【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及遗传病致病基因的检测，具体涉及一种检测sca3致病基因突变的方法。
技术介绍
1、正常sca3基因序列中cag核苷酸序列有12-44次拷贝，而当这种不稳定的序列拷贝数达到52-86次，会导致马查多·约瑟夫病。马查多·约瑟夫病是一种临床和基因异质性小脑疾病。患者表现出步态的渐进不协调，而且手部、言语和眼部动作协调性差，原因是小脑退化，脑部和脊髓的介入参差不齐。
2、目前，现有技术中的检测sca3基因的技术主要是基于某个突变的单核苷酸位点的扩增和测序方法，现有技术的方法存在的显著缺点是步骤繁琐，费用昂贵。
3、为此，本专利技术旨在提供一种检测sca3致病基因突变的方法，以解决上述问题。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是为了解决上述问题，提供一种检测sca3致病基因突变的方法。
2、为了达到上述目的，本专利技术的技术方案如下：
3、本专利技术提供了一种检测sca3致病基因突变的方法，包括以下步骤：
4、s1、对被检测者的静脉采血进行基因组dna提取；
5、s2、设计引物sca3forward和sca3reward，将sca3基因内含子1到内含子2序列中包含cag的序列在体外扩增出来；
6、s3、体外扩增可得到dna片段，正常sca3的扩增片段大小在958bp-1054bp之间，属阴性，而异常基因的扩增片段大小在1078bp-1180bp之间，属阳性。通过琼脂糖凝胶电泳，对扩增片段的大小进
7、s4、采用labchipgxtouch生物分析仪验证扩增片段的大小，实现sca3致病基因突变的确认。
8、进一步地，在步骤s2扩增sca3片段的过程中，使用的引物序列为：
9、sca3forward：tcaggtggctacttttgg，
10、sca3reward：aatggtgagcaggccttacct。
11、进一步地，设计上述引物，将sca3基因中包含cag重复序列的片段扩增出来，扩增片段序列如seq id no.1所示。
12、seq id no.1：
13、tcaggtggctacttttggtgggatggtcaggaaaggcatctctggggagataaattttaagctcagacctgagtgaaaagaatgagccagccatggaaacattatgttaactcacatggtagtttgaaatgctttatctgatcaaaggtacttatttttggtgactttcaacaatattaagggtctataaaccaacactcatttgcataagaataactaccagtgaatctttttgtatgataggttttttgtttgttgtttttttgagacagagtctcgctctgtcgcccaggctggagtgcagtggcgcgatcttggctcactgcaacctctacctccccggttcaagtgattctcctgcctcagcctcccaaagtagctgggattacaggtgcctgccaccacgcctggctaatttttgtatttttagtagagatggggtttcaccgtgttgtccaggctcgtgtcaaacttctgacctcaagccatccacccgcctcggcctcccaaagtgctgggattacaggtgtgagccaccactcctggccatgataggttattttgtgatgaaaatacctacctcttaatttgtctgataaatttaaattttatgtctagatttcctaagatcagcacttccatattttaaagtaatctgtatcagactaactgctcttgcattcttttaataccagtgactactttgattcgtgaaacaatgtattttccttatgaatagtttttctcatggtgtatttattcttttaagttttgttttttaaatatacttcacttttgaatgtttcagacagcagcaaaagcagcaacagcagcagcagcagcagcagcagggggacctatcaggacagagttcacatccatgtgaaaggccagccaccagttcaggagcacttgggagtgatctaggtaaggcctgctcaccatt。
14、进一步地，在步骤s2中pcr反应扩增sca3片段中，扩增条件为：预变性95℃，5min；变性95℃，1min；退火56℃，1min；延伸72℃，1min；充分延伸72℃，10min；循环数30。
15、在本专利技术的上述方案中，步骤s1中采取外周静脉血于edta抗凝试管中，立即混匀，使用tiangen试剂盒relaxgeneblooddnasystem提取基因组dna。4℃保存的血液不得超过一周。
16、作为优选，外周静脉血采集的量为1.5ml，所述试剂盒relaxgene blooddnasystem试剂盒，每次血液用量为300μl。
17、与现有技术相比，本方案的有益效果：
18、本专利技术的该方法利用sca3基因序列中不稳定的cag拷贝，在适当的位置设计扩增引物，将包含cag重复序列的片段扩增出来，直接通过扩增产物的大小区分sca3基因是否发生突变。并且，本专利技术的方法操作简单、方便，能高效的区分sca3基因是否异常。
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1.一种检测SCA3致病基因突变的方法，其特征是：包括以下步骤：
2.如权利要求1所述一种检测SCA3致病基因突变的方法，其特征在于:在步骤S2扩增SCA3片段的过程中，使用的引物序列为：
3.如权利要求2所述一种检测SCA3致病基因突变的方法，其特征在于:设计上述引物，将SCA3基因中包含CAG重复序列的片段扩增出来，扩增片段序列如SEQ ID NO.1所示。
4.如权利要求3所述一种检测SCA3致病基因突变的方法，其特征在于:在步骤S2中PCR反应扩增SCA3片段中，扩增条件为：预变性95℃，5min；变性95℃，1min；退火56℃，1min；延伸72℃，1min；充分延伸72℃，10min；循环数30。
【技术特征摘要】
1.一种检测sca3致病基因突变的方法，其特征是：包括以下步骤：
2.如权利要求1所述一种检测sca3致病基因突变的方法，其特征在于:在步骤s2扩增sca3片段的过程中，使用的引物序列为：
3.如权利要求2所述一种检测sca3致病基因突变的方法，其特征在于:设计上述引物，将sca3基因中包含cag重复序...
【专利技术属性】
技术研发人员：李生斌，李小明，
申请(专利权)人：西安华壹健康医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：
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