【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物制药，具体涉及一种降低抗体类蛋白酸性电荷异质体水平的质量调控方法及其应用。
技术介绍
1、在生物制药领域，抗体类药物被广泛应用于疾病的治疗，治疗性抗体是生物药市场中增长速度最快的产品，cho细胞是这些抗体生产最常用的细胞系。抗体类药物并非以单一组分存在，而是由多种异质体形成的混合物。异质性是抗体类蛋白最常发生的特性并且种类多样。电荷异质体是形成抗体异质性的常见原因之一，电荷异质性通常会影响抗体的体内和体外的特性，因此电荷异质性也成为生物类似药的关键质量属性。电荷异质体分布，尤其是酸性电荷异体的分布，可能会影响抗体效价，甚至引起不可预测的副作用。因此，了解电荷异质体形成的机理，调控酸性电荷异质体的比例，并维持电荷异质体的恒定显得越发重要。
2、电荷异质体形成的机制复杂，通常与翻译后的修饰有关，例如：唾液酸化、糖化、氧化或脱酰胺化等通常会导致酸性电荷异质体比例的增加；而蛋白氮末端q环化、琥珀酸亚氨化、蛋白碳末端赖氨酸或碳末端酰氨化等则与碱性电荷异质体的形成有关。
3、越来越多的研究者致力于开发各种各样的策略用以优化电荷异质体的分布。细胞株开发、上游细胞培养工艺、下游蛋白纯化工艺和制剂处方等均可能会对电荷异质体的形成产生影响。大量研究表明，上游细胞培养工艺相关参数(例如：温度、ph值、培养时间、氨基酸和糖浓度、金属离子或培养体系的氧化还原态势等)的改变可以用以调控电荷异质体的分布。研究表明，降低培养温度可以抑制酸性电荷异质体的产生，这可能是通过降低抗体的脱酰氨化比例而实现的，但对于多数细胞系来
4、酸性电荷异质体产生的机制复杂，其中唾液酸化水平的升高是产生酸性电荷异质体的重要原因之一。唾液酸水平及酸性电荷异质体水平被诸多文献报道，可能对抗体类蛋白的活性、药效、蛋白稳定性、清除率等方面产生影响，因而其被普遍认为是抗体类蛋白药物的关键质量属性之一。高唾液酸水平及高酸性电荷异质体水平产生的原因具有多样化，其机制仍研究的不够全面，目前针对唾液酸水平及酸性电荷异质体的调控手段及调控力度相对有限。
5、目前，因酸性电荷异质体产生原因多样化，且不够清晰，故针对它的调控策略有限，且普适性不强。因此，在抗体类药物研发过程中，需要充实电荷异质体调控的方法库，为调节抗体质量提供更多的策略选择及可能性。
技术实现思路
1、针对现有技术存在的不足，本专利技术的目的在于提供一种降低抗体类蛋白酸性电荷异质体水平的质量调控方法及其应用。本专利技术提供了一种在细胞培养过程中利用塔格糖来降低抗体类蛋白唾液酸水平及酸性电荷异质体水平的调控策略，充实了抗体类蛋白产品质量调控的方法库。
2、为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、第一方面，本专利技术提供一种降低抗体类蛋白酸性电荷异质体水平的质量调控方法，所述质量调控方法包括：采用含有塔格糖的基础培养基用批次补料培养的方式培养细胞，得到酸性电荷异质体比例下降的抗体。
4、本专利技术中，利用塔格糖来降低抗体类蛋白唾液酸水平及酸性电荷异质体水平，塔格糖是天然存在的酮己糖，非动物源，分子稳定且使用方便，且已被广泛应用于食品、医疗及化妆品行业，因而其安全性及可应用性较强。
5、优选地，所述基础培养基中塔格糖的浓度为20-60mm，例如可以是20mm、30mm、40mm、50mm或60mm等。
6、优选地，所述基础培养基中塔格糖的浓度为30-50mm，例如可以是30mm、40mm或50mm等。
7、本专利技术在细胞培养过程中，在基础培养基中添加一定浓度的塔格糖，细胞的生长、代谢、产量及蛋白质量方面的表现均有明显提升。在基础培养基中添加的塔格糖浓度为30mm-50mm时，酸性电荷异质体比例降低尤为明显。
8、本专利技术对蛋白fd与fc/2区域的糖型分别进行检测，结果发现，塔格糖添加组蛋白产品fd区域含有唾液酸的糖型(g1fs1、g2fs1、g2fs2、g1fs1-gn)比例明显下降。fc/2段糖型三个实验组均无唾液酸修饰。在本专利技术中发现，塔格糖主要通过降低抗体fd段唾液酸化水平来降低酸性电荷异质体比例。
9、优选地，所述基础培养基为actipro基础培养基。
10、优选地，所述批次补料培养的步骤为：
11、将哺乳动物细胞接种到反应器中，进行第一阶段培养，第一阶段培养至细胞密度达到(10.00-25.00)×106cells/ml时降低培养温度(例如可以是10.00×106cells/ml、12.00×106cells/ml、14.00×106cells/ml、16.00×106cells/ml、20.00×106cells/ml或25.00×106cells/ml等)，且第一阶段培养时间不超过第六天，降低培养温度后进行第二阶段培养，第二阶段培养至细胞活率低于60％时停止发酵，且第二阶段培养时间不超过第十四天。
12、优选地，所述哺乳动物细胞包括cho细胞。
13、优选地，所述接种密度为(0.30-5.00)×106cells/ml，例如可以是0.30×106cells/ml、0.40×106cells/ml、0.50×106cells/ml、3.00×106cells/ml、4.00×106cells/ml或5.00×106cells/ml等。
14、优选地，所述第一阶段培养的温度设置为36.5±1℃，例如可以是35.5℃、36.5℃或37.5℃等。
15、优选地，所述第二阶段培养的温度设置为31.0±1℃，例如可以是30.0℃、30.5℃、31℃、31.5℃或32.0℃等。
16、优选地，所述批次补料培养过程中，补料采用的培养基为cell boost 7a和cellboost 7b。
17、优选地，所述cell boost 7a：cell boost 7b的体积比为(9-11):1，例如可以是9:1、10:1或11:1等，补料天数为培养至第3、5、6、8、9、10、12天，补料量为培养体系折算初始培养体积的1-3％，例如可以是1％、2％或3％等。
18、本专利技术中的批次补料培养过程的补料天数为：d3-d5-d6-d8-d9-d10-d12进行补料，补料量为：3％-1％-1％-1％-1％-3％-本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种降低抗体类蛋白酸性电荷异质体水平的质量调控方法，其特征在于，所述质量调控方法包括：采用含有塔格糖的基础培养基用批次补料培养的方式培养细胞，得到酸性电荷异质体比例下降的抗体。
2.根据权利要求1所述的降低抗体类蛋白酸性电荷异质体水平的质量调控方法，其特征在于，所述基础培养基中塔格糖的浓度为20-60mM，优选为30-50mM。
3.根据权利要求1或2所述的降低抗体类蛋白酸性电荷异质体水平的质量调控方法，其特征在于，所述基础培养基为ActiPro基础培养基。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的降低抗体类蛋白酸性电荷异质体水平的质量调控方法，其特征在于，所述批次补料培养的步骤为：
5.根据权利要求4所述的降低抗体类蛋白酸性电荷异质体水平的质量调控方法，其特征在于，所述哺乳动物细胞包括CHO细胞。
6.根据权利要求4或5所述的降低抗体类蛋白酸性电荷异质体水平的质量调控方法，其特征在于，所述接种的细胞密度为(0.30-5.00)×106cells/mL。
7.根据权利要求4-6中任一项所述的降低抗体类蛋白酸性
8.根据权利要求4-7中任一项所述的降低抗体类蛋白酸性电荷异质体水平的质量调控方法，其特征在于，所述第二阶段培养的温度设置为31.0±1℃。
9.根据权利要求4-8中任一项所述的降低抗体类蛋白酸性电荷异质体水平的质量调控方法，其特征在于，所述批次补料培养过程中，补料采用的培养基为CellBoost 7a和CellBoost 7b；
10.权利要求1-9中任一项所述的降低抗体类蛋白酸性电荷异质体水平的质量调控方法在制备抗体药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种降低抗体类蛋白酸性电荷异质体水平的质量调控方法，其特征在于，所述质量调控方法包括：采用含有塔格糖的基础培养基用批次补料培养的方式培养细胞，得到酸性电荷异质体比例下降的抗体。
2.根据权利要求1所述的降低抗体类蛋白酸性电荷异质体水平的质量调控方法，其特征在于，所述基础培养基中塔格糖的浓度为20-60mm，优选为30-50mm。
3.根据权利要求1或2所述的降低抗体类蛋白酸性电荷异质体水平的质量调控方法，其特征在于，所述基础培养基为actipro基础培养基。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的降低抗体类蛋白酸性电荷异质体水平的质量调控方法，其特征在于，所述批次补料培养的步骤为：
5.根据权利要求4所述的降低抗体类蛋白酸性电荷异质体水平的质量调控方法，其特征在于，所述哺乳动物细胞包括cho细胞。
6.根据...
【专利技术属性】
技术研发人员：谷丽晓，曹云，
申请(专利权)人：上海药明生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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