【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于遗传工程领域，具体公开了一种间质细胞的筛选方法及其在结肠癌类器官培养中的应用。
技术介绍
1、类器官（organoid）是由干细胞或者从病人身上提取的肿瘤组织在特定的3d体外微环境下自组织发育而来的、高度模拟体内真实器官特征的小型化的体外器官模型。传统模型相比，类器官最大程度模拟体内相应组织器官的空间结构和生理功能，而提供与人体高度一致的生理/病理系统。肿瘤患者来源类器官(patient derived organoid, pdo)是体外评估药物的有效模型，相较于细胞系(cell lines)、基因工程鼠(geneticallyengineered mouse models, gemms)和人源化异种移植鼠(patient-derived xenografts,pdx)这些传统的研究模型，类器官模型(鼠源类器官mouse-derived organoids, mdo和人源类器官pdo)不但能够取自正常组织和组织癌变过程中各个阶段的肿瘤组织，而且其培养体系简单易操作，成本较低，且具有较高效率，因而得到广大研究人员的青睐，目前类器官的应用领域广阔，类器官作为体外模型，在疾病发生机理、新靶点发现、诊疗新策略探索、药敏检测、新药研发、再生医学等多方向拥有广泛的应用前景，其中肝类器官已被应用于药物疗效毒性以及辅助患者建立个体化治疗方案等。
2、但是目前类器官(pdo)的培养技术仍不够完善，还有许多需要解决的问题。如何快速的扩增pdo，以及目前获得的pdo仍不具备人体内的肿瘤微环境，缺少人体组织中必要的成分，如基质
技术实现思路
1、将肿瘤类器官用于新药筛选和药敏筛选是目前一个非常具有应用前景和各国的药监局正在力推的方向，目前全球范围内还没有一个标准化的消化系统肿瘤的类器官培养试剂盒。本专利技术中以肿瘤患者中占比最大的一类肿瘤结肠癌肿瘤为研究对象，公开了一种间质细胞的筛选方法及其在结肠癌类器官培养中的应用，开发和提供了一种用于快速构建结肠癌类器官的试剂盒及方法以解决现有技术中存在的问题。
2、本专利技术的技术方案如下：
3、一方面，本专利技术公开了一种间质细胞的筛选方法，包括以下步骤：
4、从人体肠道组织中分选出细胞表面标志分子同时满足gp39+cd90+cd34+cd81+和cd45-cd326-cd31-cd146-的肠道间质细胞。
5、进一步的，上述一种间质细胞的筛选方法，所述分选包括以下步骤：将肠道组织清洗消化后，使用gp39、cd90、cd34、cd81和 cd45、cd326、cd31、cd146荧光抗体，利用流式细胞仪分选。
6、另一方面，本专利技术公开了一种人类肠道间质细胞，同时具有gp39+cd90+cd34+cd81+和 cd45-cd326-cd31-cd146-的细胞表面标志物。
7、本专利技术还公开了一种永生化的滋养细胞株，由权利要求2所述的人类肠道间质细胞永生化形成。
8、进一步的，上述一种永生化的滋养细胞株，所述永生化包括以下步骤：通过将sv40大t抗原片段整合入靶细胞人类肠道间质细胞的细胞核内，使其表达来构建永生化细胞系。
9、进一步的，本专利技术还公开了上述人类肠道间质细胞或永生化的滋养细胞株在制备结肠癌类器官中的用途。
10、本专利技术还公开了一种用于构建结肠癌类器官模型的试剂盒，包括同时具有gp39+cd90+cd34+cd81+和 cd45-cd326-cd31-cd146-细胞表面标志物的人类肠道间质细胞或在其基础上制备的永生化的滋养细胞株。
11、进一步的，上述一种用于构建结肠癌类器官模型的试剂盒，
12、包括1）滋养细胞株，2）基础培养基a，3）基础培养基b, 4）matrigel胶，5）组织解离液，6）类器官冻存液，7）试剂耗材暂存区；
13、1）基础培养基a的组分包括dmem/f12 +两性霉素b+庆大霉素；
14、2）基础培养基b包括dmem/f12+10μm rock 抑制剂y27632。
15、本专利技术还公开了上述用于构建结肠癌类器官模型的试剂盒在以下方面的应用，如结肠癌类器官的培养、结肠癌类器官的传代和结肠癌类器官的冻存等。
16、本专利技术具有如下有益效果：申请人从肠道组织中发现了到了一群具有促进肠道组织快速扩增的新的细胞亚群，将这群细胞命名为间质细胞，间质细胞的表面标志分子为gp39+cd90+cd34+cd81+和 cd45-cd326-cd31-cd146-，我们通过试验已经证明这群间质细胞在体外和体内作为滋养细胞均可以促进结肠正常组织和肠癌组织的快速扩增形成pdo，该间质细胞可以替代目前培养方法中增加的各种细胞因子，简化了培养方法，同时培养获得的pdo与结肠癌患者体内的结肠癌组织微环境中含有的免疫细胞相一致，目前大部分培养获得的pdo不含有免疫细胞；另外利用该间质细胞构建pdo的速度比目前已有的方法要快1周，并且我们已将这群间质细胞开发成为永生化细胞株，将这群永生化细胞命名为滋养细胞株，本专利技术中我们以滋养细胞株为基础成功建立和开发了一种新的人结肠癌pdo的构建方法和试剂盒。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种间质细胞的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种间质细胞的筛选方法，其特征在于，所述分选包括以下步骤：将肠道组织清洗消化后，使用gp39、CD90、CD34、CD81、 CD45、CD326、CD31、CD146荧光抗体，利用流式细胞仪分选。
3.一种人类肠道间质细胞，其特征在于，同时具有gp39+CD90+CD34+CD81+和 CD45-CD326-CD31-CD146-的细胞表面标志。
4.一种永生化的滋养细胞株，其特征在于，由权利要求2所述的人类肠道间质细胞永生化形成。
5.根据权利要求4所述的永生化的滋养细胞株，其特征在于，所述永生化包括以下步骤：通过将SV40大T抗原片段整合入靶细胞人类肠道间质细胞的细胞核内，使其表达来构建永生化细胞系。
6.如权利要求3所述的人类肠道间质细胞或权利要4-5任一项所述的永生化的滋养细胞株在制备结肠癌类器官中的用途。
7.一种用于构建结肠癌类器官模型的试剂盒，其特征在于，包括同时具有gp39+CD90+CD34+CD81+和 CD
8.根据权利要求7所述的一种用于构建结肠癌类器官模型的试剂盒，其特征在于，包括1）滋养细胞株，2）基础培养基A，3）基础培养基B, 4）Matrigel胶，5）组织解离液，6）类器官冻存液，7）试剂耗材暂存区；
9.如权利要求8所述的一种用于构建结肠癌类器官模型的试剂盒的应用，其特征在于，包括以下应用中的一种或多种：结肠癌类器官的培养、结肠癌类器官的传代和结肠癌类器官的冻存。
...【技术特征摘要】
1.一种间质细胞的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种间质细胞的筛选方法，其特征在于，所述分选包括以下步骤：将肠道组织清洗消化后，使用gp39、cd90、cd34、cd81、 cd45、cd326、cd31、cd146荧光抗体，利用流式细胞仪分选。
3.一种人类肠道间质细胞，其特征在于，同时具有gp39+cd90+cd34+cd81+和 cd45-cd326-cd31-cd146-的细胞表面标志。
4.一种永生化的滋养细胞株，其特征在于，由权利要求2所述的人类肠道间质细胞永生化形成。
5.根据权利要求4所述的永生化的滋养细胞株，其特征在于，所述永生化包括以下步骤：通过将sv40大t抗原片段整合入靶细胞人类肠道间质细胞的细胞核内，使其表达来构建永生化细胞系。
【专利技术属性】
技术研发人员：梁辉，苏冰，伍宁波，沈琦，刘斗，李桂琴，
申请(专利权)人：苏州思萃免疫技术研究所有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。