一种禽流感病毒及用于检测、预防禽流感病毒的试剂盒和疫苗。本发明专利技术属于生物技术领域，涉及分离的禽流感病毒新毒株，本发明专利技术公开了三种Ｈ９Ｎ２禽流感病毒。本发明专利技术还公开了三种检测Ｈ９Ｎ２禽流感病毒的试剂盒，以及三种用于预防的Ｈ９Ｎ２禽流感病毒的疫苗，以及抗Ｈ９Ｎ２禽流感病毒的抗体。通过本发明专利技术的试剂盒，可以迅速的检测或者排除是否是由本发明专利技术的三种基因型的Ｈ９Ｎ２禽流感病毒所致的禽流感，从而尽快的控制禽流感疫情。同时，接种本发明专利技术的疫苗，可以预防本发明专利技术的三种基因型的Ｈ９Ｎ２禽流感病毒的感染。并且本发明专利技术还可以为禽流感病毒监测系统提供生物信息。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
，涉及三种H9N2禽流感病毒的新毒株及用于检测、预防 禽流感病毒的试剂盒和疫苗。
技术介绍
禽流感(Avian influenza, Al)是由A型流感病毒引起的一种严重危害禽类健康 的传染性疾病。禽类感染禽流感病毒(Avian influenza virus, AIV)后，症状可表现为非 显性感染、亚临诊感染，或轻度呼吸道疾病、产蛋量降低直至急性全身致死性疾病等多种形 式。根据AIV对易感鸡致病性的差异，可将AIV分为高致病性AIV和低致病性AIV。高致病 性AIV(HPAIV)感染禽类所导致的禽流感对养禽业具有毁灭性的打击，故被国际兽疫局规 定为A类疾病；而一些低致病性AIVjn H9AIV的感染虽然对感染禽的致死率低，但可引起 产蛋量的减少和淘汰率的上升，并造成免疫抑制，引起其他疫病的发生或混合感染，对养禽 业造成的经济损失也相当可观。因此，AI—直是威胁世界养禽业的主要疾病之一，世界各 国都十分重视对AIV的研究工作。已有研究表明来自于禽类的H9N2禽流感病毒能偶尔从 禽类传染给哺乳动物，包括人和猪。Ck/Bei-like和Gl-Iike H9N2禽流感病毒在1990底首 次从人和猪中分离到。2003年分离到的人H9N2禽流感病毒是一个新的重组体，很可能来源 于当地的活禽市场。这种跨种间传播表明目前的H9N2禽流感病毒对人仍有潜在的感染性。 AIV存在着广泛的抗原漂移和抗原转变现象，其抗原变异频率很高。因此测定AIV的全基因 序列，对于研究禽流感病毒的检测、分布、流行规律以及控制禽流感的流行、蔓延均具有重 要的意义。本研究分离鉴定了 2002-2008年上海地区活禽市场的H9N2亚型禽流感病毒，经 全基因序列测定分为三种基因型，对这三种基因型毒株的8个基因片段进行关键位点的分 析以及基因进化关系分析，表明这三种基因型与目前报道的基因型存在差异，为H9N2禽流 感病毒Ck/Bei系中的三种新的基因型，分别命名为Yl，Y2，Y3。
技术实现思路
本专利技术提供了三种H9N2禽流感病毒及用于检测、预防禽流感病毒的试剂盒和疫 苗，所述的这三种H9N2禽流感病毒及用于检测、预防禽流感病毒的试剂盒和疫苗要解决现 有技术中无法确认和预防新的禽流感病毒从而导致新的禽流感疫情在禽类或者人类传播 的技术问题。本专利技术提供了一种分离的禽流感病毒(Yl)，其基因组由SEQ ID NO =USEQ ID NO 2、SEQ ID NO :3、SEQID NO :4、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO 7 和 SEQID NO 8 所 示的RNA片段组成。本专利技术还提供了一种分离的禽流感病毒，其保藏号为CGMCC NO :3117。本专利技术还提供了一种用于检测上述的分离的禽流感病毒的试剂盒，含有上述的分 离的禽流感病毒的RNA抽提液、RT反转录反应液和含有引物的PCR反应液，所述的PCR反 应液中的引物为HA 基因上游引物 P1 5，-CAGGGGAATTTCACAACCAGTCAAA-3，，下游引物P2 :5，-GCCAGGGTGTTTTTGCCAATTATATAC-3，；M 基因上游引物 P1 5，-AAGATGAGCCTTCTAACCGAGGTC-3，，下游引物P2 :5，-CGGGGTAGTTTTTTACTCCAGCTCTATG-3，；NA 基因上游引物 P1 5，-AGCAGGAGTGAAAATGAATCCA-3，，下游弓丨物P2 5，-AATTGCGAGAGCTTATATAGGC-3，；NP 基因上游引物 P1 5，-ATCATGGCGTCTCAAGGCACCAAA-3，，下游引物P2 :5，-GCCTCTTTAATTGTCATACTCCCCTGC-3，；NS 基因上游引物 P1 5，-ACATAATGAACTCCAACACTGTGTC-3，，下游弓丨物P2 5，-GCAAATAAGCTGAAACGAGAAAGTTC-3，；PA 基因上游引物 P1 5，-AAATGGAAGACTTTGTGCGACAATG-3，，下游弓丨物P2 5，-ACAACTATCTCAGTGCATGTGTGAG-3，；PB1 基因上游引物 P1 5，-AGGCAAACCATTTGAATGGATGTCA-3，，下游引物P2 :5，-AATTCACTATTTTTGCCGTCTGAGC-3，； PB2 基因上游引物 P1 5，-GCGAAAGCAGGTCAATTATATTCAG-3，，下游引物P2 5，-AACAATTCGACACTAATTGATGGCC-3，。本专利技术还提供了一种用于预防上述的禽流感病毒的疫苗，含有灭活的上述的分离 的禽流感病毒。本专利技术还提供了一种用于预防禽流感病毒的疫苗的制备方法，其包括如下步骤 a)，一个疫苗抗原液制备及毒价测定的步骤，将上述的禽流感病毒用灭菌生理盐水稀释后， 接种非免疫鸡胚，收取尿囊液，测定其毒价在109. 6-109. 8ELD50, HA价在1 256-512之 间，病毒液置冰箱中保存备用；b)，一个抗原液灭活的步骤，将福尔马林溶液加入病毒液中，检验合格后作为制备 抗原液；c)，一个制备油相佐剂的步骤；d)，一个制备疫苗水相的步骤；e)，一个配制疫苗的步骤，将油相与水相预混后，再将混合物注入到高压勻浆泵内 乳化，制成油包水乳剂即为疫苗。进一步的，所述的油相佐剂由白油、司本-80和硬脂酸铝配制混合而成。进一步的，在制备疫苗水相的步骤中，将吐温-80经高温灭菌后，加入到己灭活抗 原液中，吐温-80的终浓度在2% -5%之间，经充分溶解混合即为水相。本专利技术还提供了一种抗体，抗上述的一种分离的禽流感病毒(Yl)。本专利技术还提供了一种分离的禽流感病毒(Y2)，其基因组由SEQ ID NO :9、SEQID NO 10,SEQ ID NO =IUSEQ ID NO 12,SEQ ID NO 13,SEQ ID NO 14、SEQ ID N0:15 禾口 SEQ ID NO 16所示的RNA片段组成。本专利技术还提供了一种分离的禽流感病毒，其保藏号为CGMCC NO :3118。本专利技术还提供了一种用于检测上述的分离的禽流感病毒的试剂盒，含有上述的分 离的禽流感病毒的RNA抽提液、RT反转录反应液和含有引物的PCR反应液，所述的PCR反 应液中的引物为HA 基因上游引物 P 1:5，-CAGGGGAATTTCACAACCAGTCAAA-3，，下游引物P2 :5，-GCCAGGGTGTTTTTGCCAATTATATAC-3，；M 基因上游引物 P1 5，-AAGATGAGCCTTCTAACCGAGGTC-3，，下游引物P2 :5，-CGGGGTAGTTTTTTACTCCAGCTCTATG-3，；NA 基因上游引物 P1 5，-AGCAGGAGTGAAAATGAATCCA-3，，下游引物P2 :5，-AATTGCGAGAGCTTATATAGGC-3，； NP 基因上游引物 P1 5，-ATCATGGCGTCTCAAGGCACCAAA-3，，下游引物P2 :5，-GCCTCTTTAATTGTCATACTCCCCTGC-3，；NS 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种分离的禽流感病毒，其基因组由ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７和ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８所示的ＲＮＡ片段组成。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘佩红，周锦萍，葛菲菲，刘健，张维谊，鞠厚斌，李凯航，
申请(专利权)人：上海市动物疫病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：31
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