稳定的DOTAP氯化物晶形制造技术

本发明专利技术涉及对映体纯的ＤＯＴＡＰ氯化物和稳定的（２Ｒ，Ｓ）－、（２Ｓ）－与（２Ｒ）－ＤＯＴＡＰ氯化物晶形、这些晶形的制备方法以及其作为药物制备的成分的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及对映体纯的DOTAP氯化物和外消旋和对映体纯DOTAP氯化物的晶形(crystal modification)、其制备方法及其制备药物组合物的用途。上下文中的DOTAP氯化物表示N，N，N-三甲基-2，3-双氧基]-1-丙烷铵氯化物，也称(Z，Z)-N，N，N-三甲基-2，3-双-1-丙铵氯化物或1，2-二油酰氧基-3-三甲基铵丙烷氯化物，及其水合物。 C42H80ClNO4， Mw698.54CAS编号132172-61-3和477274-39-8(外消旋物)、197974-73-58(外消旋物，一水合物)、428506-51-8(2S型)、328250-28-8(2R型)。脂质体是合成的多层囊(球状自含膜)，包含两亲性物质，通常为天然脂质，其中亲水性物质可以包封在水性内层中，并且亲脂性物质可以掺入到脂质膜内部。它们特别被用在化妆品和药物中，尤其是皮肤病学科。特别是将维生素、辅酶、皮肤护理剂和防晒剂进行包埋。脂质体一般是局部应用的。不过，脂质体在药物技术中逐渐发挥更多的重要性，因为脂质体的肠胃外应用能够实现比以自由溶解形式使用的活性化合物更加特异性的器官分布。如果掺入DNA、RNA或蛋白质，则得到脂质体复合物(lipoplexes)。油类的加入和高压均质化器的使用能够迫使脂质体形成所谓的纳米粒子(纳米粒)。这些粒子的大小与脂质体大致相同，但是在其内部不具有水相，而代之以油相。它们特别适合于包封亲脂性物质。微乳是胶态分散的单相系统，其包含水性、脂质样和表面活性剂组分。它们的粒径为1-500nm，并且行为方式与液体相似。尤其关于肽类活性化合物、核苷酸、疫苗和其它生物药物，它们在正常情况下的溶解性较差，增溶效应在上述应用的情况下具有非常巨大的重要性。另外，以这种方式能够延缓活性化合物在体内的降解并实现持续释放效应。DOTAP氯化物属于阳离子脂质类。与天然存在的磷脂相反，它们不具有两性离子特征。包含阳离子脂质、无论单独还是组合有磷脂或其它脂质样化合物的脂质体都具有带正电的表面。这对于具有带负电的外部表面的细胞、例如内皮细胞产生很高的亲和性。不过，特别重要的是DOTAP类与其它阳离子脂质体和脂质体复合物穿透细胞、并由此向细胞内部运输其中所掺入的活性化合物(转染)的能力。所有这些性质都使DOTAP氯化物也非常受关注于癌症疗法。这些性质为应用掺入在阳离子DOTAP脂质体中的常规细胞抑制剂提供可能性。从文献中可以充分知晓DOTAP氯化物和其它DOTAP盐的转染性质，例如乙酸盐、溴化物、磷酸二氢盐、硫酸氢盐、碘化物、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、三氟乙酸盐、硫酸盐或二硫酸盐和三氟甲磺酸盐。DOTAP磷酸二氢盐和DOTAP甲磺酸盐仅作为外消旋物在文献中被提及。所有其它上述盐各自作为外消旋物和2S-对映体被提及，另外提到氯化物和甲基硫酸盐的2R-对映体。在一些体外研究中，其它的盐、例如DOTAP甲基硫酸盐已经达到比DOTAP氯化物更好的转染率。不过在体内使用中，在活体内发生脂质体表面上的阴离子交换，这意味着这里不出现其它盐的优点。尤其在人类医药用途中，特别是肠胃外应用，具有生理学上可接收的阴离子的DOTAP盐、例如相应的氯化物或乙酸盐因此是优选的。医药、特别是肠胃外应用对于所用活性化合物和助剂的质量和纯度有最高的要求。因此，主管部门关于这些化合物的制备、制备再现性和副产物情况有非常严格的规定。在肠胃外用物质的情况下，必须另外严格避免和控制病原性微生物和内毒素带来的微生物污染。DOTAP氯化物和其它DOTAP盐是极其不稳定的，因此本身难以以可接受的纯度进行制备以使它们适合用于药物制备。象所有携带油酸原子团的脂质一样，例如天然磷脂DOPC和DOPE，所有DOTAP盐对于氧化作用非常敏感。不过，不饱和脂肪酸衍生物的氧化产物一般具有很高的毒性。这里需要适合的制备和纯化方法。例如，DOTAP乙酸盐为高沸点油的形式，因此在工业上以足够的质量获得它是非常困难的。克服所述不稳定性的常规方法、例如加入抗坏血酸或还原L-谷胱苷肽形式的抗氧化剂大大限制了DOTAP氯化物的普遍可用性，因为不能排除与后来被包埋的活性化合物的相互作用。在制备、贮存和使用期间完全排除氧实际上是不可能的，或者仅在非常巨大的努力下才有促进作用。DOTAP氯化物在商业上仅可获得氯仿溶液或无定形固体。除了它的氧化敏感性以外，无定形DOTAP氯化物在极短时间内、在正常大气湿度水平下也是极其吸湿和潮解的，得到油腻的薄膜。这使这种化合物的处理更加困难。因而，无定形DOTAP氯化物的制造商一般推荐在-20℃保护性气体下贮存，并且仅保证约6个月的货架寿命。文献仅披露过制备无定形、外消旋DOTAP氯化物的各种合成途径Eibel和Unger在DE4013632A1中概述了DOTAP氯化物的合成，在氯仿/甲醇/含水HCl溶剂系统中进行DOTAP溴化物的离子交换，继之借助色谱纯化。DOTAP溴化物是预先从1-溴-2，3-二油酰氧基丙烷就地制得的。Leventis和Silvius在Biochim.Biophys.Acta，1023(1990)124-132中报道了DOTAP氯化物的合成，在两相溶剂/NaCl溶液系统中进行DOTAP碘化物的离子交换。DOTAP碘化物是预先借助甲基碘甲基化相应的二甲氨基化合物而制得的。Nantz等在Biochim.Biophys.Acta，1299(1996)281-283，J.Med.Chem.40(1997)4069-4078中描述了DOTAP氯化物的非水性离子交换色谱合成。蒸发洗脱液，得到所需化合物。Felgner等在US 5,264,618中借助氯甲烷进行相应二甲氨基化合物的甲基化，直接得到DOTAP氯化物。他们通过从-20℃乙腈中结晶，表面上得到了黄色的蜡。不过，DOTAP氯化物事实上在室温下是不溶于乙腈的。再现这种所谓结晶的尝试仅仅通过热溶液冷却所得油性物质的固化得到无定形材料。作者明显没有实现纯化效果并且不得不借助色谱纯化该物质的事实也证明了这不是结晶的事实。所以，制备两种对映体DOTAP氯化物的合成途径和其特有性质迄今都不是已知的。尽管化学文摘已经为两种对映体指定了编号，不过相应的出版物仅仅描述对于外消旋DOTAP氯化物所进行的工作。特别是如果这些化合物旨在肠胃外使用，包括用离子交换树脂处理在内的制备鉴于可能的微生物污染是极其成问题的，因为相应的树脂是细菌的理想营养介质，即使在它们已被杀死之后，被内毒素污染的风险仍然存在。本专利技术的目的因此是提供高纯度并具有足够的化学和物理稳定性的DOTAP氯化物盐和水合物。本专利技术的进一步目的是提供货架寿命长的这些盐，使它们能够用于制备药物制剂。对于能够在工业规模上进行的稳定形式的DOTAP氯化物盐和水合物的可再现制备方法仍然存在巨大的需求。对映体纯的DOTAP氯化物能够用类似于外消旋物所述方法从对映体纯的原料制得，也就是经由(R或S)-1-氯-2，3-二油酰氧基丙烷，经由(R或S)-1-LG-2，3-二油酰氧基丙烷和离子交换(LG＝离去基团)或者经由(R或S)-1-二甲氨基-2，3-二油酰氧基丙烷。进一步可以提到的制备方法是外消旋DOTAP氯化物的外消旋化合物拆分。借助实验已经惊人地本文档来自技高网...

【技术保护点】
结晶性（２Ｒ，Ｓ）－、（２Ｓ）－和（２Ｒ）－ＤＯＴＡＰ氯化物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：M普拉切尔，A赫丁格，
申请(专利权)人：默克专利股份有限公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]