【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，具体涉及一种nfe2l1蛋白的ntd多肽及其在制备抗肿瘤药物中的用途。
技术介绍
1、nfe2l1(nuclear factor,erythroid 2like 1)蛋白是一种转录因子，属于nfe2l家族，参与了细胞内抗氧化应激、细胞周期和胰岛素稳态等重要生物学过程。全长nfe2l1蛋白约120-140kda，氨基酸共772个。nfe2l1蛋白含有n端区域(ntd)、转录激活域1(ad1)、转录激活域2(ad2)、dna结合区域(dbd)、c端区域(ctd)等主要的功能结构区域。
2、而nfe2l1的ntd结构域是其锚定于细胞膜系统的结构，将ntd结构切除有利于nfe2l1蛋白进入细胞核，而残留的ntd结构的功能目前是未知的。nfe2l1基因在人类各组织器官中普遍表达且对环境因素十分敏感，辐射、营养、代谢产物、各种药物或重金属的氧化刺激乃至环境温度都能引起nfe2l1基因的差异表达。nfe2l1的分子功能涉及调控氧化还原稳态、糖脂代谢稳态、蛋白质周转，生理功能涉及抗氧化解毒、细胞增殖与凋亡、组织器官发育与功能特化、癌症发生、炎症反应和免疫应答等，其在慢性系统性疾病如慢性炎症、癌症、糖尿病、肥胖、神经退行性疾病等疾病中的功能提示该蛋白具有潜在的临床应用价值。然而由于转录因子直接调控大量下游基因表达，涉及到的生物学功能广泛，往往不能作为临床应用研究的靶标分子。同样，单纯对nfe2l1的过表达或敲低(激活或抑制)都会引起系统性疾病的发生，如组织器官发育不良、神经退行性疾病、糖尿病等。
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技术实现思路
1、针对上述技术问题，本专利技术的专利技术人通过构建nfe2l1的ntd氨基酸序列的多肽，并通过蛋白质免疫印迹方法验证了ntd多肽能够正常表达，进而意外发现了nfe2l1的ntd结构域多肽seq id no:1所示的多肽能够显著抑制肿瘤的生长。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案为：
3、第一方面，本专利技术提供了一种nfe2l1蛋白的ntd多肽，所述ntd多肽单体的氨基酸序列如seq id no:1所示。
4、在本专利中，专利技术人独辟蹊径，通过构建ntd氨基酸序列的多肽(等同于nfe2l1蛋白的第1-130氨基酸区域，即nfe2l1全长蛋白的ntd结构域)，并通过蛋白质免疫印迹方法验证了ntd多肽能够正常表达，进而原始创新性发现了nfe2l1的ntd结构域的抗癌功能。专利技术人将ntd多肽稳定过表达的hepg2细胞系进行免疫缺陷小鼠荷瘤实验，结果发现ntd多肽具有显著抑制肿瘤生长的作用。
5、进一步地，所述ntd多肽还包括将seq id no:1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加，且具有抗肿瘤功能的由seq id no:1衍生的多肽。
6、衍生ntd多肽通过对氨基酸序列为seq id no:1的ntd多肽的序列进行修改、取代、缺失和添加，以此维持甚至增强其针对抑制肿瘤细胞的活性和特异性，使其适合作为潜在的抗肿瘤药物或治疗方法。
7、第二方面，本专利技术还提供了上述多肽的编码基因。
8、进一步地，所述编码基因的核苷酸序列如seq id no:2所示。
9、第三方面，本专利技术提供了上述编码基因的重组载体、转基因细胞系或重组菌。
10、进一步地，所述重组载体为将上述氨基酸序列为seq id no:1的ntd多肽的编码基因插入plvx-egfp载体中，得到表达所述多肽的重组载体。
11、进一步地，所述转基因细胞系是将所述的重组载体导入到宿主细胞中得到转基因细胞系，其中所述宿主细胞为肝癌组织细胞。
12、进一步地，所述肝癌组织细胞为hepg2细胞。
13、专利技术人经试验探究发现，通过将编码本专利技术所述ntd多肽的编码基因插入plvx-egfp载体中制备得到表达所述多肽的重组载体后，将其感染肝癌组织hepg2细胞，检测发现ntd多肽在细胞中能正常表达，且将感染后的hepg2细胞种植在小鼠体内形成人工的肝细胞癌，发现表达生成的ntd多肽能显著抑制肿瘤的生长。
14、第四方面，本专利技术还提供所述多肽、所述多肽的编码基因、所述重组载体或转基因细胞系在制备抗肿瘤药物中的用途。
15、进一步地，所述肿瘤为肝癌。
16、第四方面，本专利技术还提供一种抗肿瘤的药物，其活性成分为所述多肽、所述编码基因、所述重组载体或转基因细胞系。
17、进一步地，所述肿瘤为肝癌细胞，所述肝癌细胞尤其优选为hepg2细胞。
18、进一步地，所述抗肿瘤的药物为冻干粉剂或液体型剂。
19、进一步地，所述药物还包括药学上可接受的载体。本领域的技术人员可根据药物的剂型等对药学上可接受的载体进行常规选择。
20、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
21、本专利技术通过构建nfe2l1的ntd氨基酸序列的多肽，意外发现ntd多肽具有良好的抗癌功能，并经过免疫缺陷小鼠荷瘤实验证实，本专利技术提供的ntd多肽具有显著抑制肿瘤生长的作用，因此该ntd多肽可能成为良好的低副作用的抗肿瘤药物。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种NFE2L1蛋白的NTD多肽，其特征在于，所述NTD多肽单体的氨基酸序列如SEQ IDNO:1所示。
2.一种编码基因，其特征在于，编码权利要求1所述NTD多肽的编码基因。
3.根据权利要求2所述的编码基因，其特征在于，所述编码基因的核苷酸序列如SEQ IDNO:2所示。
4.含有权利要求2或3所述编码基因的重组载体、转基因细胞系或重组菌。
5.根据权利要求4所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体为将权利要求1所述NTD多肽的编码基因插入pLVX-EGFP载体中，得到表达所述多肽的重组载体。
6.根据权利要求4所述的转基因细胞系，其特征在于，所述转基因细胞系是将权利要求5所述的重组载体导入到宿主细胞中得到转基因细胞系，其中所述宿主细胞为肝癌组织细胞。
7.一种如权利要求1所述多肽、权利要求2或3所述编码基因、权利要求4所述重组载体或转基因细胞系在制备抗肿瘤药物中的用途，其特征在于，所述肿瘤为肝癌。
8.根据权利要求7所述在制备抗肿瘤药物中的用途，其特征在于，所述肿瘤为肝癌。
10.根据权利要求9所述抗肿瘤的药物，其特征在于，所述肿瘤为肝癌。
...【技术特征摘要】
1.一种nfe2l1蛋白的ntd多肽，其特征在于，所述ntd多肽单体的氨基酸序列如seq idno:1所示。
2.一种编码基因，其特征在于，编码权利要求1所述ntd多肽的编码基因。
3.根据权利要求2所述的编码基因，其特征在于，所述编码基因的核苷酸序列如seq idno:2所示。
4.含有权利要求2或3所述编码基因的重组载体、转基因细胞系或重组菌。
5.根据权利要求4所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体为将权利要求1所述ntd多肽的编码基因插入plvx-egfp载体中，得到表达所述多肽的重组载体。
6.根据权利要求4所述的转基因细胞系...
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