【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种晶状体分离液及其在晶状体观察中的应用。
技术介绍
1、糖尿病视网膜病变是一种主要的致盲疾病，然而糖尿病患者如果能及时发现并且获得规范的治疗，多数可以摆脱失明的危险。几乎所有的眼病都可能发生在糖尿病患者身上。如眼底血管瘤、眼底出血、泪囊炎、青光眼、白内障、玻璃体浑浊、视神经萎缩、黄斑变性、视网膜脱落。而且糖尿病患者发生这些眼病的几率明显高于非糖尿病人群。
2、眼病最初都是微血管病变，因此给临床治疗带来了麻烦。目前控制血糖最主要的办法是胰岛素治疗。但胰岛素对微血管的损害被很多专家重视。尽管如此，临床专家们更多的还是建议患者使用胰岛素。上述情况表明，糖尿病眼病一直在困扰着医学界。
3、nod小鼠是研究人类1型糖尿病的模型，是一种有价值的动物模型，nod小鼠是自发性糖尿病动物模型的一种，对研究1型糖尿病以及遗传性糖尿病视网膜疾病的病因研究提供宝贵的信息，而且在免疫调节和免疫耐受研究方面具有宝贵价值。但是小鼠模型也存在一定的局限性，比如病理变化不能通过连续观察来确定、遗传操作困难、通量小、速度慢等。
4、斑马鱼，属于辐鳍鱼纲，新鳍亚纲，鲤形目，鲤科属，身形呈纺锥形。近几年来，斑马鱼由于其高产卵率和胚胎体外受精发育等优势，在药物筛选领域受到研究者们的青睐。斑马鱼与人类基因同源性约为80％，且其与人类眼部结构和基因的高度保守性，使斑马鱼受到眼科学和视觉科学领域工作者的关注，已成为研究的有利工具。
5、荧光成像技术是利用激发光使得荧光基团达到较高的能量水平，然后发射
6、文献“high glucose-induced changes in hyaloid-retinal vessels duringearly ocular development of zebrafish:a short-term animal model of diabeticretinopathy”公开了一种斑马鱼晶状体分离的技术，具体为将斑马鱼固定过夜后，用胰酶消化2h再用吹打的方式进行分离。该斑马鱼晶状体的分离技术耗费时间较长，容易引起斑马鱼死亡过久而导致荧光猝灭，进而影响后续实验的观察。
7、因此，目前亟需一种操作简便、操作时间短的斑马鱼晶状体分离的方法。
技术实现思路
1、为了解决上述问题，一方面，本专利技术提供了一种晶状体分离液，所述的晶状体分离液由4％胰酶和8-10μg/μl的蛋白酶k组成。
2、优选地，所述的晶状体分离液由4％胰酶和9-10μg/μl的蛋白酶k组成。
3、进一步优选地，所述的晶状体分离液由4％胰酶和10μg/μl的蛋白酶k组成。
4、又一方面，本专利技术提供了上述的晶状体分离液在晶状体血管观察中的应用。
5、具体地，所述的晶状体为斑马鱼的晶状体。
6、进一步具体地，所述的晶状体观察为观察斑马鱼高血糖模型的晶状体。
7、又一方面，本专利技术提供了一种基于斑马鱼高血糖模型的晶状体血管观察方法，包括以下步骤：
8、(1)斑马鱼显微注射，培养基中培养；
9、(2)构建高血糖模型；
10、(3)使用上述的晶状体分离液分离晶状体；
11、(4)进行荧光显微镜观测。
12、所述步骤(1)中斑马鱼为使用荧光标记的斑马鱼；
13、优选地，所述荧光标记包括但不限于绿色荧光标记、红色荧光标记。
14、进一步优选地，所述荧光标记为绿色荧光标记。
15、更进一步优选地，所述绿色荧光标记包括但不限于使用tg(fli:egfp)进行标记。
16、具体的，所述egfp是指增强绿色荧光蛋白。
17、具体地，所述步骤(1)中斑马鱼为使用荧光标记血管内皮细胞的斑马鱼。
18、具体的，所述斑马鱼选自斑马鱼幼鱼、斑马鱼成鱼、斑马鱼胚胎中的一种。
19、进一步具体的，所述斑马鱼选自斑马鱼胚胎。
20、优选地，步骤(1)所述的显微注射的为pdx1 morpholino。
21、优选地，所述pdx1 morpholino的浓度为0.1mm。
22、具体的，所述pdx1是指胰岛素促进分子1。
23、具体的，所述morpholino是一种用来修饰基因表现的分子。
24、所述步骤(2)中构建高血糖模型的物质为葡萄糖，葡萄糖浓度为4％。
25、具体的，将步骤(2)所述培养基在培养箱中培养一夜，次日除去发育不良的胚胎，更换培养基培养。
26、所述更换的培养基中包括但不限于1-苯基-2-硫脲、e3培养液。
27、具体的，所述1-苯基-2-硫脲的化学式为c7h8n2s，cas号为103-85-5。
28、所述1-苯基-2-硫脲的浓度为2.5μm。
29、优选地，在2dpf的时候，在显微镜下挑选出带有荧光的胚胎，继续在培养箱中孵育至3dpf。
30、优选地，所述高血糖模型的造模时间为3天。
31、优选地，高血糖模型构建完成后，进行固定，清洗。
32、优选地，固定所用的溶液为多聚甲醛，所述多聚甲醛的浓度为1％-5％；
33、进一步优选地，所述多聚甲醛的浓度为4％。
34、优选地，所述固定时间为1-5h；
35、最优选地，所述固定时间为2h。
36、根据本专利技术的一些实施方式，斑马鱼胚胎在4％多聚甲醛中固定2小时后，使用纯水进行3次清洗，每次时长10分钟。
37、根据本专利技术的一些实施方式，清洗后每孔加入晶状体分离液进行分离晶状体。
38、优选地，步骤(2)中所述的晶状体分离液由4％胰酶和8-10μg/μl的蛋白酶k组成。
39、进一步优选地，步骤(2)中所述的晶状体分离液由4％胰酶和9-10μg/μl的蛋白酶k组成。
40、再进一步优选地，步骤(2)中所述的晶状体分离液由4％胰酶和10μg/μl的蛋白酶k组成。
41、优选地，步骤(3)中所述的分离的时间为5-15min；进一步优选地，所述的分离的时间为10min。
42、具体地，消化完使用一次性吸管剧烈吹打直至斑马鱼的晶状体掉落，然后将晶状体转移至孔板内或放于载玻片上用荧光显微镜观察。
43、本专利技术的有益效果：
44、本专利技术提供的斑马鱼晶状体分离液能够快速的将晶状体从斑马鱼胚胎中分离下来，并且使用上述的分离液进行斑马鱼高血糖模型的晶状体血本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种晶状体分离液，其特征在于，所述的晶状体分离液由4％胰酶和8-10μg/μL的蛋白酶K组成。
2.根据权利要求1所述的晶状体分离液，其特征在于，所述的晶状体分离液由4％胰酶和9-10μg/μL的蛋白酶K组成。
3.根据权利要求2所述的晶状体分离液，其特征在于，所述的晶状体分离液由4％胰酶和10μg/μL的蛋白酶K组成。
4.权利要求1-3任一项所述的晶状体分离液在晶状体血管观察中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，为观察斑马鱼高血糖模型的晶状体血管。
6.一种基于斑马鱼高血糖模型的晶状体血管观察方法，其特征在于，包括以下步骤：
7.根据权利要求6所述的晶状体血管观察方法，其特征在于，所述步骤(1)中斑马鱼为使用Tg(Fli:eGFP)进行荧光标记的斑马鱼。
8.根据权利要求6所述的晶状体血管观察方法，其特征在于，步骤(1)所述的显微注射为注射PDX1 Morpholino，所述PDX1 Morpholino的浓度为0.1mM。
9.根据权利要求6所述的晶状体血管观
10.根据权利要求6所述的晶状体血管观察方法，其特征在于，步骤(3)中所述的分离的时间为5-15min。
...【技术特征摘要】
1.一种晶状体分离液，其特征在于，所述的晶状体分离液由4％胰酶和8-10μg/μl的蛋白酶k组成。
2.根据权利要求1所述的晶状体分离液，其特征在于，所述的晶状体分离液由4％胰酶和9-10μg/μl的蛋白酶k组成。
3.根据权利要求2所述的晶状体分离液，其特征在于，所述的晶状体分离液由4％胰酶和10μg/μl的蛋白酶k组成。
4.权利要求1-3任一项所述的晶状体分离液在晶状体血管观察中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，为观察斑马鱼高血糖模型的晶状体血管。
6.一种基于斑马鱼高血糖模型的晶状体血管观察方法，其特征在于...
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