【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学，特别是涉及血液核酸释放剂、试剂盒及其提取方法。
技术介绍
1、核酸广泛存在于所有动植物、微生物及生物体内。随着分子生物学的发展，利用血液核酸提取试剂盒提取血液中的dna或rna，可用于基因组学、转录组学、蛋白质组学等实验研究，同时在临床上有着重要的应用价值。
2、目前市面上所售的血液核酸提取试剂盒主要是通过胍盐和硅胶柱结合法，从血液中提取核酸。如天根生化科技(北京)有限公司的rna prep pure血液总rna提取试剂盒(离心柱型)和广州捷倍斯生物科技有限公司的血液rna提取试剂盒，它们的主要试剂为：1、红细胞裂解液，其作用是裂解红细胞，红细胞无细胞核，因此没有核酸，裂解红细胞后，通过离心除去血液中的红细胞，收集白细胞，此时裂解的红细胞在上清，白细胞在沉淀中；2、trizol类似物，其主要成分是苯酚和异硫氰酸胍，以及需要另外加入1％β-巯基乙醇。trizol对血细胞具有很强的裂解作用，能够将红细胞的膜破开，释放里面的核酸，并且具有一定的rna酶抑制作用，能减少rna的降解。3、氯仿类似物，其作用是促进溶解核酸的水相和溶解蛋白质及其他杂质的有机相。4、无水乙醇，其作用是沉淀富集并洗涤释放出来的核酸；5、去蛋白液，其作用是清除核酸中的蛋白质残留，提高核酸的纯度。6、硅胶吸附柱，是在常用的2ml离心管中间设置一层半透膜，当含有核酸的溶液通过离心穿过这层膜后，核酸能够附着在这层半透膜上，而其他能够溶解于溶液中的杂质随着溶液穿过这层半透膜到管底并被丢弃，最后使用depc水溶解核酸并离心，就能收集含核
3、上述的血液核酸提取试剂盒存在以下不足：1、使用常规的红细胞裂解液处理血液样本裂解红细胞所需时间长，至少需要10-20分钟才能完全裂解；而且裂解后需要至少10分钟的低速离心才能将所需的血细胞沉淀并收集，操作所需时间非常长。2、其trizol类似物采用的苯酚是一种有毒的、有特殊气味的无色针状固体，呈晶体状，属于危险化学品。β-巯基乙醇也属于危险化学品，若要进行大规模的批量生产，需要投入巨大的成本去解决苯酚和β-巯基乙醇在生产过程中产生的环境污染问题。同时还会对生产车间中的工人带来生命健康危害。3、每次实验都需要使用定制的硅胶吸附柱，导致一般实验室条件下的离心管都不能直接用于这些产品，对实验操作人员来说不够便利。4、试剂盒中的许多有效成分的保存条件较为苛刻，不能直接在常温下长期保存；5、若想得到足够量而且质量较好的核酸，所需的实验操作实验总共约为60分钟，实验操作时间过长，不但降低实验效率，还会增加核酸降解的风险。6、使用试剂盒提取核酸，步骤繁琐，接近13-14个步骤，耗费大量的操作时间，且过程中需多次转移到不同的离心管，会损失大量核酸。7、血液核酸提取试剂盒按提取核酸类型分为血液dna提取试剂盒和血液rna提取试剂盒，其无法同时获得dna和rna的试剂盒，而很多实验需要同时使用到dna和rna，导致使用者需要花费两倍的成本以及提取时间才能同时得到dna和rna。且市售的血液核酸提取试剂盒所获得的核酸部分只能用于做荧光定量pcr，应用范围窄，无法满足各种下游分析的需求，如荧光定量pcr、全基因组测序、转录组测序、ngs测序、宏基因组测序和宏转录组测序等。因此，研究一种血液核酸提取试剂盒，可同时提取dna与rna，并减少大量的操作步骤，明显缩短操作时间，安全性高，提高核酸产量和纯度，具有重大的意义。
4、此外，专利cn111808844a中提出了一种同时提取dna和rna的试剂盒，包括以下试剂：细胞裂解液、核酸结合液、核酸吸附材料、洗脱液a、去蛋白漂洗液、去盐分漂洗液和洗脱液b，试剂盒中不含有酚氯仿等有毒有机溶剂，成分环保，可实现同时提取dna与rna；但是其提取过程依赖于核酸吸附材料(硅质纯化柱)的使用，实验操作复杂，操作时间较长，产物的纯度也未能满足各种下游分析的需要。因此，研究一种血液核酸提取试剂盒，可同时提取dna与rna，并减少大量的操作步骤，明显缩短操作时间，安全性高，提高核酸产量和纯度，具有重大的意义。
技术实现思路
1、基于此，本专利技术提供了一种血液核酸释放剂，可高效裂解血液细胞，防止核酸降解，其组成的血液核酸提取试剂盒，能够提取包含dna与rna的血液核酸，具有较高的核酸产量和纯度，且提取过程中的步骤操作简单，操作时间短，安全性高。
2、本专利技术的第一方面是提供了一种血液核酸释放剂，包括以下组分：0.02-0.8mol/l异硫氰酸胍、0.2-8wt％十二烷基硫酸钠、0.02-0.4g/ml氯化铵。
3、在其中一些实施例中，所述异硫氰酸胍的含量为0.05-0.5mol/l，优选为0.05-0.3mol/l，更优选为0.05-0.1mol/l
4、在其中一些实施例中，所述十二烷基硫酸钠的含量为0.5-5wt％，优选为0.5-3wt％，更优选为0.5-1wt％。
5、在其中一些实施例中，所述氯化铵的含量为0.05-0.3g/ml，优选为0.05-0.2g/ml，更优选为0.05-0.1g/ml。
6、在其中一些实施例中，所述核酸释放剂的组成成分为：0.05-0.3mol/l异硫氰酸胍、0.5-3wt％十二烷基硫酸钠、0.05-0.1g/ml氯化铵。
7、在其中一些更优选的实施例中，血液核酸释放剂的组成成分为：0.05-0.1mol/l异硫氰酸胍、0.5-1wt％十二烷基硫酸钠、0.05-0.1g/ml氯化铵。
8、本专利技术的第二方面是提供了一种血液核酸提取试剂盒，包括所述血液核酸释放剂、核酸沉淀液和纯化液，所述核酸沉淀液由体积比为5-20：1的95-99％异丙醇与1m乙酸钠制备而成，且所述乙酸钠的ph值为4.8-7.0。
9、在其中一些实施例中，所述异丙醇和乙酸钠的体积比为(5-15)：1，优选为(10-15)：1。
10、在其中一些实施例中，所述乙酸钠的ph值为5.2-7.0。
11、在其中一些实施例中，所述纯化液包括饱和氯化钠溶液和乙醇溶液，所述乙醇溶液中乙醇的体积分数为70-80％，优选为74-76％。
12、本专利技术的第三方面是提供了一种血液核酸的提取方法，采用所述的血液核酸提取试剂盒提取，包括以下步骤：
13、(1)取外周血加入血液核酸释放剂中，涡旋震荡混匀，常温下裂解4min以上，然后加入饱和氯化钠溶液，涡旋震荡混匀后离心，吸取核酸上清液；
14、(2)向步骤(1)所述的核酸上清液中加入核酸沉淀液，涡旋震荡混匀，静置沉淀2min以上，离心，移除上清液，得到核酸沉淀；
15、(3)向步骤(2)所述的核酸沉淀加入乙醇溶液，涡旋震荡混匀后离心，移除上清液，即得血液核酸提取物。
16、在其中一些实施例中，步骤(1)中，所述裂解时间为5-10min，优选为5-7min。
17、在其中一些实施例中，步骤(2)中，所述静置沉淀时间为2-10min，优选为2-4min本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种血液核酸释放剂，其特征在于，由以下组分组成：0.02-0.8mol/L异硫氰酸胍、0.2-8wt％十二烷基硫酸钠、0.02-0.4g/ml氯化铵。
2.根据权利要求1或2所述的血液核酸释放剂，其特征在于，所述异硫氰酸胍的含量为0.05-0.5mol/L，优选为0.05-0.3mol/L；和/或，
3.根据权利要求1或2所述的血液核酸释放剂，其特征在于，所述核酸释放剂的组成为：0.05-0.3mol/L异硫氰酸胍、0.5-3wt％十二烷基硫酸钠、0.05-0.1g/ml氯化铵；更优选为所述核酸释放剂的组成为：0.05-0.1mol/L异硫氰酸胍、0.5-1wt％十二烷基硫酸钠、0.05-0.1g/ml氯化铵。
4.一种血液核酸提取试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-3任一项所述血液核酸释放剂、核酸沉淀液和纯化液，所述核酸沉淀液由体积比为(5-20)：1的95-99％异丙醇与1M乙酸钠制备而成，且所述乙酸钠的pH值为4.8-7.0。
5.根据权利要求4所述的血液核酸提取试剂盒，其特征在于，所述异丙醇和乙酸钠的体积比为(5-15)
6.根据权利要求4所述的血液核酸提取试剂盒，其特征在于，所述纯化液包括饱和氯化钠溶液和乙醇溶液，所述乙醇溶液中乙醇的体积分数为70-80％，优选为74-76％。
7.一种血液核酸的提取方法，其特征在于，采用权利要求4-6任一项所述的血液核酸提取试剂盒提取，包括以下步骤：
8.根据权利要求7所述的血液核酸的提取方法，其特征在于，步骤(1)中，所述裂解时间为5-10min，优选为5-7min；和/或，
9.根据权利要求7所述的血液核酸的提取方法，其特征在于，所述外周血与血液核酸释放剂的体积比为1:(2-8)，优选为1:(6-8)；和/或，
10.根据权利要求7所述的血液核酸的提取方法，其特征在于，步骤(1)中，离心的温度为3-6℃，转速为14000-16000rpm，离心时间为1.5-4min；和/或，
...【技术特征摘要】
1.一种血液核酸释放剂，其特征在于，由以下组分组成：0.02-0.8mol/l异硫氰酸胍、0.2-8wt％十二烷基硫酸钠、0.02-0.4g/ml氯化铵。
2.根据权利要求1或2所述的血液核酸释放剂，其特征在于，所述异硫氰酸胍的含量为0.05-0.5mol/l，优选为0.05-0.3mol/l；和/或，
3.根据权利要求1或2所述的血液核酸释放剂，其特征在于，所述核酸释放剂的组成为：0.05-0.3mol/l异硫氰酸胍、0.5-3wt％十二烷基硫酸钠、0.05-0.1g/ml氯化铵；更优选为所述核酸释放剂的组成为：0.05-0.1mol/l异硫氰酸胍、0.5-1wt％十二烷基硫酸钠、0.05-0.1g/ml氯化铵。
4.一种血液核酸提取试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-3任一项所述血液核酸释放剂、核酸沉淀液和纯化液，所述核酸沉淀液由体积比为(5-20)：1的95-99％异丙醇与1m乙酸钠制备而成，且所述乙酸钠的ph值为4.8-7.0。
5.根...
【专利技术属性】
技术研发人员：贾红玲，洪婉贤，陈晴沛，刘超武，高云飞，董珊珊，罗伟华，王文波，王涛，王旭，陈宏恩，
申请(专利权)人：禾盛广州医疗科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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