-(4-(叠氮基甲基)苯基)丙酸(pamf)、2-氨基-3-(5-(叠氮基甲基)吡啶-2-基)丙酸、2-氨基-3-(4-(叠氮基甲基)吡啶-2-基)丙酸、2-氨基-3-(6-(叠氮基甲基)吡啶-3-基)丙酸、和2-氨基-5-叠氮基戊酸。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的多肽-多糖缀合物，其中所述至少一个nnaa是pamf。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的多肽-多糖缀合物，其中所述gas多肽抗原选自：c5a肽酶、链球菌溶血素o(slo)、spyad、sib35和sfb1。
16.根据权利要求1-15中任一项所述的多肽-多糖缀合物，其中所述gas多肽抗原是spyad多肽或其片段。
17.根据权利要求16所述的多肽-多糖缀合物，其中所述spyad多肽包含与seq id no:33至少95％相同的氨基酸序列。
18.根据权利要求16所述的多肽-多糖缀合物，其中所述spyad多肽与seq id no:33至少95％相同。
19.根据权利要求16-18中任一项所述的多肽-多糖缀合物，其中所述spyad多肽在seqid no:33的k64、k287、k386和k657位置处包含pamf取代。
20.根据权利要求16-19中任一项所述的多肽-多糖缀合物，其中所述spyad多肽包含seq id no:34的氨基酸序列。
21.根据权利要求16-19中任一项所述的多肽-多糖缀合物，其中所述spyad多肽具有seq id no:34的氨基酸序列。
22.根据权利要求16-19中任一项所述的多肽-多糖缀合物，其中所述spyad多肽包含seq id no:77、seq id no:78、seq id no:79、seq id no:81、seq id no:82或seq id no:83的氨基酸序列。
23.根据权利要求16-19中任一项所述的多肽-多糖缀合物，其中所述spyad多肽具有seq id no:77、seq id no:78、seq id no:79、seq id no:81、seq id no:82或seq id no:83的氨基酸序列。
24.根据权利要求1-2或4-14中任一项所述的多肽-多糖缀合物，其中所述非gas载体多肽选自：adi、铁蛋白、蛋白d和ecrm197。
25.根据权利要求24所述的多肽-多糖缀合物，其中所述非gas载体多肽为ecrm197。
26.根据权利要求25所述的多肽-多糖缀合物，其中所述ecrm197具有seq id no:25的序列。
27.根据权利要求1-13中任一项所述的多肽-多糖缀合物，其中所述gas多肽抗原或非gas载体多肽包含表1中所列的多肽的氨基酸序列或由其组成。
28.根据权利要求1-13中任一项所述的多肽-多糖缀合物，其中所述gas多肽抗原或非gas载体多肽包含表1a中所列的多肽的氨基酸序列或由其组成。
29.一种免疫原性组合物，其包含：
30.根据权利要求29所述的免疫原性组合物，其中所述c5a肽酶多肽抗原包含seq idno:29或seq id no:30的氨基酸序列。
31.根据权利要求29或30所述的免疫原性组合物，其中所述c5a肽酶多肽抗原包含与seq id no:29或seq id no:30至少95％相同的氨基酸序列。
32.根据权利要求29-31中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述c5a肽酶多肽抗原具有seq id no:29或seq id no:30的氨基酸序列。
33.根据权利要求29-32中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述slo多肽抗原包含seq id no:31、seq id no:32、seq id no:44、seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47、seq id no:48、seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq idno:53的氨基酸序列。
34.根据权利要求29-33所述的免疫原性组合物，其中所述slo抗原包含与seq id no:31、seq id no:32、seq id no:44、seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47、seq idno:48、seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53至少95％相同的氨基酸序列。
35.根据权利要求29-34中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述slo多肽抗原具有seq id no:31、seq id no:32、seq id no:44、seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47、seq id no:48、seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq idno:53的氨基酸序列。
36.根据权利要求29-35中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述至少一个nnaa选自：2-氨基-3-(4-叠氮基苯基)丙酸(paf)、2-氨基-4-叠氮基丁酸、2-叠氮基-3-苯基丙酸、2-氨基-3-叠氮基丙酸、2-氨基-3-(4-(叠氮基甲基)苯基)丙酸(pamf)、2-氨基-3-(5-(叠氮基甲基)吡啶-2-基)丙酸、2-氨基-3-(4-(叠氮基甲基)吡啶-2-基)丙酸、2-氨基-3-(6-(叠氮基甲基)吡啶-3-基)丙酸、和2-氨基-5-叠氮基戊酸。
37.根据权利要求29-36中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述至少一个nnaa是pamf。
38.根据权利要求29-37中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述spyad缀合多肽或其片段包含与seq id no:33至少95％相同的氨基酸序列。
39.根据权利要求29-38中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述spyad缀合多肽包含作为seq id no:33的片段的氨基酸序列。
40.根据权利要求29-38中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述spyad缀合多肽具有作为seq id no:33的片段的氨基酸序列。
41.根据权利要求29-40中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述spyad缀合多肽在seq id no:33的k64、k287、k386和k657位置处包含pamf取代。
42.根据权利要求29-41中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述spyad缀合多肽包含seq id no:34、seq id no:77、seq id no:78、seq id no:79、seq id no:81、seq id no:82或seq id no:83的氨基酸序列。
43.根据权利要求29-42中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述spyad缀合多肽包含与seq id no:34、seq id no:77、seq id no:78、seq id n0:79、seq id no:81、seq idno:82或seq id no:83至少95％相同的氨基酸序列。
44.根据权利要求29-43中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述spyad缀合多肽具有seq id no:34、seq id no:77、seq id no:78、seq id n0:79、seq id no:81、seq id no:82或seq id no:83的氨基酸序列。
45.根据权利要求29-44中任一项所述的免疫原性组合物，其中所述c5a肽酶多肽抗原包含与seq id no:30至少95％相同的氨基酸序列；所述slo多肽抗原包含与seq id no:53至少95％相同的氨基酸序列；并且所述spyad缀合多肽包含与seq id no:3...
【专利技术属性】
技术研发人员：C·R·贝伦斯，P·阿加瓦尔，L·尹，P·T·戴维，A·A·塞德拉，
申请(专利权)人：VAXCYTE公司，
类型：发明
国别省市：
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