【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于动物基因工程、基因遗传修饰和生物医药领域，具体地说，涉及一种tl1a基因人源化的非人动物及其构建方法和在生物医药领域的应用。
技术介绍
1、tl1a又称tnfsf15，是肿瘤坏死因子(tnf)配体超家族成员，又称为血管生长抑制因子（vegi），是主要由血管内皮细胞分泌的细胞因子。tnfsf15能够在促进vegf的膜受体vegfr1降解的同时上调游离形式的vegfr1的表达，因此，能够将vegf/vegfr1引起的促血管新生信号转换成抑制血管新生信号。tnfsf15能够抑制vegf引起的vegfr2磷酸化，因此阻断vegfr2介导血管通透性增加，这使得tnfsf15能被用于治疗病理性的血管通透性增加相关的疾病。同时，tnfsf15蛋白具有活化t细胞、促进炎症因子分泌等生理活性，在免疫调节及炎症性疾病中发挥重要作用。通过靶向该靶点抗体可治疗炎症相关疾病。
2、然而，由于动物与人类在生理学及病理学方面存在差异，加上基因的复杂性，例如，tl1a的人鼠同源性仅为66%，如何能构建出“有效”的人源化动物模型用于新药研发仍是最大的挑战。
3、鉴于tl1a在炎症免疫治疗领域的巨大应用价值和抗肿瘤治疗领域的潜在价值，为进一步探索其相关生物学特性，提高临床前期药效试验的有效性，提高研发成功率，使临床前期的试验更有效并使研发失败最小化，本领域急需开发tl1a相关信号通路的非人动物模型。此外，本方法得到的非人动物还可与其它基因人源化非人动物交配得到多基因人源化动物模型，用于筛选和评估针对该信号通路的人用药及联合用药
技术实现思路
1、本申请用人源正常或突变基因替换动物基因组的同源基因，可建立更接近人类生理或疾病特征的正常或突变基因动物模型。基因人源化动物不但本身具有重要应用价值，如通过基因人源化可改进和提升细胞或组织移植人源化动物模型，更重要的是，由于人类基因片段的插入，动物体内可表达或部分表达人源蛋白，可作为仅能识别人蛋白序列的药物的靶点，为在动物水平进行抗人抗体及其它药物的筛选提供了可能。
2、本专利技术的第一方面，提供了一种tl1a基因人源化的非人动物的构建方法。
3、优选的，所述的非人动物体内表达人或人源化tl1a蛋白，和/或，所述的非人动物基因组中包含人tl1a基因的部分，或，人源化tl1a基因。
4、优选的，所述的非人动物的内源tl1a蛋白表达降低或缺失。
5、优选的，所述的非人动物的基因组中包含人tl1a基因的部分，优选包含人tl1a基因的1号至4号外显子的全部或部分，进一步优选包含人tl1a基因的1号外显子、2号外显子、3号外显子或4号外显子中的一种或两种以上外显子的组合，更优选包含人tl1a基因的1号外显子的全部或部分、2号至3号外显子的全部和4号外显子的全部或部分，优选还包含1-2号内含子和/或3-4号内含子，其中，人tl1a基因的1号外显子的部分至少包含5bp到237bp，例如5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230或237bp连续核苷酸序列，优选的，所述的人tl1a基因的1号外显子的部分包含编码胞外区的全部或部分的核苷酸序列，例如连续5-30bp编码胞外区的核苷酸序列。人tl1a基因的4号外显子的部分至少包含50bp到6255bp，例如50、100、150、200、250、300、350、400、450、452、455、500、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000、6000、6100、6200或6255bp连续核苷酸序列，优选的，所述的人tl1a基因的4号外显子的部分包含4号外显子中编码区的核苷酸序列。
6、在本专利技术的一个具体实施方式中，所述的非人动物基因组中包含的人tl1a基因的部分包含seq id no：7所示核苷酸序列；或者，包含与seq id no：7所示核苷酸序列同一性至少为70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或至少99%的核苷酸序列；或者，包含与seq id no：7所示核苷酸序列差异不超过10、9、8、7、6、5、4、3、2或不超过1个核苷酸的核苷酸序列；或者，包含与seq id no：7所示的，包括取代、缺失和/或插入一个或多个核苷酸的核苷酸序列。
7、优选的，所述的非人动物的基因组中包含编码人或人源化tl1a蛋白的全部或部分的核苷酸序列，进一步优选包含编码人tl1a蛋白的胞外区、跨膜区和/或胞质区的全部或部分的核苷酸序列；进一步优选包含编码人tl1a蛋白的至少20个到251个，例如至少20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、191、192、193、194、195、200、210、220、230、240、250或251个连续氨基酸序列的核苷酸序列；更优选包含编码人tl1a蛋白的胞外区的全部或部分的核苷酸序列；更进一步优选包含编码人tl1a蛋白的至少20个到195个，例如至少20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、191、192、193、194或195个连续氨基酸序列的核苷酸序列；再优选包含编码n端去除0-10（例如0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10）个氨基酸的人tl1a蛋白胞外区的核苷酸序列。
8、在本专利技术的一个具体实施方式中，所述的非人动物基因组中包含编码seq id no：2的第61-251、58-251或57-251位所示氨基酸序列的核苷酸序列；或者，包含与编码seq idno：2的第61-251、58-251或57-251位所示氨基酸序列的核苷酸序列同一性至少为70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或至少为99%的核苷酸序列；或者，包含与编码seq id no：2的第61-251、58-251或57-251位所示氨基酸序列的核苷酸序列差异不超过10、9、8、7、6、5、4、3、2或不超过1个核苷酸的核苷酸序列；或者，包含与编码seq id no：2的第61-251、58-251或57-251位所示氨基酸序列的核苷酸序列所示的，包括取代、缺失和/或插入一个或多个核苷酸的核苷酸序列。
9、优选的，所述的非人动物的至少一个细胞的基因组中包含编码人或人源化tl1a蛋白的核苷酸序列、人tl1a基因的部分或人源化tl1a基因。
10、优选的，编码人或人源化tl1a蛋白的核苷酸序列、人tl1a基因的部分或人源化tl1a基因的核苷酸序列可操作的连接到非人动物至少一条染色体中的内源tl1a基因座上的内源性调控元件。
11、本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种TL1A基因人源化的非人动物的构建方法，其特征在于，所述的非人动物体内表达人或人源化TL1A蛋白，和/或，所述的非人动物基因组中包含人TL1A基因的部分或人源化TL1A基因。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的人源化TL1A蛋白包含人TL1A蛋白的胞外区的全部或部分，和/或，所述的人源化TL1A基因包含人TL1A基因的部分。
3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的构建方法包括将供体核苷酸序列导入非人动物内源TL1A基因座；
4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述的人TL1A蛋白的胞外区的部分包含SEQ ID NO：2第57-251、58-251或61-251位所示氨基酸序列；或者，包含与SEQ ID NO：2第57-251、58-251或61-251位所示氨基酸序列同一性至少为70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或至少为99%的氨基酸序列。
5.根据权利要求1或3所述的构建方法，其特征在于，所述的人TL1A基因的部分
6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述的人TL1A基因的部分包含SEQ IDNO：7所示核苷酸序列，或者，包含与SEQ ID NO：7所示核苷酸序列同一性至少为70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或至少为99%的核苷酸序列。
7.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的人源化TL1A基因或人TL1A基因的部分在非人动物体内通过非人动物内源调控元件调控。
8.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述的导入包括插入或替换。
9.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的构建方法还包括将TL1A基因人源化的非人动物与其他基因修饰的非人动物交配、体外受精或直接进行基因编辑，并进行筛选，得到多基因修饰的非人动物；
10.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述的构建方法包括使用靶向载体进行TL1A基因人源化的非人动物的构建；
11.根据权利要求10所述的构建方法，其特征在于，所述的靶向载体还包含5’臂和/或3’臂；
12.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的非人动物包括大鼠或小鼠。
13.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的人源化TL1A蛋白的氨基酸序列包含下列组中的任一种：
14.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的人源化TL1A基因转录的mRNA包含下列组中的任一种：
15.一种人源化TL1A蛋白，其特征在于，所述的人源化TL1A蛋白包含人TL1A蛋白的胞外区的全部或部分，以及，非人动物内源TL1A蛋白的部分。
16.根据权利要求15所述的人源化TL1A蛋白，其特征在于，所述的人源化TL1A蛋白的氨基酸序列包含下列组中的任一种：
17.一种人源化TL1A基因，其特征在于，所述的人源化TL1A基因编码权利要求15或16所述的人源化TL1A蛋白。
18.根据权利要求17所述的人源化TL1A基因，其特征在于，所述的人源化TL1A基因转录的mRNA包含下列组中的任一种：
19.一种细胞、组织或器官，其特征在于，所述的细胞、组织或器官表达权利要求15或16所述的人源化TL1A蛋白，或者，所述的细胞、组织或器官的基因组中包含权利要求17或18所述的人源化TL1A基因，或者，所述的细胞、组织或器官来源于权利要求1-14任一所述的构建方法获得的非人动物。
20.一种权利要求15或16所述的人源化TL1A蛋白，或者，权利要求17或18所述的人源化TL1A基因，或者，权利要求1-14任一所述的构建方法获得的非人动物的应用，其特征在于，所述的应用包括：
...【技术特征摘要】
1.一种tl1a基因人源化的非人动物的构建方法，其特征在于，所述的非人动物体内表达人或人源化tl1a蛋白，和/或，所述的非人动物基因组中包含人tl1a基因的部分或人源化tl1a基因。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的人源化tl1a蛋白包含人tl1a蛋白的胞外区的全部或部分，和/或，所述的人源化tl1a基因包含人tl1a基因的部分。
3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的构建方法包括将供体核苷酸序列导入非人动物内源tl1a基因座；
4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述的人tl1a蛋白的胞外区的部分包含seq id no：2第57-251、58-251或61-251位所示氨基酸序列；或者，包含与seq id no：2第57-251、58-251或61-251位所示氨基酸序列同一性至少为70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或至少为99%的氨基酸序列。
5.根据权利要求1或3所述的构建方法，其特征在于，所述的人tl1a基因的部分包含人tl1a基因1号外显子的部分、2号至3号外显子的全部和4号外显子的部分，其中，人tl1a基因的1号外显子的部分至少包含5bp的人tl1a基因的1号外显子，人tl1a基因的4号外显子的部分至少包含50bp的人tl1a基因的4号外显子。
6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述的人tl1a基因的部分包含seq idno：7所示核苷酸序列，或者，包含与seq id no：7所示核苷酸序列同一性至少为70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或至少为99%的核苷酸序列。
7.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的人源化tl1a基因或人tl1a基因的部分在非人动物体内通过非人动物内源调控元件调控。
8.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述的导入包括插入或替换。
9.根据权...
【专利技术属性】
技术研发人员：李冲，张芝，张淑金，
申请(专利权)人：百奥赛图北京医药科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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