【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子检测领域，具体涉及胃蛋白酶原ii的化学发光检测试剂盒及方法。
技术介绍
1、萎缩性胃炎也称慢性萎缩性胃炎，以胃黏膜上皮和腺体萎缩，数目减少，胃黏膜变薄，黏膜基层增厚，或伴幽门腺化生和肠腺化生，或有不典型增生为特征的慢性消化系统疾病。常表现为上腹部隐痛、胀满、嗳气，食欲不振，或消瘦、贫血等，无特异性。是一种多致病因素性疾病或癌前病变。
2、胃蛋白酶原是胃蛋白酶的前体，根据其生化性质和免疫原性将其分成2个亚群，1-5组分的免疫原性相同，称为胃蛋白酶原i，主要由胃底腺的主细胞和黏液颈细胞分泌；组分6和7被称为胃蛋白酶原ii，除由胃底腺的主细胞和黏液颈细胞分泌外，贲门腺和胃窦的幽门腺的黏液颈细胞以及十二指肠上段也能产生胃蛋白酶原ii。通常情况下，约有1%的pg透过胃黏膜毛细血管进入血液循环，进入血液循环的pg在血液中非常稳定。血清pg i和pg ii反映胃黏膜腺体和细胞的数量，也间接反映胃黏膜不同部位的分泌功能。当胃黏膜发生病理变化时，血清pg含量也随之改变。因此，监测血清中pg的浓度可以作为监测胃黏膜状态的手段。
3、血清胃蛋白酶原水平反映了不同部位胃粘膜的形态和功能：pgi是检测胃泌酸腺细胞功能的指针，胃酸分泌增多pgi升高，分泌减少或胃粘膜腺体萎缩pgi降低；pgii与胃底粘膜病变的相关性较大（相对于胃窦粘膜），其升高与胃底腺管萎缩、胃上皮化生或假幽门腺化生、异型增值有关；pgi/ii比值进行性降低与胃粘膜萎缩进展相关。因此，联合测定pgi和pgii比值可起到胃底腺粘膜“血清学活检”的作用
4、专利cn105372426a公开了一种胃蛋白酶原ii(pgii)定量测定试剂盒，该试剂盒包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂和发光底物。本专利技术还公开了该试剂盒的制备方法与使用该试剂盒检测胃蛋白酶原ii(pgii)的方法。该专利技术以异硫氰酸荧光素标记的胃蛋白酶原ii(pgii)包被抗体和碱性磷酸酶标记的胃蛋白酶原ii(pgii)标记抗体制备抗试剂，以抗异硫氰酸荧光素抗体偶联羧基磁珠制得磁微粒试剂；所述的磁珠微粒缓冲液的配置方法为：tris：12.12mg，氯化钠5.82mg，甲基纤维醚50g，加入1l纯化水中，充分搅拌至完全溶解。该专利技术的检测试剂盒性能可靠、灵敏度高、线性范围宽，可配合半自动、全自动仪器使用。
5、专利cn102426236a公开了一种胃蛋白酶原ii(pgii)的定量测定试剂盒，其特征在于，该试剂盒包含pgii磁分离试剂，酶反应物，反应增强剂，稀释液，pgii校准品、pgii质控品，清洗液浓缩液以及底物溶液。该专利技术中公开了磁珠缓冲液配制操作步骤，配制1l：（1）称取tris 4.58g和nacl6.81g于1l容器中，称取0.96g tween-20于20ml容器中加适量水使其完全溶解后，倒入上述1l容器中；（2）用移液器将proclin-300量取0.2ml于10ml纯化水的烧杯中完全溶解后，倒入上述1l容器中，然后在上述1l容器中加入800ml纯化水，充分搅拌；（3）调节ph，控制ph在7.95-8.05之间；（4）称取bsa 3g倒入上述1l容器中；（5）最后定容至1000ml，用0.2um滤器过滤即得。该专利技术还公开了该试剂盒的制备方法。该专利技术试剂盒将化学发光技术与免疫磁微粒相结合，提供了一种接近均相的反应体系。
6、缓冲体系直接影响胃蛋白酶原ii的检测灵敏度和准确性，因此，亟需研发一种缓冲液，进一步提高检测的准确性和灵敏度。
技术实现思路
1、为了解决上述问题，本专利技术提供了一种胃蛋白酶原ii的化学发光检测方法，所述的方法中包括磁微粒载体的缓冲体系和酶标试剂的缓冲体系，确定缓冲液组分以及各组分之间的比例，能显著提高检测的准确性。
2、一方面，本专利技术提供了一种胃蛋白酶原ii检测的试剂盒，所述的试剂盒包括酶标试剂的缓冲体系a，所述的缓冲体系a，由以下成分组成：：tris-hcl 3.0-30 g/l；氯化钠7-12g/l；牛血清白蛋白1.0-30 g/l；蔗糖30-40g/l；酶水解明胶15-35g/l；酶稳定剂100-200ml/l；羟基磷灰石1.0-5.0g/l；月桂醇聚氧乙烯醚1.0-3.0g/l；1m 氯化镁0.2-10ml/l；1m氯化锌0.2-10ml/l；余量为水；所述缓冲体系ph值7.4-8.2。
3、优选地，所述的缓冲体系a，由以下成分组成：tris-hcl 20 g/l；氯化钠9.0 g/l；牛血清白蛋白20 g/l；蔗糖35 g/l；酶水解明胶20g/l；酶稳定剂150ml/l；羟基磷灰石2g/l；月桂醇聚氧乙烯醚1.5g/l；1m 氯化镁5ml/l；1m氯化锌5ml/l；余量为水；所述缓冲体系ph值8。
4、具体地，所述的酶稳定剂可以是碱性磷酸酶结合物酶稳定剂。
5、具体地，所述的试剂盒还可以包括磁微粒载体的缓冲体系b，所述的缓冲体系b，由以下成分组成：十二水合磷酸氢二钠5.6-5.9g/l；磷酸二氢钠0.55-0.60g/l；氯化钠5-9g/l；牛血清白蛋白1-10g/l；蔗糖75-135g/l；2-羟乙基纤维素0.5-10 g/l；明胶3-20g/l；羟基磷灰石5-20g/l；0.1%-0.3%吐温；余量为水；所述缓冲体系ph值 7.0-8.0。
6、优选地，所述的缓冲体系b，由以下成分组成：十二水合磷酸氢二钠5.9 g/l；磷酸二氢钠0.60g/l；氯化钠5g/l；牛血清白蛋白1g/l；蔗糖75g/l；2-羟乙基纤维素6g/l；明胶3g/l；羟基磷灰石5g/l；0.1%吐温；余量为水；所述缓冲体系ph值7.0。
7、具体地，前述的酶标试剂的缓冲体系a用于混合酶标记胃蛋白酶原ii抗体偶联物。
8、进一步具体地，所述的酶标记胃蛋白酶原ii抗体偶联物中的酶可以是碱性磷酸酶。
9、具体地，前述的磁微粒载体的缓冲体系b用于混合胃蛋白酶原ii抗体磁微粒偶联物。
10、具体地，所述的试剂盒还包括但不限于：校准品和/或质控品。
11、具体地，所述的试剂盒可以是磁微粒化学发光法定量分析试剂盒。
12、又一方面，本专利技术提供了前述的试剂盒在检测胃蛋白酶原ii中的应用。
13、又一方面，本专利技术提供了一种缓冲体系在制备萎缩性胃炎诊断试剂盒中的应用，所述的应用包括检测胃蛋白酶原ii；所述的缓冲体系包括酶标试剂的缓冲液，所述的缓冲体系a，由以下成分组成：tris-hcl 3.0-30 g/l；氯化钠7-12g/l；牛血清白蛋白1.0-30g/l；蔗糖30-40g/l；酶水解明胶15-35g/l；酶稳定剂100-200ml/l；羟基磷灰石1.0-5.0g/l；月桂醇聚氧乙烯醚1.0-3.0g/l；1m 氯化镁0.2-10ml/l；1m氯化锌0.2-10ml/l；余量为水；所述缓冲体系ph值7.4-8.2。
14、优选地，所述的缓冲体系a，由以下成分组成：：tris-hcl 20g本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种胃蛋白酶原II检测的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括酶标试剂的缓冲体系A，所述的缓冲体系A，由以下成分组成：Tris-HCl 3.0-30 g/L；氯化钠7-12g/L；牛血清白蛋白1.0-30g/L；蔗糖30-40g/L；酶水解明胶15-35g/L；酶稳定剂100-200mL/L；羟基磷灰石1.0-5.0g/L；月桂醇聚氧乙烯醚1.0-3.0g/L；1M 氯化镁0.2-10mL/L；1M氯化锌0.2-10mL/L；余量为水；所述缓冲体系pH值7.4-8.2。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的缓冲体系A，由以下成分组成：Tris-HCl 20 g/L；氯化钠9.0 g/L；牛血清白蛋白20 g/L；蔗糖35 g/L；酶水解明胶20g/L；酶稳定剂150mL/L；羟基磷灰石2g/L；月桂醇聚氧乙烯醚1.5g/L；1M 氯化镁5mL/L；1M氯化锌5mL/L；余量为水；所述缓冲体系pH值8。
3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述的酶稳定剂为碱性磷酸酶结合物酶稳定剂。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述的缓冲体系B，由以下成分组成：十二水合磷酸氢二钠5.9g/L；磷酸二氢钠0.60g/L；氯化钠5g/L；牛血清白蛋白1g/L；蔗糖75g/L；2-羟乙基纤维素6g/L；明胶3g/L；羟基磷灰石5g/L；0.1%吐温；余量为水；所述缓冲体系pH值7.0。
6.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述的缓冲体系A用于混合酶标记胃蛋白酶原II抗体偶联物。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述的酶标记胃蛋白酶原II抗体偶联物中的酶为碱性磷酸酶。
8.根据权利要求4或5所述的试剂盒，其特征在于，所述的缓冲体系B用于混合胃蛋白酶原II抗体磁微粒偶联物。
9.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括校准品和/或质控品。
10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒为磁微粒化学发光法定量分析试剂盒。
11.权利要求1-10任一项所述的试剂盒在检测胃蛋白酶原II中的应用。
12.一种缓冲体系在制备萎缩性胃炎诊断试剂盒中的应用，所述的应用包括检测胃蛋白酶原II；所述的缓冲体系包括酶标试剂的缓冲液A，所述的缓冲体系A，由以下成分组成：Tris-HCl 3.0-30g/L；氯化钠7-12 g/L；牛血清白蛋白1.0-30 g/L；蔗糖30-40g/L；酶水解明胶15-35g/L；酶稳定剂100-200mL/L；羟基磷灰石1.0-5.0g/L；月桂醇聚氧乙烯醚1.0-3.0g/L；1M 氯化镁0.2-10mL/L；1M氯化锌0.2-10mL/L；余量为水；所述缓冲体系pH值7.4-8.2。
13.根据权利要求12所述的应用，所述的缓冲体系还包括磁微粒载体的缓冲体系B，所述的缓冲体系B，由以下成分组成：十二水合磷酸氢二钠5.6-5.9g/L；磷酸二氢钠0.55-0.60g/L；氯化钠5-9g/L；牛血清白蛋白1-10 g/L；蔗糖75-135g/L；2-羟乙基纤维素0.5-10g/L；明胶3-20g/L；羟基磷灰石5-20g/L；0.1%-0.3%吐温；余量为水；所述缓冲体系pH值7.0-8.0。
14.根据权利要求13所述的应用，其特征在于，所述的试剂盒还包括校准品和/或质控品。
15.根据权利要求12-14任一项所述的应用，其特征在于，所述的萎缩性胃炎为胃窦为主萎缩性胃炎、胃体为主萎缩性胃炎、多灶性萎缩性胃炎或胃萎缩全胃炎。
...【技术特征摘要】
1.一种胃蛋白酶原ii检测的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括酶标试剂的缓冲体系a，所述的缓冲体系a，由以下成分组成：tris-hcl 3.0-30 g/l；氯化钠7-12g/l；牛血清白蛋白1.0-30g/l；蔗糖30-40g/l；酶水解明胶15-35g/l；酶稳定剂100-200ml/l；羟基磷灰石1.0-5.0g/l；月桂醇聚氧乙烯醚1.0-3.0g/l；1m 氯化镁0.2-10ml/l；1m氯化锌0.2-10ml/l；余量为水；所述缓冲体系ph值7.4-8.2。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的缓冲体系a，由以下成分组成：tris-hcl 20 g/l；氯化钠9.0 g/l；牛血清白蛋白20 g/l；蔗糖35 g/l；酶水解明胶20g/l；酶稳定剂150ml/l；羟基磷灰石2g/l；月桂醇聚氧乙烯醚1.5g/l；1m 氯化镁5ml/l；1m氯化锌5ml/l；余量为水；所述缓冲体系ph值8。
3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述的酶稳定剂为碱性磷酸酶结合物酶稳定剂。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括磁微粒载体的缓冲体系b，所述的缓冲体系b，由以下成分组成：十二水合磷酸氢二钠5.6-5.9g/l；磷酸二氢钠0.55-0.60g/l；氯化钠5-9g/l；牛血清白蛋白1-10g/l；蔗糖75-135g/l；2-羟乙基纤维素0.5-10g/l；明胶3-20g/l；羟基磷灰石5-20g/l；0.1%-0.3%吐温；余量为水；所述缓冲体系ph值 7.0-8.0。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述的缓冲体系b，由以下成分组成：十二水合磷酸氢二钠5.9g/l；磷酸二氢钠0.60g/l；氯化钠5g/l；牛血清白蛋白1g/l；蔗糖75g/l；2-羟乙基纤维素6g/l；明胶3g/l；羟基磷灰石5g/l；0.1%吐温；余量为水；所述缓冲体系ph值7.0。
6.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述的缓冲体系a用于...
【专利技术属性】
技术研发人员：李景莲，王法龙，刘彭浩邦，李锋，孙佳，李博飞，
申请(专利权)人：北京美联泰科生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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