【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，更具体地，涉及一种检测非小细胞肺癌生物标志物甲基化水平的核酸组合和试剂盒。
技术介绍
1、肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和致死率在恶性肿瘤中占据首位。非小细胞肺癌(nsclc)约占所有肺癌的80％，非小细胞型肺癌包括鳞状细胞癌(鳞癌)、腺癌、大细胞癌。非小细胞肺癌发病率很高，5年生存率很低。其主要原因是早期非小细胞肺癌缺少典型的临床症状，约75％的非小细胞肺癌患者在被确诊时都处于中晚期，或已经出现转移，因此非小细胞肺癌的早期诊断是减少死亡及改善预后的关键因素。目前肺癌诊断常用的方法有影像学检查、痰脱落细胞学和支气管镜检，这些方法容易造成漏诊和误诊，且仪器设备昂贵。
2、因此，探索非小细胞肺癌的早期检测标志物具有重要意义。目前尚缺乏有效的能够用于非小细胞肺癌早期检测的生物标志物。
技术实现思路
1、针对现有技术的缺陷，本专利技术的目的在于提供了一种检测非小细胞肺癌生物标志物甲基化水平的核酸组合和试剂盒，以改善现有技术对非小细胞肺癌检出率低、尤其缺少能够用于非小细胞肺癌(ⅰ期和ⅱa期)早期检测的生物标志物等的技术问题。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了一种检测非小细胞肺癌生物标志物甲基化水平的核酸组合，所述非小细胞肺癌生物标志物选自(a)-(c)所示的多核苷酸分子中的至少一项：
3、(a)seq id no.1所示核苷酸序列的全长或部分区域，所述部分区域至少包括一个cpg二核苷酸位点；和/或，
4、
5、(b)与(a)具有85％以上序列一致性的多核苷酸分子，其cpg二核苷酸位点与(a)保持一致；
6、(c)(a)或(b)中cpg二核苷酸位点发生部分甲基化或全部甲基化的多核苷酸分子。
7、优选地，所述多核苷酸分子选自seq id no.1、seq id no.2、seq id no.3和seqid no.5所示的多核苷酸分子中至少一个。
8、优选地，所述核酸组合包括用于检测所述多核苷酸分子的甲基化水平的甲基化引物对。
9、优选地，所述甲基化引物对选自seq id no.7～8所示的第一甲基化引物对、seqid no.11～12所示的第二甲基化引物对和seq id no.15～16所示的第三甲基化引物对中的至少一对。
10、优选地，所述核酸组合还包括用于检测所述多核苷酸分子的甲基化水平的非甲基化引物对。
11、进一步优选地，所述核酸组合包括如下组合中的至少一组：
12、第一组合，包括seq id no.7～8所示的第一甲基化引物对，和seq id no.9～10所示的第一非甲基化引物对；
13、第二组合，包括seq id no.11～12所示的第二甲基化引物对，和seq id no.13～14所示的第二非甲基化引物对；
14、第三组合，包括seq id no.15～16所示的第三甲基化引物对，和seq id no.17～18所示的第三非甲基化引物对。
15、优选地，所述核酸组合还包括检测探针。
16、进一步优选地，所述核酸组合包括如下组合中的至少一组：
17、第四组合，包括seq id no.7～8所示的第一甲基化引物对，和seq id no.19所示的第一检测探针；
18、第五组合，包括seq id no.11～12所示的第二甲基化引物对，和seq id no.20所示的第二检测探针；
19、第六组合，包括seq id no.15～16所示的第三甲基化引物对，和seq id no.21所示的第三检测探针。
20、优选地，所述检测探针的5’端包含有荧光报告基团，3’端包含有荧光淬灭基团。
21、本专利技术还提供了一种检测非小细胞肺癌的试剂盒，其包含所述核酸组合和其余试剂，所述其余试剂包括dna提取试剂、dna纯化试剂、甲基化转化试剂、扩增试剂、扩增内参基因的引物对以及所述引物对对应的探针和质控品中的一种或多种。
22、本专利技术还提供了所述核酸组合或所述试剂盒在制备非小细胞肺癌诊断产品中的应用。
23、优选地，所述非小细胞肺癌包括ⅰ期非小细胞肺癌和ⅱa期非小细胞肺癌中的至少一种。
24、总体而言，通过本专利技术所构思的以上技术方案与现有技术相比，具有以下有益效果：
25、本专利技术提供的一种检测非小细胞肺癌生物标志物甲基化水平的核酸组合和试剂盒，通过检测样本中多核苷酸分子的甲基化水平能够对早期非小细胞肺癌进行检测，提供了能够用于非小细胞癌早期检测的生物标志物。本专利技术提供的试剂盒对ⅰ期、ⅱa期非小细胞肺癌均具有优异的检测灵敏性，其检测ⅰ期非小细胞肺癌血液样本的灵敏性可达85.7％，检测ⅱa期非小细胞肺癌血液样本的灵敏性可达93.8％，检测健康人血液样本的特异性可达93.7％，能够有效区分早期非小细胞肺癌患者和健康人。
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1.一种检测非小细胞肺癌生物标志物甲基化水平的核酸组合，其特征在于，所述非小细胞肺癌生物标志物选自(a)-(c)所示的多核苷酸分子中的至少一项：
2.根据权利要求1所述的核酸组合，其特征在于，所述多核苷酸分子选自SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.5所示的多核苷酸分子中至少一个。
3.根据权利要求2所述的核酸组合，其特征在于，所述核酸组合包括用于检测所述多核苷酸分子的甲基化水平的甲基化引物对。
4.根据权利要求3所述的核酸组合，其特征在于，所述甲基化引物对选自SEQ ID NO.7～8所示的第一甲基化引物对、SEQ ID NO.11～12所示的第二甲基化引物对和SEQ IDNO.15～16所示的第三甲基化引物对中的至少一对。
5.根据权利要求4所述的核酸组合，其特征在于，所述核酸组合还包括用于检测所述多核苷酸分子的甲基化水平的非甲基化引物对；
6.根据权利要求4所述的核酸组合，其特征在于，所述核酸组合还包括检测探针；
7.根据权利要求6所述的核酸组合，其
8.一种检测非小细胞肺癌的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1至7任一项所述的核酸组合和其余试剂，所述其余试剂包括DNA提取试剂、DNA纯化试剂、甲基化转化试剂、扩增试剂、扩增内参基因的引物对以及所述引物对对应的探针和质控品中的一种或多种。
9.权利要求1至7任一项所述的核酸组合或权利要求8所述的试剂盒在制备非小细胞肺癌诊断产品中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述非小细胞肺癌包括Ⅰ期非小细胞肺癌和Ⅱa期非小细胞肺癌中的至少一种。
...【技术特征摘要】
1.一种检测非小细胞肺癌生物标志物甲基化水平的核酸组合，其特征在于，所述非小细胞肺癌生物标志物选自(a)-(c)所示的多核苷酸分子中的至少一项：
2.根据权利要求1所述的核酸组合，其特征在于，所述多核苷酸分子选自seq id no.1、seq id no.2、seq id no.3和seq id no.5所示的多核苷酸分子中至少一个。
3.根据权利要求2所述的核酸组合，其特征在于，所述核酸组合包括用于检测所述多核苷酸分子的甲基化水平的甲基化引物对。
4.根据权利要求3所述的核酸组合，其特征在于，所述甲基化引物对选自seq id no.7～8所示的第一甲基化引物对、seq id no.11～12所示的第二甲基化引物对和seq idno.15～16所示的第三甲基化引物对中的至少一对。
5.根据权利要求4所述的核酸组合，其特征在于...
【专利技术属性】
技术研发人员：李书杨，万慧，阮彦添，梁嘉琳，袁雨文，王青，
申请(专利权)人：武汉艾米森生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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