【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药和分子生物学，具体涉及靶向bcma和/或fcrh5的嵌合抗原受体、car-t细胞及其应用。
技术介绍
1、本专利技术
技术介绍
中公开的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
2、多发性骨髓瘤(mm)是一种不可治愈的浆细胞恶性肿瘤，其特征是骨髓中异常浆细胞的生长异常和完整的单克隆免疫球蛋白的过度生产，最终导致临床表现包括骨骼病变、肾功能衰竭、贫血和高钙血症。b细胞成熟抗原(bcma)或cd269抗原，是肿瘤坏死因子受体超家族成员之一。由185个氨基酸残基组成的iii型跨膜蛋白，属tnf受体超家族，其配体属于tnf超家族，如增殖诱导配体(april)、b淋巴细胞刺激因子(baff)，bcma与其配体结合后，可激活b细胞的增殖和存活。bcma特异地高表达于浆细胞和多发性骨髓瘤细胞表面，而在造血干细胞和其他正常组织细胞中均不表达，bcma也会从细胞表面脱落，形成可在循环中检测到的可溶性bcma，其水平越高，临床预后越差。因此bcma可以作为mm的靶向性治疗的理想靶点。
3、几乎所有mm患者在初始治疗或挽救治疗后最终都会复发，目前仍需要研究新的靶点和治疗方法。fcrh5是一种含有ig结构域的i型膜蛋白，仅在b细胞谱系中表达。fcrh5基因位于1q21.4中的染色体断点附近，fcrh5蛋白表达于前b细胞(pre-b cell)开始的各种b细胞谱系，与其他b细胞特异性标志物不同，fcrh5蛋白在扁桃体、脾
4、基于抗体的细胞免疫疗法对血液恶性肿瘤患者具有显著的临床有益效果，以bcma为靶点的car-t已用于多发性骨髓瘤的临床试验。虽然目前的多发性骨髓瘤疗法通常会产生缓解，但是几乎所有患者最终都会复发。为了防止bcmacar-t治疗后bcma阴性复发，双特异性抗原靶点的car-t也许是一个治疗选择。
技术实现思路
1、针对现有技术中的不足，本专利技术的目的在于提供靶向bcma和/或fcrh5的嵌合抗原受体、car-t细胞及其应用。本专利技术以bcma和fcrh5蛋白为靶点，制备靶向bcma的纳米抗体，并进一步获得人源化纳米抗体，构建二代car质粒载体，通过分离t细胞，用编码car的慢病毒载体进行编程，从而获得一种表达靶向bcma和/或fcrh5的嵌合抗原受体(car)的t细胞，能够特异性识别和清除bcma或/和fcrh5阳性肿瘤细胞，特别适用于多发性骨髓瘤的治疗，为多发性骨髓瘤等肿瘤免疫治疗提供了一个有前景的治疗手段。
2、为了实现上述技术目的，本专利技术提供的技术方案如下：
3、本专利技术的第一个方面，提供一种靶向bcma和/或fcrh5的嵌合抗原受体，其至少包含抗原结合结构域、跨膜结构域和至少一个胞内结构域，其中，所述抗原结合结构域含有抗bcma单域抗体和/或抗fcrh5单域抗体；
4、其中，所述抗bcma单域抗体的氨基酸序列选自：
5、(a1)如seq id no.5、7、9、11、18、20、22所示的氨基酸序列；或，
6、(a2)如seq id no.5、7、9、11、18、20、22所示的氨基酸序列经过一个或多个氨基酸的取代、添加或缺失而形成的，能够特异结合在嵌合抗原受体上，具有结合bcma和诱导t细胞信号传导功能的变体；
7、所述抗fcrh5单域抗体的氨基酸序列选自：
8、(a3)如seq id no.24、26、28所示的氨基酸序列；或，
9、(a4)如seq id no.24、26、28所示的氨基酸序列经过一个或多个氨基酸的取代、添加或缺失而形成的，能够特异结合在嵌合抗原受体上，具有结合fcrh5和诱导t细胞信号传导功能的变体；
10、本专利技术中通过对大量bcma及fcrh5抗体进行筛选，从而获得上述抗bcma单域抗体和抗fcrh5单域抗体，通过其结合在嵌合抗原受体的抗原结合结构域，从而能够显著提高嵌合抗原受体的治疗效果；并进一步对抗bcma单域抗体和抗fcrh5单域抗体进行人源化处理，且进行双靶点组合，从而从而获得的car-t细胞其具有更佳的抗肿瘤靶向性，且具有更高的安全性，提高治疗效果。当进行双靶点组合时，所述抗bcma单域抗体和抗fcrh5单域抗体之间可以通过柔性连接肽连接，所述柔性连接肽可以为g4s3、g4s5或g4s7，在此不做具体限定。
11、根据本专利技术，所述嵌合抗原受体包括cd8α信号肽、结合bcma抗原的上述抗原结合结构域、cd8铰链区、cd8跨膜结构域、人4-1bb共刺激信号传导结构域和cd3ζ信号传导结构域串联而成。
12、本专利技术的第二个方面，编码如第一方面所述的嵌合抗原受体的核苷酸。
13、本专利技术的第三各方面，提供一种重组表达载体，所述重组表达载体包含第二方面所述的核苷酸。
14、根据本专利技术，所述重组表达载体可以为病毒载体。
15、本专利技术的第四个方面，提供一种t细胞，所述t细胞是由上述靶向bcma和/或fcrh5的嵌合抗原受体修饰的t淋巴细胞。所述t细胞为car-t细胞。本专利技术所采用的针对bcma和/或fcrh5的car-t技术，是一种综合肿瘤单克隆抗体的免疫治疗和肿瘤的过继免疫治疗优点的靶向治疗技术。本专利技术为b细胞成熟抗原蛋白的表达相关肿瘤特别是多发性骨髓瘤的car-t治疗提供了新的治疗手段。
16、本专利技术的第五个方面，提供第一方面所述嵌合抗原受体、第二方面所述核苷酸、第三方面所述的重组表达载体、第四方面所述t细胞在如下任意一种或多种中的应用：
17、(b1)制备嵌合抗原受体t细胞或免疫细胞；
18、(b2)制备肿瘤治疗药物。
19、其中，所述肿瘤为与b细胞成熟抗原蛋白表达相关的肿瘤疾病，包括但不限于多发性骨髓瘤、霍奇金淋巴瘤、白血病和胶质母细胞瘤等，优选为多发性骨髓瘤。
20、本专利技术的第六个方面，提供一种肿瘤治疗药物，所述肿瘤治疗药物其活性成分至少包含第四方面所述t细胞。
21、本专利技术的第七个方面，提供一种肿瘤治疗的方法，所述方法包括：
2本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种靶向BCMA和/或FCRH5的嵌合抗原受体，其特征在于，其至少包含抗原结合结构域、跨膜结构域和至少一个胞内结构域，其中，所述抗原结合结构域含有抗BCMA单域抗体和/或抗FCRH5单域抗体；
2.如权利要求1所述的靶向BCMA和/或FCRH5的嵌合抗原受体，其特征在于，所述跨膜结构域为CD8跨膜结构域和/或CD28跨膜结构域；
3.如权利要求1所述的靶向BCMA和/或FCRH5的嵌合抗原受体，其特征在于，所述胞内结构域包括胞内共刺激信号传导域和/或CD3ζ信号传导域；
4.如权利要求1所述的靶向BCMA和/或FCRH5的嵌合抗原受体，其特征在于，所述抗原结合结构域和跨膜结构域通过铰链区进行连接，所述铰链区包含IgG1铰链区和/或CD8铰链区；所述铰链区为CD8铰链区，其核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示。
5.如权利要求1所述的靶向BCMA和/或FCRH5的嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体还包括CD8α信号肽；所述CD8α信号肽的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示。
6.编码权利要求1所述的靶
7.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包含权利要求6所述的核苷酸。
8.一种T细胞，其特征在于，所述T细胞是由权利要求1-5任一项所述靶向BCMA和/或FCRH5的嵌合抗原受体修饰的T淋巴细胞。
9.权利要求1-5任一项所述嵌合抗原受体、权利要求6所述核苷酸、权利要求7所述重组表达载体、权利要求8所述T细胞在如下任意一种或多种中的应用：
10.一种肿瘤治疗药物，其特征在于，所述肿瘤治疗药物其活性成分至少包含权利要求8所述T细胞。
...【技术特征摘要】
1.一种靶向bcma和/或fcrh5的嵌合抗原受体，其特征在于，其至少包含抗原结合结构域、跨膜结构域和至少一个胞内结构域，其中，所述抗原结合结构域含有抗bcma单域抗体和/或抗fcrh5单域抗体；
2.如权利要求1所述的靶向bcma和/或fcrh5的嵌合抗原受体，其特征在于，所述跨膜结构域为cd8跨膜结构域和/或cd28跨膜结构域；
3.如权利要求1所述的靶向bcma和/或fcrh5的嵌合抗原受体，其特征在于，所述胞内结构域包括胞内共刺激信号传导域和/或cd3ζ信号传导域；
4.如权利要求1所述的靶向bcma和/或fcrh5的嵌合抗原受体，其特征在于，所述抗原结合结构域和跨膜结构域通过铰链区进行连接，所述铰链区包含igg1铰链区和/或cd8铰链区；所述铰链区为cd8铰链区，其核苷酸序列如seq id no.14所示。
...【专利技术属性】
技术研发人员：孙卫平，张丹丹，
申请(专利权)人：邦恩泰山东生物医药科技集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。