【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种基于转化体的分泌型Ｒｐｆ因子的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： １）以包含Ｒｐｆ基因的载体或基因组为模板，以引物对Ｐ为引物，ＰＣＲ扩增Ｒｐｆ基因；所述的引物对Ｐ为： 上游引物Ｐ１：ｇｃｃｔｃｇａｇａａ ａｃｇａｇａｇｇｃｔ ｇａｃａｃｃａｔｇａ ｃｔｃｔｃｔｔｃａｃ ４０； 下游引物Ｐ２：ｔａｇｃｇｇｃｃｇｃ ｔｃａｇｇｃｃｔｇａ ｇｇｃａｇｇａｃｇａ ｇｃｔｃｃ ３５； ２）将ＰＣＲ扩增的Ｒｐｆ基因用ＸｈｏⅠ和ＮｏｔⅠ双酶切得到线性化片段；并将该线性化片段与被ＸｈｏⅠ和ＮｏｔⅠ双酶切的ｐＰＩＣ９Ｋ载体片段连接得到重组酵母表达载体ｐＰＩＣ－Ｒｐｆ；将重组酵母表达载体ｐＰＩＣ－Ｒｐｆ转化到感受态的毕赤酵母，筛选得到整合了目的基因的阳性转化子； ３）将阳性转化子在ＢＭＧＹ培养基中３０℃、２００ｒ／ｍｉｎ条件下培养，当ＯＤ６００达到２．０～６．０时，离心收集菌体，用ＢＭＭＹ培养基重悬进行诱导表达，每２４ｈ补加甲醇至终浓度为０．５％，３０℃、２００ｒ／ｍｉｎ条件下继续培养９６～１２０ｈ后收集培养上清液； ４）将收集的培养上清液通过层析分离纯化得到Ｒｐｆ因子。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：师长宏，张海，李伦，赵勇，
申请(专利权)人：中国人民解放军第四军医大学，
类型：发明
国别省市：87[中国|西安]
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