System.ArgumentOutOfRangeException: 索引和长度必须引用该字符串内的位置。 参数名: length 在 System.String.Substring(Int32 startIndex, Int32 length) 在 zhuanliShow.Bind() 结合白细胞介素-31蛋白的核酸适配体的筛选方法技术_技高网

结合白细胞介素-31蛋白的核酸适配体的筛选方法技术

技术编号:40081576 阅读:16 留言:0更新日期:2024-01-23 14:48
本申请公开了结合白细胞介素‑31的核酸适配体的筛选方法,包括包被步骤、混合步骤、结合步骤、再孵育步骤以及显色步骤。本申请所公开的筛选方法可以对能够与白细胞介素‑31结合的核酸适配体进行筛选并验证,本申请所提供的筛选方法可以通过观察添加显色液之后的颜色变化来判断所添加的核酸适配体是否能够与白细胞介素‑31结合。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及核酸适配体领域,尤其涉及一种结合白细胞介素-31蛋白的核酸适配体的筛选方法


技术介绍

1、白细胞介素-31(il-31)是il-6细胞因子家族的成员,主要由活化的cd4+t细胞产生,特别是活化的th2细胞。il-31主要作用靶点位于皮肤、肺、肠以及神经系统,在睾丸、骨髓、胸腺、脾脏、肾脏和骨骼肌中也有低水平的表达。研究表明il-31在皮炎、瘙痒、过敏性哮喘等过敏性疾病中发挥重要作用。

2、il-31已被证实在人的各种炎症性疾病中发挥作用,同时也影响着造血作用,细胞的增殖和迁移。因此对il-31的检测在临床具有非常重要的意义。由于核酸适配体能够与il-31结合而被用于il-31的检测,所以人们开设合成能够特异性地与il-31结合的核酸适配体,由于合成核酸适配体的过程中是随机中,一次合成的过程中会生成多条不同的单链(即核酸适配体),所以需要对合成后的核酸适配体进行筛选,选取与il-31结合力强的核酸适配体。


技术实现思路

1、本专利技术针对上述问题,提出了一种结合白细胞介素-31蛋白的核酸适配体的筛选方法。

2、本专利技术采取的技术方案如下:

3、一种结合白细胞介素-31的核酸适配体的筛选方法,包括如下步骤,

4、包被步骤,将不同浓度的白细胞介素-31用碳酸盐包被液稀释;

5、混合步骤,将bsa蛋白用碳酸盐包被液稀释,而后将稀释后的bas蛋白与白细胞介素-31混合,弃去上清,余液用dpbs清洗,得到待结合物;</p>

6、结合步骤,将核酸适配体加入待结合物,而后孵育,孵育结束后用dpbs清洗;

7、再孵育步骤,将sa-hrp与dpbs混合,而后将其加入核酸适配体待结合物的混合物,孵育,孵育结束后用dpbs清洗;

8、显色步骤,再孵育结束后向混合物中加入tmb显色液。

9、本方案中,白细胞介素-31用碳酸盐包被液稀释配置成待检测液,所以初始配置白待检测液时选用不同浓度额度白细胞介素-31会制备得到不同浓度的待检测液,这些待检测液在加入核酸适配体之后,若核酸适配体能够与白细胞介素-31结合,那么在加入tmb显色液之后,不同浓度的待检测液应该显现出不同深浅的颜色,即随着待测液中白细胞介素-31的浓度增加,加入显色液后所显示出的颜色越深。

10、综上所述,本方法可以通过观察添加显色液之后的颜色变化来判断所添加的核酸适配体是否能够与白细胞介素-31结合,提供了一种筛选能够与白细胞介素-31结合的核酸适配体的方法。

11、可选的,所述碳酸盐包被液的ph为9.6。

12、可选的,所述碳酸盐报备液为碳酸钠与碳酸氢钠的混合液。

13、可选的,孵育时的温度为25℃。

14、可选的,显色步骤时整个混合物的温度为25℃。

15、可选的,所述sa-hrp与dpbs混合时二者的体积比为1:25000。

16、可选的,所述包被步骤中白细胞介素-31的浓度为0ng/ml~4ng/ml。

17、可选的,用dpbs清洗时dpbs中含有吐温20。

18、本专利技术的有益效果是:通过观察添加显色液之后的颜色变化来判断所添加的核酸适配体是否能够与白细胞介素-31结合,提供了一种筛选能够与白细胞介素-31结合的核酸适配体的方法。

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【技术保护点】

1.一种结合白细胞介素-31的核酸适配体的筛选方法,其特征在于,包括如下步骤,

2.如权利要求1所述的结合白细胞介素-31的核酸适配体的筛选方法,其特征在于,所述碳酸盐包被液的pH为9.6。

3.如权利要求1所述的结合白细胞介素-31的核酸适配体的筛选方法,其特征在于,所述碳酸盐报备液为碳酸钠与碳酸氢钠的混合液。

4.如权利要求1所述的结合白细胞介素-31的核酸适配体的筛选方法,其特征在于,孵育时的温度为25℃。

5.如权利要求1所述的结合白细胞介素-31的核酸适配体的筛选方法,其特征在于,显色步骤时整个混合物的温度为25℃。

6.如权利要求1所述的结合白细胞介素-31的核酸适配体的筛选方法,其特征在于,所述SA-HRP与DPBS混合时二者的体积比为1:25000。

7.如权利要求1所述的结合白细胞介素-31的核酸适配体的筛选方法,其特征在于,所述包被步骤中白细胞介素-31的浓度为0ng/mL~4ng/mL。

8.如权利要求1所述的结合白细胞介素-31的核酸适配体的筛选方法,其特征在于,用DPBS清洗时DPBS中含有吐温20。

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【技术特征摘要】

1.一种结合白细胞介素-31的核酸适配体的筛选方法,其特征在于,包括如下步骤,

2.如权利要求1所述的结合白细胞介素-31的核酸适配体的筛选方法,其特征在于,所述碳酸盐包被液的ph为9.6。

3.如权利要求1所述的结合白细胞介素-31的核酸适配体的筛选方法,其特征在于,所述碳酸盐报备液为碳酸钠与碳酸氢钠的混合液。

4.如权利要求1所述的结合白细胞介素-31的核酸适配体的筛选方法,其特征在于,孵育时的温度为25℃。

5.如权利要求1所述的结合白细胞介素-31的核...

【专利技术属性】
技术研发人员:吴超超牛成镇高强杨通
申请(专利权)人:杭州佰辰医学检验所有限公司
类型:发明
国别省市:

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