【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因检测，具体涉及一种nf1基因检测试剂及检测方法。
技术介绍
1、神经纤维蛋白（homo sapiens neurofibromin 1-nf1)的功能异常会导致一种常染色体显性疾病—1型神经纤维瘤病（nf1；omim 613113），发病率高达1:2500~3000，不受种族的影响（huson等人，1989；gutmann等人，1997；lammert等人，2005；evans等人，2010）。nf1特点是多发性咖啡斑（cafe-au-lai macule，calm）和皮肤神经纤维瘤（ferner等人，2007）。患者符合以下两个或两个以上特征，则可在临床上诊断为nf1（修订后的诊断标准，2021）：六个或六个以上的牛奶咖啡斑（青春期前大直径>5 mm或成人>15 mm）；两个或多个任何类型的神经纤维瘤或一个丛状神经纤维瘤；腋窝或腹股沟区域有雀斑；视神经胶质瘤；两个或多个虹膜-利希结节（虹膜错构瘤）；骨损伤（蝶骨发育不良或长骨皮质变薄，伴有或不伴有假血栓形成）；一级亲属中有确诊为nf1；以及nf1基因在白细胞中具有50%的变异。
2、人的nf1基因位于17q11.2中。它在基因组上跨越约300kb（gca_000001405.29）长度，包含57个组成外显子和3个可变剪切体，编码11至13kb的mrna（seq nm_000267）（cawthon等人，1990；viskochil等人，1990年；wallace等人，1990，viskochill等人，1998年）。无论是在基础科学还是
3、到目前为止，临床已经应用多种检测技术进行nf1的变异检测。变性高效液相色谱（dhplc）和gdna/cdna sanger法测序用于鉴定点变异；荧光原位杂交（fish）、定量聚合酶链反应（qpcr）和多重连接依赖性探针扩增（mlpa）用于检测基因内以及整个基因拷贝数变异。两种或多种技术的组合是目前nf1变异检测的策略（griffiths等人，2006；valero等人，2011；ko等人，2013；sabbagh等人，2013年；maruoka等人，2014年；zhu等人，2016年；tspi等人，2018年；milla等人，2018）。然而，传统的检测策略，复杂度高，周期长，敏感性差，在临床上，患者需要更简单快速且全面的nf1基因检测方案。
4、专利cn 116083560 a公开了一种用于着床前胚胎nf1基因检测的试剂盒，该试剂盒包括设计的n个引物对中的一个或更多个引物对，所述n为大于2的自然数，其中第2对引物的上游引物位于第1对引物的下游引物的上游或与之重叠，依此类推，第n对引物的上游引物位于第n-1对引物的下游引物的下游或与之重叠，即所述n个引物对扩增的序列涵盖了nf1基因所有外显子的完整cds区，且n个引物对的每个引物对的上游引物和下游引物分别设计在所述目标基因的不同外显子区域，从而实现了从mrna水平进行基因序列的扩增，避免假基因和内含子的干扰，覆盖全部的cds区。但该专利采用的是sanger一代测序技术，其引物对扩增的序列只涵盖nf1基因所有外显子的完整cds区，只能检测外显子区域的点突变，无法检测因内含子变异导致的异常选择性剪接；同时需明确致病位点，再进行检测，无法对未明确致病位点的nf1患者进行临床诊断。
技术实现思路
1、针对以上现有技术存在的缺点和不足之处，本专利技术的首要目的在于提供一种nf1基因检测试剂。
2、本专利技术的另一目的在于提供一种nf1基因检测方法。
3、本专利技术的检测试剂及检测方法通过多对引物对患者的nf1 cdna全长进行扩增，随后进行二代测序，并对测序数据进行点变异和选择性剪接分析，不仅可对未明确致病位点的nf1患者进行临床诊断，还可检测因内含子变异导致的异常选择性剪接，可以准确、快速地检测出nf1基因多种变异，具有灵敏、可行、快速和相对经济的优点。并可进一步使用外显子捕获技术对nf1 cdna进行ngs测序二次验证，可提高检测准确性。
4、本专利技术目的通过以下技术方案实现：
5、一种nf1基因检测试剂，包括如下六对引物组：
6、nf1-3-f1：tgggagcctgcactccacag（seq id no：1），
7、nf1-3-r1：agcagagcctccattgcttcct（seq id no：2）；
8、nf1-3-f2：ccgcattggattggtggcctaa（seq id no：3），
9、nf1-3-r2：agggcacaaaggaagccagt（seq id no：4）；
10、nf1-3-f3：cattgagcatcccactgcaggaa（seq id no：5），
11、nf1-3-r3：caccaatctctcaaaccgatcagcc（seq id no：6）；
12、nf1-3-f4：atgttcgtgtgcttgggaatatggt（seq id no：7），
13、nf1-3-r4：gccctggtttgcaatggttaaggt（seq id no：8）；
14、nf1-3-f5：taactgtaactcctgggtcag（seq id no：9），
15、nf1-3-r5：tatacggagactatctaaagtatgcag（seq id no：10）；
16、nf1-3-f6：tggcattagcaaagtcaagtc（seq id no：11），
17、nf1-3-r6：ggtcactagtgaagagcccatgt（seq id no：12）。
18、进一步地，所述nf1基因检测试剂还包括pcr缓冲液、dntp、dscdna、dna聚合酶和ddh2o。
19、进一步优选地，所述pcr缓冲液为5× prime star gxl buffer。
20、进一步优选地，所述dna聚合酶为prime star gxl dna polymerase。
21、进一步优选地，所述nf1基因检测试剂具体成分组成如下：
22、5× prime star gxl buffer 5μl；
23、2.5μm dntp 2μl；
24、10µm 混合引物组本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种NF1基因检测试剂，其特征在于，包括如下六对引物组：
2.根据权利要求1所述的一种NF1基因检测试剂，其特征在于，所述NF1基因检测试剂还包括PCR缓冲液、dNTP、dscDNA、DNA聚合酶和ddH2O。
3.根据权利要求2所述的一种NF1基因检测试剂，其特征在于，所述PCR缓冲液为5×Prime STAR GXL buffer。
4.根据权利要求2所述的一种NF1基因检测试剂，其特征在于，所述DNA聚合酶为PrimeSTAR GXL DNA polymerase。
5.根据权利要求1所述的一种NF1基因检测试剂，其特征在于，所述NF1基因检测试剂具体成分组成如下：
【技术特征摘要】
1.一种nf1基因检测试剂，其特征在于，包括如下六对引物组：
2.根据权利要求1所述的一种nf1基因检测试剂，其特征在于，所述nf1基因检测试剂还包括pcr缓冲液、dntp、dscdna、dna聚合酶和ddh2o。
3.根据权利要求2所述的一种nf1基因检测试剂，其特征在于，所述pcr缓冲液...
【专利技术属性】
技术研发人员：张巍，陈天达，刘天池，
申请(专利权)人：广州嘉检医学检测有限公司，
类型：发明
国别省市：
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