【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种纳米复合材料的制备方法，具体涉及一种卵清蛋白负载硝基自由基氮氧化物纳米复合材料的制备方法，该方法简单稳定，可广泛应用于生物、医学领域。
技术介绍
1、肿瘤早已成为地球上引起人类死亡最多的疾病之一，在20世纪导致了数百万人的死亡。为了应对其对人类的威胁，近些年来科学家们进行了无数次的尝试，开创了许多种治疗方法。但是由于肿瘤的异质性和一部分并发症，导致患者的存活率并不高。因此，发展更精准的肿瘤诊断技术和有效的肿瘤治疗方法对挽救肿瘤患者生命仍具有重大现实意义。
2、近年来，将纳米药物与癌症疗法相结合成为了肿瘤诊疗发展的一大趋势，而且已经有一部分纳米药物通过批准进入市场。纳米级诊疗体系成为一种替代性诊疗肿瘤的模型，它有良好的靶向性和较小的副作用，克服了传统疗法的局限性。新型癌症治疗方法中，癌症免疫疗法已经成为继手术疗法、放疗、化疗和靶向治疗后的第五大主流疗法，已经取得了令人瞩目的成果。癌症免疫疗法是通过训练和激活人体自身的免疫系统，增强自身的免疫能力，进而检测并杀死肿瘤细胞的治疗方法。而基于纳米药物的癌症免疫疗法有三个特有的优势：一是唤醒免疫系统，二是触发抗原的特异性免疫，三是提供长期的免疫记忆作用。纳米材料可以调节宿主的抗癌免疫应答，为开发新型癌症治疗方法提供了新的思路。
3、随着临床诊断技术和生物医学研究领域的发展，开发更加安全有效的疾病诊断和治疗方案成为研究的重中之重。从w.c.伦琴发现x射线算起，医学成像技术已经发展了100多年，包括核磁共振成像(mri)、计算机断层扫描(ct)、伽马射
4、合成基于有机氮氧化物(tempo)的新型有机mri造影剂并负载模型抗原ova(卵清蛋白)，提高其生物相容性和组织靶向性，增强其抗肿瘤效果和激活机体免疫功能的能力，增强核磁共振成像对比度。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供一种具有核磁共振增强效果和增强免疫应答的卵清蛋白负载硝基自由基氮氧化物纳米复合材料及其制备方法。
2、为了解决技术问题，本专利技术首先提供了一种卵清蛋白负载硝基自由基氮氧化物纳米复合材料的制备方法，包括如下步骤：
3、1)将壳聚糖溶解在超纯水中，同时加入冰醋酸，混合搅拌后得到溶液a；
4、2)将4-羧基-2,2,6,6-四甲基哌啶-氮氧化物溶解在二氯甲烷或二甲基亚砜中，之后加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(edc.hcl)和n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)，在0℃～5℃下混合搅拌后得到溶液b；
5、3)在步骤1)所得的a溶液中，加入吐温80溶液；再加入步骤2)所得的b溶液，混合得到混合液后进行搅拌，待反应结束进行透析，离心洗涤后得到cs-tempo纳米粒子，将洗涤得到的cs-tempo纳米粒子分散在超纯水中，得到cs-tempo纳米粒子分散液；
6、4)将卵清蛋白，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(edc.hcl)和n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)在0℃～5℃下混合搅拌，再加入步骤3)得到的cs-tempo纳米粒子分散液，混合搅拌，反应结束后进行离心洗涤，得到cs-tempo-ova纳米粒子。
7、作为本专利技术的优选方案，所述步骤1)的a液中所添加的壳聚糖的脱乙酰度大于85％，壳聚糖和超纯水的摩尔比为650:1～700:1，加入的冰醋酸和超纯水的体积比为1:100～1:200。
8、作为本专利技术的优选方案，所述步骤2)的b液中所添加的4-羧基-2,2,6,6-四甲基哌啶-氮氧化物、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(edc.hcl)和n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)的摩尔比为1:(0.6～0.7):(0.5～0.7)，4-羧基-2,2,6,6-四甲基哌啶-氮氧化物和二氯甲烷或二甲基亚砜的摩尔比为4:1～6:1。
9、作为本专利技术的优选方案，其特征在于，所述步骤3)中，a溶液和b溶液的体积比为4:3～1:1；所添加的吐温80溶液体积浓度为1％～3％，添加的吐温80溶液和混合液体积比为1:35～2:35。
10、作为本专利技术的优选方案，所述步骤3)中，反应温度为5℃～25℃，反应条件为避光，搅拌速度为500-700rpm，所述步骤3)中，混合搅拌时间为36h-50h。
11、作为本专利技术的优选方案，所述步骤3)中，透析时间为2～4天，透析袋分子量为250～300da。
12、作为本专利技术的优选方案，所述步骤4)所添加的卵清蛋白、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(edc.hcl)、n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)和cs-tempo的摩尔比为(100～200):200:(300～400):1。
13、作为本专利技术的优选方案，所述步骤4)中得到的cs-tempo-ova纳米粒子分散到pbs中，并在4℃进行保存。
14、本专利技术还提供了上述的卵清蛋白负载硝基自由基氮氧化物纳米复合材料在制备核磁共振成像造影剂或肿瘤免疫治疗药物中的应用。
15、与现有技术相比，本专利技术具有的有益效果包括：
16、(1)本专利技术制备的卵清蛋白负载硝基自由基氮氧化物纳米复合材料(cs-tempo-ova纳米粒子)，r1弛豫率为3.1mm-1s-1，在核磁共振成像造影剂方面有潜在的应用；
17、(2)本专利技术制备的负载了模型抗原ova的cs-tempo纳米粒子还在体外表现出有效的提高树突状细胞成熟的作用，能够间接激活t细胞免疫应答，从而达到免疫治疗的效果；
18、(3)本专利技术的制备方法对实验仪器的要求低，方法简单易于操作，得到的纳米颗粒形状尺寸均一，分散性良好。
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1.一种卵清蛋白负载硝基自由基氮氧化物纳米复合材料的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的卵清蛋白负载硝基自由基氮氧化物纳米复合材料的制备方法，其特征在于，所述步骤1)的A液中所添加的壳聚糖的脱乙酰度大于85％，壳聚糖和超纯水的摩尔比为650:1～700:1，加入的冰醋酸和超纯水的体积比为1:100～1:200。
3.根据权利要求1所述的卵清蛋白负载硝基自由基氮氧化物纳米复合材料的制备方法，其特征在于，所述步骤2)的B液中所添加的4-羧基-2,2,6,6-四甲基哌啶-氮氧化物、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(EDC.HCl)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)的摩尔比为1:(0.6～0.7):(0.5～0.7)，4-羧基-2,2,6,6-四甲基哌啶-氮氧化物和二氯甲烷或二甲基亚砜的摩尔比为4:1～6:1。
4.根据权利要求1所述的卵清蛋白负载硝基自由基氮氧化物纳米复合材料的制备方法，其特征在于，所述步骤3)中，A溶液和B溶液的体积比为4:3～1:1；所添加的吐温80溶液体积浓度为1％～3％，添加的吐温80溶液
5.根据权利要求1所述的卵清蛋白负载硝基自由基氮氧化物纳米复合材料，其特征在于，所述步骤3)中，反应温度为5℃～25℃，反应条件为避光，搅拌速度为500-700rpm，所述步骤3)中，混合搅拌时间为36h-50h。
6.根据权利要求1所述的卵清蛋白负载硝基自由基氮氧化物纳米复合材料的制备方法，其特征在于，所述步骤3)中，透析时间为2～4天，透析袋分子量为250～300Da。
7.根据权利要求1所述的卵清蛋白负载硝基自由基氮氧化物纳米复合材料的制备方法，其特征在于，所述步骤4)所添加的卵清蛋白、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(EDC.HCl)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和CS-TEMPO的摩尔比为(100～200):200:(300～400):1。
8.根据权利要求1所述的卵清蛋白负载硝基自由基氮氧化物纳米复合材料的制备方法，其特征在于，所述步骤4)中得到的CS-TEMPO-OVA纳米粒子分散到PBS中，并在4℃进行保存。
9.一种根据权利要求1-8任一项所述的制备方法制备的卵清蛋白负载硝基自由基氮氧化物纳米复合材料。
10.一种权利要求9所述的卵清蛋白负载硝基自由基氮氧化物纳米复合材料在制备核磁共振成像造影剂或肿瘤免疫治疗药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种卵清蛋白负载硝基自由基氮氧化物纳米复合材料的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的卵清蛋白负载硝基自由基氮氧化物纳米复合材料的制备方法，其特征在于，所述步骤1)的a液中所添加的壳聚糖的脱乙酰度大于85％，壳聚糖和超纯水的摩尔比为650:1～700:1，加入的冰醋酸和超纯水的体积比为1:100～1:200。
3.根据权利要求1所述的卵清蛋白负载硝基自由基氮氧化物纳米复合材料的制备方法，其特征在于，所述步骤2)的b液中所添加的4-羧基-2,2,6,6-四甲基哌啶-氮氧化物、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(edc.hcl)和n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)的摩尔比为1:(0.6～0.7):(0.5～0.7)，4-羧基-2,2,6,6-四甲基哌啶-氮氧化物和二氯甲烷或二甲基亚砜的摩尔比为4:1～6:1。
4.根据权利要求1所述的卵清蛋白负载硝基自由基氮氧化物纳米复合材料的制备方法，其特征在于，所述步骤3)中，a溶液和b溶液的体积比为4:3～1:1；所添加的吐温80溶液体积浓度为1％～3％，添加的吐温80溶液和混合液体积比为1:35～2:35。
5.根据权利要求1所述的卵清蛋白负载硝基自由...
【专利技术属性】
技术研发人员：孔祥东，侯亦可，祖柏尔，赵瑞波，章瀚，孔飞，
申请(专利权)人：浙江理工大学，
类型：发明
国别省市：
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