用于溶酶体酶缺乏症的组合物和其用途制造技术

本发明专利技术提供了包含含有β－葡聚糖、有效负载捕获分子和有效负载分子的提取的酵母细胞壁的组合物，其中所述有效负载分子和有效负载捕获分子可溶于相同的溶剂系统，其中所述有效负载分子补充缺陷的溶酶体酶的功能。本发明专利技术还提供制备和使用所述组合物的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
溶酶体贮积症(LSD)是大约50种遗传代谢疾病的组群，所述疾病是由特定的溶酶体酶、受体靶、激活蛋白、膜蛋白或运载体(transporter)的细胞缺乏造成的，所述缺乏导致溶酶体中酶底物的病原性累积，从而造成细胞和组织功能的损坏。Wilcox，W.R.，Lysosomal storage disordersthe need for better pediatricrecognition and comprehensive care.J Pediatr.2004 May；144(5Suppl)S3-14。在5,000个活产儿中，大约发生1例溶酶体贮积症，且所述疾病展示相当大的临床和生物化学异质性。尽管存在X连锁的两个实例MPS II和Fabry病，但大部分溶酶体贮积症主要是作为常染色体隐性遗传病症遗传的。溶酶体贮积症的程度和严重度依赖于积累的底物的类型和量，但几乎所有的病症都是进行性的。尽管一些病症只影响中枢神经系统或神经系统外的组织，但大多数病症同时具有中枢神经系统表现和全身性表现。许多患有溶酶体贮积症的患者死于婴儿期或儿童期，且存活至成人期的患者通常具有减少的寿命和严重的死亡率(Wilcox，2004)。下面的表1是按受影响的溶酶体功能列出的一些溶酶体贮积症的概述。高歇病是最普遍的溶酶体贮积症，其由于在所有组织中缺乏葡糖脑苷脂酶(GC；EC 3.2.1.45)造成。该酶的缺乏在网状内皮系统(包括肝脏、脾脏、肺和骨髓)的富脂巨噬细胞(lipid laden macrophage)(称为Gaucher细胞)中产生葡糖神经酰胺的积累。高歇病被分为三种主要表型I型，非神经病变型)；2型，急性神经病变型和3型，亚急性神经病变型。I型高歇病的疾病严重度是不同的，其中儿童和成人可以是无症状的或可具有严重地使人虚弱的症状，包括骨退化(skeletal degeneration)、贫血、血小板减少和肝脾大。症状可存在于任何年龄阶段，尽管在北欧犹太教徒人群(Ashkenazi Jewishpopulation)中I型高歇病更加普遍，但其在所有种族群体中都发生。2型(急性神经病变型)高歇病是快速进行性的，其中在6个月大小时，大部分2型的婴儿具有脑干功能障碍，且在18-24个月龄时死于并发症例如呼吸停止或吸入性肺炎。3型患者在比2型患者在较大年龄时发生神经异常；大部分只发生精细的水平生扫视性眼球运动缺陷(subtle horizontal saccadic eye movement defect)。1型和3型高歇病患者中的全身性并发症对酶治疗法有反应。表1受溶酶体功能影响的溶酶体贮积症(Wilcox，W.R.，J Pediatr.2004 May；144(5Suppl)S3-14)受影响的溶酶体功能病症糖胺聚糖的不完全新成 MPS I-IX(胡尔勒病、Scheie、Hunter、代谢 Sanfilippo、莫尔基奥病、Maroteaux-Lamy、Sly病，透明质酸酶缺乏症)糖蛋白的聚糖部分的不 天冬氨酰葡糖胺尿症完全降解 (aspartylglucosaminuria)、岩藻糖苷贮积病、甘露糖苷过多症、Schindler病、唾液酸贮积症I型糖原的不完全降解 蓬佩病(pompe disease)鞘脂组分的不完全降解 法布里病、法伯病、高歇病(1-3型)、GM1神经节苷脂沉积症、GM2神经节苷脂沉积症(泰-萨病、山德霍夫病、GM2激活物病)、克拉伯病、异染色性脑白质障碍症、尼-皮病(A型或B型)。多肽的不完全降解 致密性成骨不全症胆固醇、胆固醇酯或其 Leroid lipofuscinosis(具有不同缺乏的他复合酯的不完全降解 多种类型，一些仍然未知)、胆固醇酯沉积或转运缺陷病、C型尼-皮克病、沃尔曼病多种溶酶体酶的缺乏多种硫酸酯酶、半乳糖唾液酸沉积症(galactosialidosis)、II、III型粘多糖症转运和运输缺陷胱氨酸病、粘多糖病IV、唾液酸贮积症、具有Marinesco-Sjgren综合症的乳糜微粒贮积症、海-普二氏综合症(几种形式)和Danon病未知的缺陷Geleophysic dysplasia、Marinesco-Sjgren综合征FDA于1991首先批准了高歇病的酶替代疗法(ERT)。长期的ERT确实改善了大多高歇病患者的器官巨大症和血细胞计数。然而，目前的静脉内施用的GC酶制剂不改变2型患者的神经退化或显著地逆转骨骼并发症。为克服目前的用于高歇病的ERT的限制，我们提出使用新的技术，所述技术使用口服施用的包含由编码人葡糖脑苷脂酶的序列组成的DNA的精微的酵母细胞壁颗粒，从而更有效地递送正常的或修饰的GC酶至巨噬细胞。除了提高GC酶至所有组织的递送，我们预期该创新的方法将使骨中的巨噬细胞更有效和特异地吸收递送编码正常的或修饰的GC的DNA的颗粒。该方法可导致不能被目前的ERT显著地逆转的骨并发症的更大的好转。提取的酵母细胞壁颗粒是可容易获得的、可生物降解的、基本上为球形的直径大约2-4μm的颗粒。提取的酵母细胞壁颗粒的制备在本领域是已知的，且描述于例如美国专利4,992,540、5,082,936、5,028,703、5,032,401、5,322,841、5,401,727、5,504,079、5,968,811、6,444,448 B1、6,476,003 B1、公开的美国申请2003/0216346 A1、2004/0014715 A1和PCT公开申请WO 02/12348 A2中。提取的酵母细胞壁颗粒的形式，称作“完全葡聚糖颗粒”，已被建议作为递送载体，但一直限制于通过活性组分从颗粒的简单扩散进行释放或通过颗粒基质的生物降解释放化学交联至所述完整的葡聚糖颗粒的试剂。参见美国专利5,032,401和5,607,677。提取的酵母细胞壁颗粒，主要归因于其β-葡聚糖内容物，被靶向吞噬细胞，例如巨噬细胞和淋巴组织的细胞。粘膜相关淋巴组织(MALT)在上皮和位于身体粘膜表面下的固有层中包含所有淋巴细胞。粘膜相关淋巴组织的主要位置是肠相关淋巴组织(GALT)和支气管相关淋巴组织(BALT)。GI免疫系统的另一个重要组分是M或微褶细胞。M细胞是肠上皮中位于淋巴样滤泡(lymphoid follicle)上的特殊细胞类型，其内吞多种蛋白和肽抗原。M细胞将这些蛋白转运至下层组织而不是降解其，在所述下层组织中其被该处的树突细胞和巨噬细胞吸收。M细胞通过内吞作用或吞噬作用吸收来自肠腔的分子和颗粒。然后将该物质在小囊泡中转运穿过细胞的内部至基底膜，在该处其被释放入细胞外空间。该过程称为胞转运作用。在其基底面，M细胞的细胞膜围绕下面的淋巴细胞和抗原呈递细胞产生大量皱折，所述淋巴细胞和抗原呈递细胞吸收从M细胞释放的转运物质并加工其以用于抗原呈递。研究已显示，派尔斑的M细胞进行的酵母颗粒(直径为3.4±0.8微米)的胞转运作用费时少于1小时(Beier，R.，& Gebert，A.，Kinetics of particle uptake in the domes of Peyer′s patches，Am J Physiol.1998 Jul；275(1 Pt 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种组合物，其包含：　　　　提取的界定内部空间和包含大约６％至大约９０％的重量的β－葡聚糖的酵母细胞壁；　　　　有效负载捕获分子和　　　　以有效地补充缺陷的溶酶体酶功能的量存在的选自核酸、肽、蛋白和其混合物的有效负载分子；　　　　其中所述有效负载分子和有效负载捕获分子可溶于相同的溶剂系统，且其中所述有效负载捕获分子稳定所述有效负载分子和所述提取的酵母细胞壁的结合。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：EI吉恩斯，GR奥斯特罗夫，
申请(专利权)人：马萨诸塞大学，
类型：发明
国别省市：US[美国]