【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物检测，具体涉及一种可检测人体血清、血浆、全血的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒。
技术介绍
1、中和抗体是由病毒侵入机体后，机体产生的可与病毒结合并使机体免受侵害的抗体，有研究发现，机体产生的抗体能起到抵御新冠病毒侵害的特异性抗体叫中和抗体，只占产生的抗体中的一部分。新冠中和抗体的检测可以反映群体的感染率、个人的康复情况以及疫苗的效果。因此，衍生出了几种无需使用感染性病毒、快速检测新冠中和抗体的方法。主要有：免疫荧光抗体实验、免疫胶体金技术、正向间接血凝试验、中和试验、酶联免疫吸附试验、反转录-聚合酶链反应、荧光定量技术、基因芯片技术。其中，金标准当属病毒中和试验，但传统的病毒中和实验需使用活病毒和细胞，且对实验室安全性及操作人员技能要求较高。
技术实现思路
1、为了解决现有技术存在的以上问题，本专利技术提供一种可检测人体血清、血浆、全血的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒，使用简单、快速的胶体金免疫层析法，无论是选用血清、血浆、静脉全血还是指尖血都可以检测，快速判断出每个接种者体内是否产生了能用来清除新型冠状病毒的中和抗体。
2、为此，本专利技术采用以下技术方案：
3、一种可检测人体血清、血浆、全血的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒，包括检测卡和样本稀释液，其特征在于，
4、所述的检测卡包括吸水纸、底板、硝酸纤维素膜、结合垫、隐形不干胶、样品垫和检测卡壳，所述的吸水纸、硝酸纤维素膜、结合垫和样品垫依次互相搭接后粘贴在所述的底板上构成检
5、所述的硝酸纤维素膜上依次划有相互平行的检测线t线和质控线r线、质控线c线，检测线t线和质控线r线的间距、质控线r线和质控线c线间隔距离均为3-5mm，所述的检测线t线靠近样品垫，所述的质控线c线靠近吸水纸。质控线c线、质控线r线和检测线t线均位于卡壳的检测视窗中。
6、进一步地，作为优选，吸水纸的搭接端和结合垫的第一搭接端均粘贴在硝酸纤维素膜之上，使得硝酸纤维素膜能整面贴在底板上，样品垫的搭接端粘贴在结合垫的第二搭接端上；隐形不干胶覆盖部分硝酸纤维素膜、结合垫与硝酸纤维素膜的搭接端、结合垫及样品垫和结合垫的搭接端。
7、进一步地，作为优选，所述的隐形不干胶，其长度为5mm-18mm，从硝酸纤维素膜距离与结合垫搭接端2mm-4mm的部位开始黏贴，覆盖结合垫以及部分样品垫，起到阻拦全血，防止含液，以及使整个反应更加完全的作用。
8、进一步地，作为优选，所述检测条切割成3-4mm宽，加干燥剂于常温下密封保存。
9、进一步地，作为优选，所述的卡壳包括上板和下板，检测条被设置在上板和下板之间并被压合连接在一起。
10、在采用上述技术方案的基础上，本专利技术还可采用以下进一步的技术方案，或组合使用下述技术方案：
11、所述的质控线c线为羊抗鸡igy，稀释至0.5～2.0mg/ml进行划线，划液量为0.75-2μl/cm，划膜速度为50-100mm/s；所述的质控线r线为dnp-bsa，稀释至0.6～1.2mg/ml进行划线，划液量为0.75-2μl/cm，划膜速度为50-100mm/s；所述的检测线t线为ace2蛋白，稀释至0.5-1.5mg/ml进行划线，划液量为0.75-2μl/cm，划膜速度为50-100mm/s。
12、所述的与待测物结合的抗原为新型冠状病毒的s蛋白、s1蛋白或rbd蛋白中的一种。
13、结合垫处理液为缓冲液、保护剂及表面活性剂，其中缓冲液为10mm-100mm pb缓冲液，ph值为7.5-8.5；所述的保护剂为bsa、蔗糖、海藻糖、甘露醇以及山梨醇中的一种或几种，保护剂的总使用浓度为5％-25％；所述的表面活性剂为吐温-20、吐温-40、吐温-80及s9中的一种或几种，表面活性剂的总使用浓度为0.8％-2.0％。
14、样本垫处理液为缓冲液、保护剂及表面活性剂，其中缓冲液为10mm-100mm pb缓冲液，ph值为7.0-7.5；所述的保护剂为bsa、蔗糖、海藻糖、甘露醇以及山梨醇中的一种或几种，保护剂的总使用浓度为5％-15％；所述的表面活性剂为吐温-20、吐温-40、吐温-80及s9中的一种或几种，表面活性剂的总使用浓度为0.6％-2.5％。
15、胶体金的保存液为缓冲液、保护剂、增色剂以及表面活性剂，其中缓冲液为20mm-200mm的tris-hcl缓冲液，ph值为7.5-8.5；所述的保护剂为bsa、蔗糖、海藻糖、甘露醇以及山梨醇中的一种或几种，保护剂的总使用浓度为10％-30％；所述的增色剂为pvp、pva及peg中的一种或几种，增色剂的总使用浓度为0.2％-1.0％；所述的表面活性剂为吐温-20、吐温-40、吐温-80及s9中的一种或几种，表面活性剂的总使用浓度为0.05％-1.0％。
16、所述的结合垫喷标记了目的蛋白的金标复合物，胶体金上标记有鸡igg、dnp-bsa与待测物结合的抗原，置于鼓风干燥箱中，37℃烘干过夜。
17、所述的样本稀释液为缓冲液、金属离子螯合剂、表面活性剂以及防腐剂组成，其中缓冲液为20mm-200mm的tris-hcl；所述的金属离子螯合剂为乙二胺四乙酸钾盐和乙二胺四乙酸钠盐；所述的表面活性剂为brij 35、吐温-20、吐温-40、吐温-80及s9中的一种或者多种，其使用浓度为0.5％—1.5％；所述的防腐剂为proclin系列、krovin系列、nan3中的一种或者多种，其使用浓度为0.02％-0.2％。
18、本专利技术试剂盒检测新型冠状病毒中和抗体的原理如下：
19、新型冠状病毒中和抗体快速检测试剂盒(胶体金法)，是基于膜层析作用的免疫分析方法，用于检测人血清，血浆或全血中是否存在新型冠状病毒中和抗体。在金标垫上涂有重组新型冠状病毒目的蛋白-胶体金复合物，在硝酸纤维素膜上检测区(t)包被有人ace2蛋白。同时，在硝酸纤维素膜上质控区(c)包被质控抗体1，在金标垫上涂有对应的质控抗体1-胶体金复合物；在硝酸纤维素膜上质控区(r)包被质控抗体2，在金标垫上涂有对应的质控抗体2-胶体金复合物
20、在测试过程中，将样本与检测缓冲液分别添加到样本孔中，并扩散至结合垫，在此处胶体金标记的目标蛋白抗原与样本中的新型冠状病毒中和抗体结合。然后通过毛细管作用迁移到试纸的硝酸纤维素膜中，游离的目标蛋白抗原被捕获到已经固定在试纸上的ace2蛋白上。因此，样本中的新型冠状病毒中和抗体越多，与金标垫中目标蛋白抗原结合越多，则金标垫中剩余的目标蛋白抗原越少，与硝酸纤维素膜上结合的目标蛋白抗原越少，硝酸纤维素膜上检测区(t)的线条颜色越浅，样本中的新型冠状病毒中和抗体越少，则硝酸纤维素膜上检测区(t)的线条颜色越深，t线的强度与样本中中和抗体的浓度成反比；无论是否出现检测t线，质控线c和对照线r都应该本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种可检测人体血清、血浆、全血的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒，包括检测卡和样本稀释液，其特征在于，
2.如权利要求1所述的一种可检测人体血清、血浆、全血的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒，其特征在于，吸水纸的搭接端和结合垫的第一搭接端均粘贴在硝酸纤维素膜之上，使得硝酸纤维素膜能整面贴在底板上，样品垫的搭接端粘贴在结合垫的第二搭接端上；隐形不干胶覆盖部分硝酸纤维素膜、结合垫与硝酸纤维素膜的搭接端、结合垫及样品垫和结合垫的搭接端；所述的隐形不干胶，其长度为5mm-18mm，从硝酸纤维素膜距离与结合垫搭接端2mm-4mm的部位开始黏贴，覆盖结合垫以及部分样品垫，起到阻拦全血，防止含液，以及使整个反应更加完全的作用。
3.根据权利要求1所述的一种可检测人体血清、血浆、全血的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒，其特征在于，所述的质控线C线为羊抗鸡IgY，稀释至0.5～2.0mg/mL进行划线，划液量为0.75-2μL/cm，划膜速度为50-100mm/s；
4.根据权利要求1所述的一种可检测人体血清、血浆、全血的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒，其特征在于
5.根据权利要求1所述的一种可检测人体血清、血浆、全血的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒，其特征在于，结合垫处理液为缓冲液、保护剂及表面活性剂，其中缓冲液为10mM-100mM PB缓冲液，pH值为7.5-8.5；所述的保护剂为BSA、蔗糖、海藻糖、甘露醇以及山梨醇中的一种或几种，保护剂的总使用浓度为5％-25％；所述的表面活性剂为吐温-20、吐温-40、吐温-80及S9中的一种或几种，表面活性剂的总使用浓度为0.8％-2.0％。
6.根据权利要求1所述的一种可检测人体血清、血浆、全血的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒，其特征在于，样本垫处理液为缓冲液、保护剂及表面活性剂，其中缓冲液为10mM-100mM PB缓冲液，pH值为7.0-7.5；所述的保护剂为BSA、蔗糖、海藻糖、甘露醇以及山梨醇中的一种或几种，保护剂的总使用浓度为5％-15％；所述的表面活性剂为吐温-20、吐温-40、吐温-80及S9中的一种或几种，表面活性剂的总使用浓度为0.6％-2.5％。
7.根据权利要求1所述的一种可检测人体血清、血浆、全血的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒，其特征在于，胶体金的保存液为缓冲液、保护剂、增色剂以及表面活性剂，其中缓冲液为20mM-200mM的Tris-HCl缓冲液，PH值为7.5-8.5；所述的保护剂为BSA、蔗糖、海藻糖、甘露醇以及山梨醇中的一种或几种，保护剂的总使用浓度为10％-30％；所述的增色剂为PVP、PVA及PEG中的一种或几种，增色剂的总使用浓度为0.2％-1.0％；所述的表面活性剂为吐温-20、吐温-40、吐温-80及S9中的一种或几种，表面活性剂的总使用浓度为0.05％-1.0％。
8.根据权利要求1所述的一种可检测人体血清、血浆、全血的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒，其特征在于，所述的结合垫喷标记了目的蛋白的金标复合物，胶体金上标记有鸡IgG、DNP-BSA与待测物结合的抗原，置于鼓风干燥箱中，37℃烘干过夜。
9.根据权利要求1所述的一种可检测人体血清、血浆、全血的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒，其特征在于，所述的卡壳包括上板和下板，检测条被设置在上板和下板之间并被压合连接在一起。
10.根据权利要求1-9任意一项所述的一种可检测人体血清、血浆、全血的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒，其特征在于，所述的样本稀释液为缓冲液、金属离子螯合剂、表面活性剂以及防腐剂组成，其中缓冲液为20mM-200mM的Tris-HCl；所述的金属离子螯合剂为乙二胺四乙酸钾盐和乙二胺四乙酸钠盐；所述的表面活性剂为BRIJ 35、吐温-20、吐温-40、吐温-80及S9中的一种或者多种，其使用浓度为0.5％—1.5％；所述的防腐剂为Proclin系列、KroVin系列、NaN3中的一种或者多种，其使用浓度为0.02％-0.2％。
...【技术特征摘要】
1.一种可检测人体血清、血浆、全血的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒，包括检测卡和样本稀释液，其特征在于，
2.如权利要求1所述的一种可检测人体血清、血浆、全血的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒，其特征在于，吸水纸的搭接端和结合垫的第一搭接端均粘贴在硝酸纤维素膜之上，使得硝酸纤维素膜能整面贴在底板上，样品垫的搭接端粘贴在结合垫的第二搭接端上；隐形不干胶覆盖部分硝酸纤维素膜、结合垫与硝酸纤维素膜的搭接端、结合垫及样品垫和结合垫的搭接端；所述的隐形不干胶，其长度为5mm-18mm，从硝酸纤维素膜距离与结合垫搭接端2mm-4mm的部位开始黏贴，覆盖结合垫以及部分样品垫，起到阻拦全血，防止含液，以及使整个反应更加完全的作用。
3.根据权利要求1所述的一种可检测人体血清、血浆、全血的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒，其特征在于，所述的质控线c线为羊抗鸡igy，稀释至0.5～2.0mg/ml进行划线，划液量为0.75-2μl/cm，划膜速度为50-100mm/s；
4.根据权利要求1所述的一种可检测人体血清、血浆、全血的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒，其特征在于，所述的与待测物结合的抗原为新型冠状病毒的s蛋白、s1蛋白或rbd蛋白中的一种。
5.根据权利要求1所述的一种可检测人体血清、血浆、全血的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒，其特征在于，结合垫处理液为缓冲液、保护剂及表面活性剂，其中缓冲液为10mm-100mm pb缓冲液，ph值为7.5-8.5；所述的保护剂为bsa、蔗糖、海藻糖、甘露醇以及山梨醇中的一种或几种，保护剂的总使用浓度为5％-25％；所述的表面活性剂为吐温-20、吐温-40、吐温-80及s9中的一种或几种，表面活性剂的总使用浓度为0.8％-2.0％。
6.根据权利要求1所述的一种可检测人体血清、血浆、全血的新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒，其特征在于，样本垫处理液为缓冲液、保护剂及表面活性剂，其中缓冲液为10mm-100mm pb缓冲液，ph值为7.0-7.5；所述的保护...
【专利技术属性】
技术研发人员：伍超萍，龚庆，张玉，徐东鑫，徐文涛，随淑敏，
申请(专利权)人：中翰盛泰生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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