本发明专利技术涉及一种用于生产卵黄抗体的兽用疫苗的制备方法及其应用，所述兽用疫苗在制备过程中需要使用微流控芯片中的Y型通道。本发明专利技术以两种破碎细菌抗原作为微流控芯片的Y型通道两端原料输入制备出复合抗原，所用方法高效便捷；所使用的白油司班佐剂，能够促进母鸡产生高活性的卵黄抗体，且毒性低，不易造成炎症，抗体产生时间快；抗原与免疫佐剂的乳化过程也采用微流控芯片中的Y型通道，提高了乳化效率和降低了乳化成本；可以用于制备大规模生产卵黄抗体的兽用疫苗，并且生产的抗体效价高。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种兽用疫苗的制备方法及应用，具体涉及一种用于生产卵黄抗体的兽用疫苗的制备方法及其应用。本专利技术属于生物医药。
技术介绍
1、由于卵黄抗体具有生物活性高、安全性好、特异性充分且产生被动免疫的过程中不会对人体产生副作用，常被应用于医疗等领域。在卵黄抗体的生产过程中，通常会涉及到疫苗制备，疫苗免疫，抗体提取三个过程。通过制备疫苗对母鸡进行免疫，是生产出大量高特异性和结合力的卵黄抗体的关键步骤，在制备疫苗的过程中，需要重点考虑抗原制备以及佐剂选择和乳化方式。
2、抗原是指能够诱导机体发生免疫应答的物质。在本专利技术中，抗原特指进入母鸡免疫系统并能够诱导卵黄抗体产生的非母鸡自身物质。同时，抗原物质具有两个重要特征：免疫原性和免疫反应性。免疫原性即指抗原诱导机体发生特异性免疫应答，产生抗体或致敏淋巴细胞的能力；免疫反应性是指能与相应的抗体或致敏淋巴细胞在体内外发生特异性结合反应的能力。
3、在完成抗原制备后，需要选择疫苗佐剂进行复合制备疫苗。疫苗佐剂是能够非特异性改变或增强机体对抗原的特异性免疫应答、发挥辅助作用的一类物质。佐剂能够诱导机体产生长期、高效特异性免疫反应，提高机体保护能力，同时又能够减少免疫抗原的用量，降低疫苗的生产成本。兽用疫苗佐剂通常包括铝佐剂、油乳佐剂、微生物类佐剂、蜂胶佐剂、左旋咪唑佐剂。其中，油乳佐剂可以促进多种抗原产生高效价的抗体，使抗原连续刺激的时间相对延长，抗原接种的剂量减少，抗原接种的次数降低，因为这些优点，油乳佐剂在生产卵黄抗体的疫苗中得到了广泛的应用。
>4、抗原水溶液以及疫苗佐剂复合制备疫苗的过程通常是乳化。特别是兽用疫苗的制备过程中，需要使用油包水型疫苗，常用的乳化设备包括立体胶体磨、高压匀浆泵、罐内剪切机及乳化罐等。5、因此，卵黄抗体的生产过程，疫苗制备必不可少，开发一种用于卵黄抗体生产的疫苗制备方法就显得极为重要，需要重点考虑抗原的制备以及佐剂的选择还有乳化方式的改进。
6、抗原经常是使用目标菌体或病毒进行灭活，以用于和疫苗佐剂复合乳化。目前，现有用于制备兽用疫苗的佐剂：氢氧化铝胶中国专利技术专利：稳定乳液及其制备方法和用途，公开号：cn116672311a；中国专利技术专利：一种疫苗佐剂及其应用及猪繁殖与呼吸综合征疫苗，公开号：cn109745556a；中国专利技术专利：一种氢氧化铝纳米胶佐剂的制备方法，公开号：cn102988982b）。半聚乳糖（中国专利技术专利：一种具有免疫佐剂活性真菌半乳聚糖及其制备方法与应用，公开号：cn116769059a）。纳米材料（中国专利技术专利：一种基于锆金属有机框架的复合纳米佐剂制剂及其在动物疫苗中的应用，公开号：cn116036263a；中国专利技术专利：一种铝纳米晶递送系统及其结合疫苗抗原分子自组装颗粒佐剂疫苗，公开号：cn114366809a；中国专利技术专利：纳米结构脂质载体佐剂的制备方法以及兽用疫苗，公开号：cn115154595a）。尽管已有研究证实了氢氧化铝、半聚乳糖及纳米材料可以用于制备疫苗佐剂，但是在该类产品针对于兽用机体的毒性还比较高。白油司班佐剂由于其毒性低，产生抗体活性高，抗体产量大等优点，正不断被应用于制备兽用疫苗。
7、兽用疫苗制备过程，常用的乳化方式有：使用乳化搅拌机、胶体磨、高压均质机和高剪切乳化均质机进行乳化，使用这些设备进行乳化的过程重复性好且比较稳定，但乳化过程中由于消耗能量高以至于费用高，且不均匀。
技术实现思路
1、为解决常用乳化佐剂毒性高以及常用乳化方式能耗高、不均匀的问题，本专利技术目的在于提供一种用于生产卵黄抗体的兽用疫苗的制备方法。
2、本专利技术的再一目的在于：提供所述方法制备的疫苗。
3、本专利技术又一目的在于：提供所述的兽用疫苗用于生产卵黄抗体的应用。
4、本专利技术目的通过下述方案实现：一种用于生产卵黄抗体的兽用疫苗的制备方法，所述兽用疫苗在制备过程中使用微流控芯片中的y型通道，包括：
5、1）菌液的制备：将中间普氏菌与具核梭杆菌两种细菌的菌悬液灭活后进行破碎，取上清液；
6、2）复合抗原的制备：
7、将两种上清液分别置于微流控芯片的y型通道的a、b两端；使用微通道反应器驱动两种上清液混合，使两种上清液混合；混合后从微流控芯片的y型通道c端形成复合抗原；
8、3）白油司班佐剂的制备：利用白油、司班、硬脂酸铝制备白油司班佐剂，加热灭菌，冷却至室温；
9、4）分别将冷却后的白油司班佐剂，复合抗原等体积置于微流控芯片的y型通道的a、b两端，使用微通道反应器驱动白油司班佐剂和复合抗原不断重复20次进行乳化混合；乳化混合后从微流控芯片的y型通道的c端形成兽用疫苗。
10、本专利技术通过微流控设备进行乳化，不仅重复性好而且稳定，而且乳化前后容易进行清洁灭菌，并且可以实现自动化操作。
11、进一步的，所述白油司班佐剂包含95ml白油、5ml司班-80和2g单硬脂酸铝，水浴加热融合后，116℃，20min高压蒸汽灭菌，冷却至室温，得到所述的白油司班佐剂。
12、本专利技术还提供了上述方法制备的兽用疫苗。
13、本专利技术也提供了上述兽用疫苗用于生产卵黄抗体的制备方法。
14、本专利技术提供一种用于生产卵黄抗体的应用：
15、a、使用制备好的兽用疫苗免疫母鸡，免疫3次，每次免疫注射1ml兽用疫苗，免疫次数间隔7天；
16、b、收集第3次免疫后的鸡蛋，并将蛋黄液与去离子水按体积比1：8的比例加去离子水，充分搅拌，使用冰醋酸调节酸碱度至ph5.0-5.5，后冷冻，解冻，取上清液，在上清液中加入海藻酸钠溶液和氯化钙溶液，海藻酸钠与氯化钙溶液添加比例为8：3，沉降，取上清液；该上清液即为卵黄抗体。
17、应用elisa方法检测卵黄抗体的效价；针对中间普氏菌的效价为1：10240，针对具核梭杆菌效价为1：20480，表明使用该方法制备的兽用疫苗可以生产出效价高的卵黄抗体。
18、本专利技术以两种破碎细菌抗原作为微流控芯片的y型通道两端原料输入制备出复合抗原，所用方法高效便捷；所使用的白油司班佐剂，能够促进母鸡产生高活性的卵黄抗体，且毒性低，不易造成炎症，抗体产生时间快；抗原与免疫佐剂的乳化过程也采用微流控芯片中的y型通道，提高了乳化效率和降低了乳化成本；可以用于制备大规模生产卵黄抗体的兽用疫苗，并且生产的抗体效价高。
19、本专利技术的优点在于：
20、（1）本专利技术以两种破碎细菌抗原作为微流控芯片的y型通道两端原料输入制备出复合抗原，所用方法高效便捷。
21、（2）本专利技术中所使用的白油司班佐剂，能够促进母鸡产生高活性的卵黄抗体，且毒性低，不易造成炎症，抗体产生时间快。
22、（3）本专利技术中的抗原与免疫佐剂的乳化过程也采用微流控芯片中的y型通道，提高了乳化效率和降低了乳化成本。
23、（4）本专利技术中的兽用疫苗制备方法可以用于制备大规模生产卵黄本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于生产卵黄抗体的兽用疫苗的制备方法，其特征在于，所述兽用疫苗在制备过程中需要使用微流控芯片中的Y型通道，包括下述步骤：
2.根据权利要求1所述的用于生产卵黄抗体的兽用疫苗的制备方法，其特征在于，所述白油司班佐剂包含95mL白油、5mL司班-80和2g单硬脂酸铝，水浴加热融合后，于116℃高压蒸汽灭菌20min，冷却至室温，得到所述的白油司班佐剂。
3.根据权利要求1或2所述的用于生产卵黄抗体的兽用疫苗的制备方法，其特征在于，按以下步骤制备：
4.一种用于生产卵黄抗体的兽用疫苗，根据权利要求1至3任一项所述的的制备方法得到的。
5.一种根据权利要求4所述的兽用疫苗用于生产卵黄抗体的制备方法，包括下述步骤：
6.根据权利要求5所述的兽用疫苗用于生产卵黄抗体的制备方法，其特征在于，按下述步骤：
7.根据权利要求6所述的兽用疫苗用于生产卵黄抗体的制备方法，其特征在于，步骤b中，冷冻，解冻为放置于-50℃冷冻36h后，取出解冻，离心取上清液，在上清液中加入质量浓度为2%的海藻酸钠溶液和浓度为15%的氯化钙溶液，海藻酸钠与氯化钙溶液添加比例为8：3，放置于室温沉降36h,沉降后离心取上清液，该上清液即为卵黄抗体。
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【技术特征摘要】
1.一种用于生产卵黄抗体的兽用疫苗的制备方法，其特征在于，所述兽用疫苗在制备过程中需要使用微流控芯片中的y型通道，包括下述步骤：
2.根据权利要求1所述的用于生产卵黄抗体的兽用疫苗的制备方法，其特征在于，所述白油司班佐剂包含95ml白油、5ml司班-80和2g单硬脂酸铝，水浴加热融合后，于116℃高压蒸汽灭菌20min，冷却至室温，得到所述的白油司班佐剂。
3.根据权利要求1或2所述的用于生产卵黄抗体的兽用疫苗的制备方法，其特征在于，按以下步骤制备：
4.一种用于生产卵黄抗体的兽用疫苗，根据权利要求1至3任一...
【专利技术属性】
技术研发人员：仲禺俊，徐艳，彭家伟，代坤，任眀飞，杨迪诚，
申请(专利权)人：上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司，
类型：发明
国别省市：
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