【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物检测领域，尤其涉及组合物、检测试剂、检测试剂盒以及在制备检测凝血因子x活性中的应用。
技术介绍
1、凝血因子x(fx)在肝脏内合成，是一种依赖维生素k的凝血因子，其活性部位和氨基末端区的氨基酸顺序与其他依赖维生素k凝血因子(尤其fix)非常相似。fx是处于内源性凝血途径和外源性凝血途径的共同通路。经过内源性(fixa-fviiia)、外源性(fviia-tf)凝血途径的激活，fx转变为活化的fxa。fxa在ca2+存在条件下，于磷脂膜表面与fva形成凝血酶原酶复合物，凝血酶原酶复合物激活凝血酶原使之转为具有酶解活性的凝血酶。fxa除具有蛋白酶解活性外，还有酯酶活性。在血浆中，fxa可因与抗凝血酶或tfpi结合而被灭活。
2、血浆中fx活性水平降低的患者出血严重，仅次于血友病a和血友病b，纯合子或复合杂合子患者有中度至重度出血倾向，包括深部血肿、关节腔积血、月经过多及外科手术后出血。婴儿及新生儿期颅内出血，甚至致命性胃肠道出血或脐带残端出血。这些疾病是由凝血因子x缺乏或缺陷引起的，因此凝血因子x活性检测对疾病诊治具有重要的临床意义。
3、凝血因子x测定方法主要为凝固法，该法是基于检测待测标本对乏因子血浆所致的凝固时间(prothrombin time,pt)延长的纠正能力。将稀释后的待测血浆与因子x缺乏血浆混合后进行pt检测，检测结果与待测血浆中的凝血因子x活性呈负相关。通过使用已知凝血因子x活性的血浆进行系列稀释并与因子x缺乏血浆混合后进行pt检测建立的定标曲线，可以得出待测血浆中凝血因
4、现在国内市场上已经有多家试剂盒用于因子x活性的测定，但均为国外生产，价格昂贵，检测成本高，到货时间长，在临床应用上受限，不能满足市场需求。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术提供了组合物、检测试剂、检测试剂盒以及在制备检测凝血因子x活性中的应用。本专利技术提供了一种凝固法检测因子x活性的试剂盒，具有操作简单、灵敏度高、重复性好、稳定性好的特点，市场竞争优势强。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、本专利技术提供了组合物，包括：不含凝血因子x的血浆和缓冲体系。
4、在本专利技术的一些实施方案中，上述组合物中，所述不含凝血因子x的血浆由德国biomex gmbh公司提供。
5、在本专利技术的一些实施方案中，上述组合物中，所述缓冲体系包括：辛酸钾、甘露醇、甘氨酰甘氨酸、非离子表面活性剂、缓冲剂和/或防腐剂中的一种或多种。
6、在本专利技术的一些实施方案中，上述组合物中，所述组合物的ph值为7.6～8.4。
7、在本专利技术的一些实施方案中，上述组合物中，所述组合物的ph值为8.0。
8、在本专利技术的一些实施方案中，上述组合物中，所述辛酸钾的浓度为0.1～1mm；所述甘露醇的浓度为1～5％(w/v)；所述甘氨酰甘氨酸的浓度为0.5～1.5％(w/v)。
9、在本专利技术的一些实施方案中，上述组合物中，所述辛酸钾的浓度为0.5mm；所述甘露醇的浓度为3％(w/v)；所述甘氨酰甘氨酸的浓度为1％(w/v)。
10、在本专利技术的一些实施方案中，上述组合物中，所述非离子表面活性剂的浓度为0.01～0.1％(w/v)；所述非离子表面活性剂包括：聚氧乙烯(23)月桂醚。
11、在本专利技术的一些实施方案中，上述组合物中，所述非离子表面活性剂的浓度为0.05％(w/v)。
12、在本专利技术的一些实施方案中，上述组合物中，所述缓冲剂的浓度为30～70mm；所述缓冲剂包括：hepes缓冲液、tris缓冲液和/或磷酸盐缓冲液中的一种或多种。
13、在本专利技术的一些实施方案中，上述组合物中，所述缓冲剂包括30～70mm hepes缓冲液。
14、在本专利技术的一些实施方案中，上述组合物中，所述缓冲剂包括50mm hepes缓冲液。
15、在本专利技术的一些实施方案中，上述组合物中，所述防腐剂的浓度为0.01～0.1％(w/v)；所述防腐剂包括：叠氮钠、环丙沙星、硫柳汞、庆大霉素和/或proclin-300中的一种或多种。
16、在本专利技术的一些实施方案中，上述组合物中，所述防腐剂包括0.01～0.1％(w/v)叠氮钠。
17、在本专利技术的一些实施方案中，上述组合物中，所述防腐剂包括0.05％(w/v)叠氮钠。
18、本专利技术还提供了检测试剂，包括上述组合物以及可接受的助剂。
19、本专利技术还提供了检测试剂盒，包括上述组合物和/或如上述检测试剂以及可接受的载体或装置。
20、本专利技术还提供了上述组合物、上述检测试剂和/或上述检测试剂盒在制备检测凝血因子x活性的产品中的应用。
21、在本专利技术的一些实施方案中，上述应用中，所述检测包括如下步骤：
22、s1：取预处理的待测样本与所述组合物、所述检测试剂和/或所述检测试剂盒混合，孵育，获得混合血浆；
23、s2：取所述混合血浆与凝血酶原时间测定试剂混合，孵育，获得吸光度值；
24、s3：根据所述吸光度值与标准曲线，获得所述待测样本的凝血因子x活性。
25、在本专利技术的一些实施方案中，上述应用中，所述检测s1中所述预处理包括采用稀释液稀释的步骤；所述稀释液与所述待测样本的体积为19:1。
26、在本专利技术的一些实施方案中，上述应用中，所述检测s1中所述孵育的温度为37℃，时间为2min。
27、在本专利技术的一些实施方案中，上述应用中，所述检测s1中所述待测样本与所述组合物、所述检测试剂和/或所述检测试剂盒的体积比为1:1。
28、在本专利技术的一些实施方案中，上述应用中，所述检测s2中所述混合血浆与所述凝血酶原时间测定试剂的体积比为1:1。
29、在本专利技术的一些实施方案中，上述应用中，所述检测s2中所述孵育的温度为37℃，时间为3min。
30、本专利技术提供了组合物，包括：不含凝血因子x的血浆和缓冲体系。
31、本专利技术的有益效果包括：
32、(1)、本专利技术所述因子x缺乏血浆中同时含有辛酸钾和聚氧乙烯(23)月桂醚能够有效提高本专利技术试剂盒的灵敏度。
33、(2)、本专利技术所述因子x缺乏血浆中同时含有甘露醇和甘氨酰甘氨酸能够有效降低冻干过程对因子x缺乏血浆造成的影响。
34、(3)、本专利技术所述因子x缺乏血浆中同时含有甘氨酰甘氨酸和聚氧乙烯(23)月桂醚能够有效提高血浆稳定性。
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1.组合物，其特征在于，包括：不含凝血因子X的血浆和缓冲体系。
2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述缓冲体系包括：辛酸钾、甘露醇、甘氨酰甘氨酸、非离子表面活性剂、缓冲剂和/或防腐剂中的一种或多种。
3.如权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述辛酸钾的浓度为0.1～1mM；所述甘露醇的浓度为1～5％(w/v)；所述甘氨酰甘氨酸的浓度为0.5～1.5％(w/v)。
4.如权利要求2或3所述的组合物，其特征在于，所述非离子表面活性剂的浓度为0.01～0.1％(w/v)；所述非离子表面活性剂包括：聚氧乙烯(23)月桂醚。
5.如权利要求2至4任一项所述的组合物，其特征在于，所述缓冲剂的浓度为30～70mM；所述缓冲剂包括：HEPES、Tris和/或磷酸盐缓冲液中的一种或多种。
6.如权利要求2至5任一项所述的组合物，其特征在于，所述防腐剂的浓度为0.01～0.1％(w/v)；所述防腐剂包括：叠氮钠、环丙沙星、硫柳汞、庆大霉素和/或Proclin-300中的一种或多种。
7.检测试剂，其特征在于，包括如权利
8.检测试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1至6任一项所述的组合物和/或如权利要求7所述的检测试剂以及可接受的载体或装置。
9.如权利要求1至6任一项所述的组合物、如权利要求7所述的检测试剂和/或如权利要求8所述的检测试剂盒在制备检测凝血因子X活性的产品中的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述检测包括如下步骤：
...【技术特征摘要】
1.组合物，其特征在于，包括：不含凝血因子x的血浆和缓冲体系。
2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述缓冲体系包括：辛酸钾、甘露醇、甘氨酰甘氨酸、非离子表面活性剂、缓冲剂和/或防腐剂中的一种或多种。
3.如权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述辛酸钾的浓度为0.1～1mm；所述甘露醇的浓度为1～5％(w/v)；所述甘氨酰甘氨酸的浓度为0.5～1.5％(w/v)。
4.如权利要求2或3所述的组合物，其特征在于，所述非离子表面活性剂的浓度为0.01～0.1％(w/v)；所述非离子表面活性剂包括：聚氧乙烯(23)月桂醚。
5.如权利要求2至4任一项所述的组合物，其特征在于，所述缓冲剂的浓度为30～70mm；所述缓冲剂包括：hepes、tris和...
【专利技术属性】
技术研发人员：谢永华，周小霞，
申请(专利权)人：上海太阳生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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