【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程领域及酶工程领域，具体涉及一种耐热性提高的β-葡萄糖苷酶突变体。
技术介绍
1、β-葡萄糖苷酶是一类能够用来改善食物风味和形成生物活性单体成分的主要酶制剂，β-葡萄糖苷酶主要作用于β-1,4-葡萄糖苷键，在去除糖苷中的非还原末端糖基残体过程中起到关键作用，能够催化各种物质中葡萄糖苷键的水解，如烷基-d-糖苷、芳基-d-糖苷、氰糖苷、双糖和短链寡糖，将葡萄糖从非还原端释放出来。β-葡萄糖苷酶作为纤维素酶的一种，广泛分布于许多动植物和古菌、细菌、真核生物、病毒及某些未定义物种中，并参与生物体的代谢活动。
2、在微生物中，β-葡萄糖苷酶在碳源利用过程中起到了关键作用；在植物中，β-葡萄糖苷酶与细胞壁发育、代谢色素、植物激素激活和果实成熟都有关；在哺乳动物中，β-葡萄糖苷酶与葡萄糖神经酰胺的水解有关。不同来源的β-葡萄糖苷酶所属的家族也有所不同，热稳定性和酶促反应所对应的最适温度以及动力学参数也存在一定差异，相对分子量、结构与组成差别亦较大。微生物来源的β-葡萄糖苷酶获得高纯度酶制剂的制备工艺较为简单且酶促效果更佳，对实现发酵食品的标准化生产，提高食品的营养价值和经济价值具有重要的作用。
3、β-葡萄糖苷酶广泛存在于动植物及微生物中，然而目前工业化生产的β-葡萄糖苷酶大多来源于霉菌，此类酶的稳定性较差，温度达到45℃以上会严重影响到β-葡萄糖苷酶的稳定性，此外，此类酶的最适ph值通常为5.0左右，环境中ph值的升高也会明显影响到β-葡萄糖苷酶的酶活，这些问题在一定程度上限制了其应用范围。p>
4、中国专利cn109355275a中公开了一种高稳定性β-葡萄糖苷酶突变体及其应用，是在野生型β-葡萄糖苷酶氨基酸序列的基础上突变得到，突变位点为：t167i/v181f/a298g或t167i/v181f/k186t/a187e/a298g，该β-葡萄糖苷酶突变体2r1和4r1在50℃下的半衰期分别是野生酶ks5a7的285倍和8640倍，对纤维二糖的水解活性分别是野生酶的1.75和1.5倍，且依然保持了对葡萄糖的高耐受性。但该β-葡萄糖苷酶突变体耐受的温度较低，应用范围受到一定的限制。
5、因此，开发一种在高温环境下热稳定性高，活力高的β-葡萄糖苷酶具有重要的工业意义和经济价值。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种β-葡萄糖苷酶突变体，它具有耐高温，较宽的ph稳定性等优点。
2、为实现上述专利技术目的，本专利技术的技术方案如下：
3、一方面，本专利技术提供了一种耐热性提高的β-葡萄糖苷酶突变体，所述的β-葡萄糖苷酶突变体与氨基酸序列如seq id no:1相比，含有以下突变中的至少一种：g15d，v97m，h385q。
4、优选地，所述的β-葡萄糖苷酶突变体的氨基酸序列如seq id no:2所示。
5、在本专利技术中，β-葡萄糖苷酶突变体pepcellb是指氨基酸序列如seq id no:2所示的β-葡萄糖苷酶。
6、具体地，氨基酸序列如seq id no:1所示的为β-葡萄糖苷酶cellb，其来源于嗜热古细菌（ trichoderma reesei）。
7、具体地，seq id no:1的氨基酸序列如下：
8、mkfpknfmfgyswsgfqfemglpgsevesdwwvwvhdkeniasglvsgdlpengpaywhlykqdhdiaeklgmdcirggiewarifpkptfdvkvdvekdeegniisvdvpestikelekianmealehyrkiysdwkergktfilnlyhwplplwihdpiavrklgpdrapagwldektvvefvkfaafvayhlddlvdmwstmnepnvvynqgyinlrsgfppgylsfeaaekakfnliqahigaydaikeyseksvgviyafawhdplaeeykdeveeirkkdyefvtilhskgkldwigvnyysrlvygakdghlvplpgygfmserggfaksgrpasdfgwemypeglenllkylnnayelpmiitengmadaadryrphylvshlkavynamkegadvrgylhwsltdnyewaqgfrmrfglvyvdfetkkrylrpsalvfreiatqkeipeelahladlkfvtrk。
9、seq id no:2的氨基酸序列如下：
10、mkfpknfmfgyswsdfqfemglpgsevesdwwvwvhdkeniasglvsgdlpengpaywhlykqdhdiaeklgmdcirggiewarifpkptfdvkvdmekdeegniisvdvpestikelekianmealehyrkiysdwkergktfilnlyhwplplwihdpiavrklgpdrapagwldektvvefvkfaafvayhlddlvdmwstmnepnvvynqgyinlrsgfppgylsfeaaekakfnliqahigaydaikeyseksvgviyafawhdplaeeykdeveeirkkdyefvtilhskgkldwigvnyysrlvygakdghlvplpgygfmserggfaksgrpasdfgwemypeglenllkylnnayelpmiitengmadaadryrpqylvshlkavynamkegadvrgylhwsltdnyewaqgfrmrfglvyvdfetkkrylrpsalvfreiatqkeipeelahladlkfvtrk。
11、又一方面，本专利技术提供了一种耐热性提高的β-葡萄糖苷酶突变体基因，其编码上述的β-葡萄糖苷酶突变体。
12、又一方面，本专利技术提供了一种耐热性提高的β-葡萄糖苷酶突变体基因，其编码seqid no:2所示的氨基酸序列。
13、优选地，所述的β-葡萄糖苷酶突变体基因的核苷酸序列如seq id no:3所示。
14、本专利技术通过基因合成方法合成了β-葡萄糖苷酶突变体基因 pepcellb，dna全序列分析结果表明，β-葡萄糖苷酶pepcellb结构基因全长1416bp。
15、具体地，seq id no:3所示的核苷酸序列具体如下：
16、atgaaattccctaaaaatttcatgttcgggtattcctggtcggattttcaattcgaaatgggccttccaggttctgaagtagagagcgattggtgggtatgggtccacgacaaggaaaacattgcgtcaggcctcgtgagcggagatctaccggaaaacggacctgcttattggcatttgtataaacaagatcatgacatagcggaaaaactaggtatggattgt本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种耐热性提高的β-葡萄糖苷酶突变体，其特征在于，所述的β-葡萄糖苷酶突变体与氨基酸序列如SEQ ID NO:1相比，含有以下突变中的至少一种：G15D，V97M，H385Q。
2.根据权利要求1所述的β-葡萄糖苷酶突变体，其特征在于，所述的β-葡萄糖苷酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
3.一种β-葡萄糖苷酶突变体基因，其特征在于，所述的β-葡萄糖苷酶突变体基因编码权利要求1所述的β-葡萄糖苷酶突变体。
4.一种β-葡萄糖苷酶突变体基因，其特征在于，所述的β-葡萄糖苷酶突变体基因编码SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。
5.根据权利要求4所述的β-葡萄糖苷酶突变体基因，其特征在于，所述的β-葡萄糖苷酶突变体基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。
6.包含权利要求3-5任一项所述的β-葡萄糖苷酶突变体基因的重组载体。
7.包含权利要求3-5任一项所述的β-葡萄糖苷酶突变体基因的重组菌株。
8.权利要求1-2任一项所述的β-葡萄糖苷酶突变体的制备方法，其特征在于，包括
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述的表达载体选自pPIC9K、pET-28a、pEZZ18、pTA1529、pINIII-ompA、pUB110、pE194、pUCX05-bgaB、pHT304、pMK3、pPIC9、pHIL-S1、pPICZα、pYAM75P、PNZ8149-usp45中的一种或多种。
10.权利要求1-2任一项所述的β-葡萄糖苷酶突变体、权利要求3-5任一项所述的β-葡萄糖苷酶突变体基因、权利要求6所述的重组载体、权利要求7所述的重组菌株或权利要求8-9任一项所述的制备方法制备得到的β-葡萄糖苷酶突变体在食品、饲料、制浆造纸、纺织或医药中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种耐热性提高的β-葡萄糖苷酶突变体，其特征在于，所述的β-葡萄糖苷酶突变体与氨基酸序列如seq id no:1相比，含有以下突变中的至少一种：g15d，v97m，h385q。
2.根据权利要求1所述的β-葡萄糖苷酶突变体，其特征在于，所述的β-葡萄糖苷酶突变体的氨基酸序列如seq id no:2所示。
3.一种β-葡萄糖苷酶突变体基因，其特征在于，所述的β-葡萄糖苷酶突变体基因编码权利要求1所述的β-葡萄糖苷酶突变体。
4.一种β-葡萄糖苷酶突变体基因，其特征在于，所述的β-葡萄糖苷酶突变体基因编码seq id no:2所示的氨基酸序列。
5.根据权利要求4所述的β-葡萄糖苷酶突变体基因，其特征在于，所述的β-葡萄糖苷酶突变体基因的核苷酸序列如seq id no:3所示。
6.包含权利要求3-5任一项所述的β-葡萄糖苷酶突变体基因的重组载体...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴培均，崔泽玲，罗建杰，李富伟，
申请(专利权)人：北京科为博生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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