【技术实现步骤摘要】
本申请涉及生物样本分离，具体而言，涉及提纯液体样本中目标物的方法。
技术介绍
1、外泌体(exosome)是一种细胞分泌的直径为30-150nm的双磷脂膜结构小囊泡，广泛且稳定地存在于多种临床样本中，临床样本包括血液、尿液、腹水、组织液、眼泪、唾液和脑脊液等。外泌体作为细胞间通信交流的载体，携带来源于母细胞的蛋白、核酸、代谢小分子等特异性组分，参与许多重要的生理、病理过程，包括肿瘤发展的多种事件，譬如免疫逃逸、血管生成、肿瘤转移、肿瘤耐药等。外泌体能更早、持续地被癌细胞释放并进入患者血液循环系统，其脂质双层膜结构能够有效保护所携带的蛋白质和包裹的核酸类物质。因此，外泌体被认为是体外诊断研究和肿瘤临床检测领域中的重点研究对象，有望在肿瘤早期诊断、肿瘤转移复发评估、肿瘤异质性评估、动态检测肿瘤发生发展和疗效、耐药突变检测、个性化用药等方面发挥巨大的临床价值。
2、传统技术中用于分离细胞培养液等液体内膜性囊泡的方法，存在单次处理能力的限制，且人工操作的参与度高，通常用于小体积、多变的样品种类和情况，譬如几十至几百毫升体积的样本。若现有技术强行用于处理大体积样本时，譬如10l以上体积的样本，容易出现滤膜堵塞等问题，造成处理耗时长、成本高，因而现有技术不再适用大体积样本的分离提纯。
技术实现思路
1、有鉴于此，本申请提供提纯液体样本中目标物的方法，以满足对大体积液体样本中的目标物分离提纯的效率需要。
2、本申请的一实施例提供了一种提纯液体样本中目标物的方法，包括：p>
3、准备步骤：提供设有滤膜的芯片，滤膜用于在芯片进行过滤时将目标物留存于芯片内；
4、一次纯化步骤：包括一次初提纯步骤：将液体样本注入芯片进行过滤并重复执行a1次，在进行过滤时，液体样本在芯片内形成湍流对滤膜进行清洗，其中，a1为大于零的自然数；
5、取样步骤：将芯片内含有目标物的液体转移至存放区。
6、上述实施例中，芯片对含有目标物的液体进行过滤时，目标物被滤膜阻隔而留存于芯片内，而其他杂质通过滤膜并能够排出至芯片外，从而实现在液体样本中分离出目标物。再将含有目标物的液体转移至存放区，从而得到提纯后的目标物。芯片在过滤时，目标物会沉积在滤膜的表面而降低分离速度、以及降低其他杂质的通过率，但芯片在进行过滤的同时，在芯片内形成湍流，通过湍流流场对滤膜的表面进行冲刷，避免目标物沉积在滤膜的表面，实现芯片对滤膜的自清洁，从而维持滤膜的分离速度、维持滤膜对其他杂质的通过率，以使得滤膜维持良好的过滤性能。在滤膜维持过滤性能的条件下，芯片过滤一次后的目标物无需取出，而是可以继续向芯片内补充液体样本，并直接进行下一次的过滤分离提纯作业，一次初提纯步骤能够将补液加过滤重复执行a1次，使得取样步骤能够直接转移含有目标物浓度较高的液体。提纯液体样本中目标物的方法有利于减少拆装芯片的次数，有利于减少提取含有目标物的液体的动作的次数，同时也能够减少目标物附着在滤膜上而导致的损耗，从而缩短对液体样本分离提纯至所需浓缩比的时间，以满足对大体积液体样本中的目标物分离提纯的效率需要。
7、本申请的一些实施例中，一次纯化步骤还包括：在一次初提纯步骤之后还执行：
8、一次清洗步骤：将清洗液体注入芯片进行过滤，在进行过滤时，清洗液体在芯片内形成湍流对滤膜进行清洗；
9、一次再提纯步骤：执行一次初提纯步骤至一次清洗步骤重复b1次，其中，b1为大于零的自然数。
10、上述实施例中，将清洗液体注入芯片进行过滤并在芯片内形成湍流，实现芯片对滤膜的自清洁，使滤膜维持良好的过滤性能，以便于滤膜再次执行一次初提纯步骤，同时芯片内的湍流能够将仍混在目标物间的其他杂质扰动出来，以进一步提升芯片内液体的目标物的纯度。在重复执行一次初提纯步骤和一次清洗步骤时，一次清洗步骤有利于维持下一次的一次初提纯步骤的分离效率，且目标物仍留存于芯片内，从而使得取样步骤能够直接转移含有目标物浓度较高的液体，进一步缩短对液体样本分离提纯至所需浓缩比的时间，以满足对大体积液体样本中的目标物分离提纯的效率需要。
11、本申请的一些实施例中，一次清洗步骤还包括：
12、对滤膜进行清洗后，将清洗液体经过滤后转移至清洗暂存区。
13、上述实施例中，清洗液体能够从清洗暂存区取用，以使清洗液体重复使用，从而减少清洗液体的用量。
14、本申请的一些实施例中，取样步骤还包括：
15、在芯片内含有目标物的液体转移至存放区后，将清洗液体注入芯片，并在芯片内形成湍流对滤膜进行清洗，然后再将芯片内的液体转移至存放区。
16、上述实施例中，将芯片内含有目标物的液体转移走时芯片内会残余一些目标物，再将清洗液体注入芯片，芯片内目标物的浓缩比相较转移动作执行前降低，能够提升湍流清洗的效果。同时在湍流对滤膜进行清洗时，芯片不进行过滤，一方面能够延长湍流清洗的时间，另一方面使芯片内维持较高的液面，以使滤膜较高位置也能得到充分清洗，从而能够将芯片上附着的目标物尽可能的清洗下来，再将该部分含有目标物的液体转移至存放区，降低对目标物的浪费，同时该部分液体的液体相较已经过滤了的液体样本的体积较小，从而对存放区内目标物的浓缩比影响较低；并且由于芯片未进行过滤，则此次液体转移时，降低目标物堵塞滤膜的可能。
17、本申请的一些实施例中，清洗液体包括缓冲液体和/或液体样本，缓冲液体被配置为能够全部通过滤膜。
18、上述实施例中，缓冲液体能够全部通过滤膜，一方面在芯片进行过滤时降低滤膜堵塞的可能，另一方面能够降低向芯片内含有目标物的液体引入杂质的可能。液体样本虽然会向芯片内引入新一批的目标物，但液体样本的目标物的浓缩比相较已经过滤提纯过很多次的液体而言较低，因而能够在起到清洁效果的同时降低新一批目标物堵塞滤膜的可能。
19、本申请的一些实施例中，提纯液体样本中目标物的方法还包括：在对芯片内的液体进行过滤时，对滤膜的背离目标物侧进行负压抽吸，并向芯片施加振动。
20、上述实施例中，通过负压抽吸，避免杂质通过滤膜后再反向回到目标物所在侧，提升滤膜的过滤效果。在负压抽吸的同时，振动传递至滤膜，降低目标物附着在滤膜上的可能，实现芯片对滤膜的自清洁，并在湍流清洗的配合下，使滤膜维持良好的过滤效果，以满足对大体积液体样本中的目标物分离提纯的效率需要。
21、本申请的一些实施例中，一次纯化步骤能够得到一次纯化液，提纯液体样本中目标物的方法还包括：在一次纯化步骤之后还执行：
22、二次纯化步骤：包括二次初提纯步骤：将一次纯化液注入芯片进行过滤并重复执行a2次，在进行过滤时，一次纯化液在芯片内形成湍流对滤膜进行清洗，其中，a2为大于零的自然数。
23、上述实施例中，二次纯化步骤用于在对液体样本通过一次纯化步骤提纯的基础上进一步进行提纯。二次初提纯步骤在进行过滤时，通过湍流对滤膜的表面进行冲刷，避免目标物沉积在滤膜的表面，从而维持滤膜的分本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种提纯液体样本中目标物的方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的提纯液体样本中目标物的方法，其特征在于：所述一次纯化步骤还包括：在所述一次初提纯步骤之后还执行：
3.根据权利要求2所述的提纯液体样本中目标物的方法，其特征在于：所述一次清洗步骤还包括：
4.根据权利要求1所述的提纯液体样本中目标物的方法，其特征在于：所述取样步骤还包括：
5.根据权利要求4中所述的提纯液体样本中目标物的方法，其特征在于：还包括：
6.根据权利要求1至3中任一项所述的提纯液体样本中目标物的方法，其特征在于：还包括：在对所述芯片内的液体进行过滤时，对所述滤膜的背离所述目标物侧进行负压抽吸，并向所述芯片施加振动。
7.根据权利要求1至5中任一项所述的提纯液体样本中目标物的方法，其特征在于：所述一次纯化步骤能够得到一次纯化液，所述提纯液体样本中目标物的方法还包括：在所述一次纯化步骤之后还执行：
8.根据权利要求7所述的提纯液体样本中目标物的方法，其特征在于：所述二次纯化步骤还包括：在所述二次初提纯步骤后还执行
9.根据权利要求7所述的提纯液体样本中目标物的方法，其特征在于：还包括：
10.根据权利要求1至5中任一项所述的提纯液体样本中目标物的方法，其特征在于：还包括：在所述一次纯化步骤之前，还执行：
...【技术特征摘要】
1.一种提纯液体样本中目标物的方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的提纯液体样本中目标物的方法，其特征在于：所述一次纯化步骤还包括：在所述一次初提纯步骤之后还执行：
3.根据权利要求2所述的提纯液体样本中目标物的方法，其特征在于：所述一次清洗步骤还包括：
4.根据权利要求1所述的提纯液体样本中目标物的方法，其特征在于：所述取样步骤还包括：
5.根据权利要求4中所述的提纯液体样本中目标物的方法，其特征在于：还包括：
6.根据权利要求1至3中任一项所述的提纯液体样本中目标物的方法，其特征在于：还包括：在对所述芯片内的液体进行过滤时，对...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨一杰，臧天阳，何嘉杰，
申请(专利权)人：深圳汇芯生物医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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