【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于农业微生物，尤其涉及一种促进无须豆尖豌豆生产的根瘤菌及其应用。
技术介绍
1、目前，豌豆尖是冬春季大众化的高档蔬菜，深受消费者喜欢。“无须豆尖豌豆”属食苗或嫩豆尖型豌豆品种，它叶片肥厚，高茎，白花，茎粗，复叶无卷须，因此命名为无须豌豆。所产豆尖无卷须、更化渣爽口、柔嫩多汁、清香味美，比一般豆尖品质更佳，且不用加工摘须，不会给豆尖造成新的伤口，有利于保鲜，并且过年前后旺盛生长和大量销售，尤其过年前后价格往往超过猪肉价，可见无须豆尖兼质优、味美、高产、高经济价值等特点，深受种植户和消费者欢迎，在四川、贵州、上海等南方地区广泛种植。其中由四川省农科院选育的无须豆尖一号优于国内种植的有须豆尖豌豆品种，鲜豆尖平均产量可达1000kg/亩，生产成本较低，在四川省成都平原、丘陵区和山区均有广泛种植，且味道鲜美，鲜豆尖含粗蛋白43.72％，粗脂肪4.67％，并含多种氨基酸，营养丰富，在四川省内被大量应用于餐饮行业，年需求量较高。除食用外，无须豆尖豌豆在收获蔬菜鲜豆尖后余下的植株部分还可作为优良的绿肥或饲料，耐寒、耐旱、适应性较广，在防止水土流失、提升耕地质量等方面都具有重要作用。
2、然而近年来，全国豌豆种植面积和总产逐年下降，和西方同类国家相比产量还有较大差距，严重制约豌豆产业的发展。四川省餐饮行业中日消耗鲜豆尖量和日供给能力不成正比，存在供不应求的现象，可见无须豆尖豌豆具有较大发展潜力。无须豆尖豌豆一般上年10月播种，采摘豆尖从11月至次年4月，可采6次以上，为获得高产，生产中一般除施底肥(有机肥和矿质磷钾肥)，还
3、目前关于豌豆根瘤菌的筛选研究多见于甘肃、辽宁、河北等春播豌豆区。潘亭亭等在河北盐碱土的豌豆上分离获得18个豌豆根瘤菌，筛选到2个菌株与当地品种花叶豌豆高效结瘤固氮；宁国赞等从全国多地采集豌豆根瘤分离获得有结瘤和固氮能力的豌豆根瘤菌90多株，筛选获得与豌豆匹配好的菌株5株，编入《中国农业菌种目录》和《中国菌种目录》；谢军红等对中国菌种目录收录的这5株豌豆根瘤菌与甘肃当地主栽豌豆品种进行大田试验研究其固氮、结瘤效果及产量，结果表明其中2株结瘤、固氮效果好，产量比不接种的对照增产36.1％～66.3％，相较于其余菌株差异均达显著水平(p<0.05)，说明所选用的菌株能促进当地主栽豌豆品种的生长。郭丽琢等在甘肃春播豌豆上接种宁国赞等筛选的2株优良豌豆根瘤菌accc16101、accc16103，接种accc16103的豌豆比ck显著增产，而accc16101却使豌豆略有减产。上述豌豆根瘤菌的筛选均是针对收获干豌豆的品种进行筛选的，且主要在北方的春播区。但是针对蔬菜型的无须豆尖豌豆品种匹配的高效根瘤菌的筛选未见报道。一般来说豌豆根瘤菌的分布具有地理差异性和品种适应性，不同生态区的豌豆适配的根瘤菌并不相同，因此需注意本生态区或条件相似生态区的豌豆与根瘤菌的适配性问题。在四川、重庆等西南地区高效匹配豌豆根瘤的筛选鲜见报道。目前适合无须豆尖豌豆高效匹配的根瘤菌的研究未见报道。
4、现有研究表明，少数根瘤菌还具有溶磷、分泌生长激素等促生特性，赵龙飞等通过采集、分离筛选自河南省不同地区的324株大豆根瘤菌中，研究发现有36株根瘤菌具有溶磷能力，其中20株有较强溶磷性，溶磷能力最强的根瘤菌株为dd291，且对大豆的生长具有促进作用，显示出潜在的应用前景。
5、通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：目前针对蔬菜型的无须豆尖豌豆品种匹配的高效根瘤菌筛选的相关技术方案尚未见报道。
技术实现思路
1、针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种促进无须豆尖豌豆生产的根瘤菌及其应用。
2、本专利技术是这样实现的，一种促进无须豆尖豌豆生产的根瘤菌，促进无须豆尖豌豆生产的根瘤菌rhizobiumfabae的菌株号为p68-1，于2018年9月4日保藏于中国湖北省武汉市武汉大学内的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no:m 2018590。
3、本专利技术的另一目的在于提供一种实施所述的促进无须豆尖豌豆生产的根瘤菌的鉴定方法，该方法包括以下步骤：
4、步骤一，进行根瘤菌的分离、纯化和保存；
5、步骤二，利用水培回接试验确定根瘤菌初筛菌株；
6、步骤三，利用田间接种试验确定根瘤菌复筛菌株；
7、步骤四，利用匹配性试验确定复筛菌株与其他豌豆品种的匹配性；
8、步骤五，用交叉结瘤试验确定其他宿主根瘤菌与豌豆匹配性差；
9、步骤六，复筛菌株的抗逆性与促生性；
10、步骤七，对复筛根瘤菌株进行多位点基因系统发育分析，确定菌株分类地位。
11、进一步，步骤一中，从豌豆根瘤中分离和纯化根瘤菌，选择具有典型的根瘤菌菌落特点，革兰氏染色结果为细胞呈小杆状、革兰氏阴性的菌株。
12、进一步，步骤二中，对步骤一的菌株用无须豆尖豌豆进行水培回接试验，初步筛选出在水培条件下结瘤能力强、共生固氮效果好的菌株为初筛菌株。
13、进一步，步骤三中，将初筛菌株分别制成根瘤菌菌剂并应用于目标地区，筛选得到在田间条件下结瘤、固氮能力较强、鲜豆尖产量最高、收获豆尖后的绿肥或饲草产量高的复筛菌株。
14、进一步，步骤四中，对复筛菌株与目标地区的收获蔬菜鲜青豆籽粒或嫩豆荚为主的主栽豌豆品种进行匹配性试验，明确菌株与其他豌豆品种的匹配性。
15、进一步，步骤五中，对复筛根瘤菌株p68-1，以及四川已授权的其他主要豆科植物(宿主)的高效根瘤菌，同时接种四川一个主栽豌豆品种，即进行交叉结瘤试验，对比p68-1评价四川其他豆科植物根瘤菌是否也适用于四川豌豆。
16、进一步，步骤六中，对复筛根瘤菌株p68-1的耐酸碱、耐盐的抗逆性以及分泌iaa能力、溶磷能力的促生性进行分析；
17、对菌株p68-1提取总dna，对16s rrna基因，reca、atpd和ginii三个持家基因进行测序，构建系统发育树，明确菌株p68-1的分类地位。
18、本专利技术的另一目的在于提供一种促进无须豆尖豌豆生产的菌剂，促进无须豆尖豌豆生产的菌剂含有所述的促进无须豆尖豌豆生产的根瘤菌。
19、结合上述的技术方案和解决的技术问题，本专利技术所要保护的技术方案所具备的优点及积极效果为：
20、第一，本专利技术在四川省广泛采集豌豆根瘤，分离获得根瘤菌40余株，与四川豆尖豌豆主栽品种-无须豆尖1号豌豆进行水培试验(初步筛选)-大田试验验证(复筛)，然后将筛选到的与无须豆尖豌豆匹配性好且在四川无须豆尖豌豆田间应用效果好的菌株进行抗逆、促生性分析，探究其抗逆性和其他促生功能；与四川其他豆科植物的高效根瘤菌，同时接种同一四川豌豆品种，评估现有的其本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种促进无须豆尖豌豆生产的根瘤菌，其特征在于，促进无须豆尖豌豆生产的根瘤菌R.fabae的菌株号为P68-1，于2018年9月4日保藏于中国湖北省武汉市武汉大学内的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2018590。
2.一种实施如权利要求1所述的促进无须豆尖豌豆生产的根瘤菌的促进无须豆尖豌豆生产的根瘤菌鉴定方法，其特征在于，促进无须豆尖豌豆生产的根瘤菌鉴定方法包括以下步骤：
3.如权利要求2所述的促进无须豆尖豌豆生产的根瘤菌鉴定方法，其特征在于，步骤一中，从豌豆根瘤中分离和纯化根瘤菌，选择具有典型的根瘤菌菌落特点，革兰氏染色结果为细胞呈小杆状、革兰氏阴性的菌株。
4.如权利要求2所述的促进无须豆尖豌豆生产的根瘤菌鉴定方法，其特征在于，步骤二中，对步骤一的菌株用无须豆尖豌豆进行水培回接试验，初步筛选出在水培条件下结瘤能力强、共生固氮效果好的菌株为初筛菌株。
5.如权利要求2所述的促进无须豆尖豌豆生产的根瘤菌鉴定方法，其特征在于，步骤三中，将初筛菌株分别制成根瘤菌菌剂并应用于目标地区，筛选得到在田间条件下结瘤、固
6.如权利要求2所述的促进无须豆尖豌豆生产的根瘤菌鉴定方法，其特征在于，步骤四中，对复筛菌株与目标地区的收获蔬菜鲜青豆籽粒或嫩豆荚为主的主栽豌豆品种进行匹配性试验，明确菌株与其他豌豆品种的匹配性。
7.如权利要求2所述的促进无须豆尖豌豆生产的根瘤菌鉴定方法，其特征在于，步骤五中，对复筛根瘤菌株P68-1的耐酸碱、耐盐的抗逆性以及分泌IAA能力、溶磷能力的促生性进行分析；
8.一种促进无须豆尖豌豆生产的菌剂，其特征在于，促进无须豆尖豌豆生产的菌剂含有如权利要求1所述的促进无须豆尖豌豆生产的根瘤菌。
9.一种如权利要求1所述的促进无须豆尖豌豆生产的根瘤菌和/或如权利要求8所述的促进无须豆尖豌豆生产的菌剂。
...【技术特征摘要】
1.一种促进无须豆尖豌豆生产的根瘤菌，其特征在于，促进无须豆尖豌豆生产的根瘤菌r.fabae的菌株号为p68-1，于2018年9月4日保藏于中国湖北省武汉市武汉大学内的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no:m2018590。
2.一种实施如权利要求1所述的促进无须豆尖豌豆生产的根瘤菌的促进无须豆尖豌豆生产的根瘤菌鉴定方法，其特征在于，促进无须豆尖豌豆生产的根瘤菌鉴定方法包括以下步骤：
3.如权利要求2所述的促进无须豆尖豌豆生产的根瘤菌鉴定方法，其特征在于，步骤一中，从豌豆根瘤中分离和纯化根瘤菌，选择具有典型的根瘤菌菌落特点，革兰氏染色结果为细胞呈小杆状、革兰氏阴性的菌株。
4.如权利要求2所述的促进无须豆尖豌豆生产的根瘤菌鉴定方法，其特征在于，步骤二中，对步骤一的菌株用无须豆尖豌豆进行水培回接试验，初步筛选出在水培条件下结瘤能力强、共生固氮效果好的菌株为初筛菌株。
5.如权利要求2所述的...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈远学，徐开未，熊伟仡，张艳琴，陈沁园，石阳阳，黄悦，彭丹丹，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。