【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因工程，具体涉及一种检测男性不孕不育多基因突变的探针组、检测方法及应用。
技术介绍
1、男性不育症是一种影响约7％男性人口的多因素病理状况。男性不育的遗传机理是高度复杂的，因为精液和睾丸的组织学表型是极其异质的，至少有2000个基因参与精子发生。导致男性不育的已知遗传因素的最高频率(25％)是无精子症，但在其他精液和病因分类中发现的遗传异常数量正在不断增加。遗传筛查对其诊断价值、临床决策和适当的遗传咨询具有重要意义。
2、基因检测技术在遗传病的大规模筛查中应用广泛，目前在临床基因检测中比较常见的技术主要包括一代sanger测序、实时定量pcr(real-time quantitative pcr，rt-pcr)、高通量测序(next generation sequencing，ngs)，其中，大型的、国际性的、基于联合体的全基因组研究是发现男性不孕不育症遗传病因的最有希望的方法。
3、现有技术存在以下缺陷和不足：1)一代sanger测序和实时定量pcr的适用范围相似，主要应用于单碱基位点变异或者小片段插入缺失的检测，其优势在于准确性高，但缺点是检测通量较低、耗时长、效率低。2)ngs的出现弥补了这些缺点，极大降低了对多个基因区域同时进行测序的时间和费用，数据准确性高，已被临床广泛用于遗传病诊断，同时更快推动了疾病的研究进展。由于男性不育遗传病因学极为复杂，目前已经发现的涉及基因较多，且变异大多未经报道，采用全基因组测序成本高昂。
4、另外，现有的检测方法往往只是针对几种基因的突
5、因此，如何提供一种改进的检测男性不孕不育多基因突变的方法，以期能够克服现有检测方法的缺陷，实现更快速、更高效、成本更低的体外检测，并大幅度降低对dna起始检测量的要求，而且能够明显提升其最低检出限，节约成本，成为亟待解决的技术问题。
技术实现思路
1、本专利技术就是为了解决上述技术问题，从而提供一种检测男性不孕不育多基因突变的探针组、检测方法及应用。本专利技术的技术目的在于，提供一种更快速、更高效、成本更低的体外检测男性不孕不育多基因突变的探针组及检测方法，以期实现检测的高灵活度、超低起始量、超低检出限以及经济高效的特点。
2、为了实现上述技术目的，本专利技术采用的技术方案如下：
3、本专利技术首先提供了一种检测男性不孕不育多基因突变的探针组，其包含有针对11个基因的探针，所述11个基因为：rsph1基因、tacr3基因、dnah9基因、brdt基因、lrrc6基因、ccdc40基因、tex15基因、fezf1基因、sycp2基因、hydin基因、pkd1基因。
4、进一步的是，所述探针的具体序列如下：
5、rsph1基因的探针序列如seq no.1～seq no.20所示；
6、tacr3基因的探针序列如seq no.21～seq no.35所示；
7、dnah9基因的探针序列如seq no.36～seq no.50所示；
8、brdt基因的探针序列如seq no.51～seq no.66所示；
9、lrrc6基因的探针序列如seq no.67～seq no.84所示；
10、ccdc40基因的探针序列如seq no.85～seq no.101所示；
11、tex15基因的探针序列如seq no.102～seq no.119所示；
12、fezf1基因的探针序列如seq no.120～seq no.137所示；
13、sycp2基因的探针序列如seq no.138～seq no.155所示；
14、hydin基因的探针序列如seq no.156～seq no.173所示；
15、pkd1基因的探针序列如seq no.174～seq no.193所示。
16、本专利技术还提供了一种检测男性不孕不育多基因突变的试剂盒，其包含如上所述的探针组。
17、本专利技术还提供了一种非诊断治疗目的检测男性不孕不育多基因突变的方法，其使用了如上所述的探针组。
18、进一步的是，所述方法为pcr方法。
19、进一步的是，所述方法包括建库、杂交、洗脱、测序。
20、进一步的是，所述建库的dna起始量可低至0.5ng。
21、进一步的是，所述建库的pcr操作为：
22、1)98℃ 2min；
23、2)98℃ 20s；
24、3)60℃ 30s；
25、4)72℃ 30s；
26、5)72℃ 1min；
27、6)4℃保持；
28、步骤2)～5)进行5个循环。
29、进一步的是，所述杂交的pcr操作为：
30、1)95℃ 1min；
31、2)98℃ 20s；
32、3)60℃ 30s；
33、4)72℃ 30s；
34、5)72℃ 5min；
35、6)4℃保持；
36、步骤2)～5)循环9～11次。
37、本专利技术还提供了一种检测男性不孕不育多基因突变的探针组的应用，其是将该探针组制备成检测男性不孕不育多基因突变的试剂盒中的应用。
38、本专利技术的有益效果如下：
39、(1)高度灵活；本专利技术定制设计探针，可检测基因组中任何感兴趣的区域；
40、(2)超低起始量；本专利技术方法的建库起始量低至0.5ng；
41、(3)超低检出限；本专利技术方法的检出限可达0.1％；
42、(4)经济高效；本专利技术方法适合大样本量的分析。
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1.一种检测男性不孕不育多基因突变的探针组，其特征在于，包含有针对11个基因的探针，所述11个基因为：RSPH1基因、TACR3基因、DNAH9基因、BRDT基因、LRRC6基因、CCDC40基因、TEX15基因、FEZF1基因、SYCP2基因、HYDIN基因、PKD1基因。
2.根据权利要求1所述的检测男性不孕不育多基因突变的探针组，其特征在于，所述探针的具体序列如下：
3.一种检测男性不孕不育多基因突变的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1或2所述的探针组。
4.一种非诊断治疗目的检测男性不孕不育多基因突变的方法，其特征在于，使用了如权利要求1或2所述的探针组。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法为PCR方法。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，包括建库、杂交、洗脱、测序。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述建库的DNA起始量低至0.5ng。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述建库的PCR操作为：
9.根据权利要求6所述的方法，其特征在
10.一种检测男性不孕不育多基因突变的探针组的应用，其特征在于，是将该探针组制备成检测男性不孕不育多基因突变的试剂盒中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种检测男性不孕不育多基因突变的探针组，其特征在于，包含有针对11个基因的探针，所述11个基因为：rsph1基因、tacr3基因、dnah9基因、brdt基因、lrrc6基因、ccdc40基因、tex15基因、fezf1基因、sycp2基因、hydin基因、pkd1基因。
2.根据权利要求1所述的检测男性不孕不育多基因突变的探针组，其特征在于，所述探针的具体序列如下：
3.一种检测男性不孕不育多基因突变的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1或2所述的探针组。
4.一种非诊断治疗目的检测男性不孕不育多基因突变的方法，其特征在于，使用了如权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：路芳芳，韩勋领，谢海迎，罗锋，
申请(专利权)人：重庆浦洛通基因医学研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：
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