【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药基因治疗领域，特别是一种特异性结合h-fabp的核酸适配体及其应用。
技术介绍
1、适配体(aptamer)是一种经体外筛选技术得到的寡核苷酸序列，与相应的配体有严格的识别能力和高度的亲和力,大小一般约6-40kda。单链寡核苷酸，特别是rna的一些二级结构，如发夹、茎环、假节、凸环、g-四聚体等，可使核酸分子形成多种三维结构，成为适配体与靶物质特定区域结合的基础，二者之间的结合主要通过“假碱基对”的堆积作用、氢键作用、静电作用和形状匹配等产生高特异性的结合力。适配体具有高特异性、靶分子广、易于体外合成和修饰等优点，已经在基础研究、临床诊断和治疗中显示了广阔的应用前景。
2、核酸适配体在病毒方面的应用：selex技术发展至今，已针对广泛类型的病毒靶分子如逆转录酶、解螺旋酶、核衣壳蛋白和调节因子等筛选出了各自的适体。在多种病毒病研究中显示适配体能够识别和结合到病毒的特定部位上，适配体可以作为功能阻断剂直接影响病毒的复制、翻译中特定步骤，从而中断疾病发生；适配体也可以特异性的识别被病毒感染的细胞，从而用于诊断。
3、核酸适配体在细菌方面的应用：适配体检测抗原是近年来发展起来的新技术，将一个适配体末端交联到固相载体上作为捕获分子，去捕获待测标本中的靶物质，另一个适配体的5′端标有相应的指示剂，如荧光素、生物素、放射性同位素或胶体金等标记转化为检测分子，当检测分子与相应的待测标本结合后就会产生信号，以达到检测的目的。
4、在细菌治疗方面的应用：虽然selex技术的研究应用依然在初
5、此外，适配体可以作为分子探针用于很多疾病的诊断，例如通过筛选出特异性的适配体，可以用于肿瘤的诊断；适配体具有广泛的应用场景。
6、脂肪酸结合蛋白(fabp)是脂质结合蛋白超家族的成员，它们都是膜结合蛋白，可能在脂肪酸转运，细胞生长，细胞信号传导和基因转录中有关键作用，对于细胞长链脂肪酸到代谢转化部位的细胞内运输至关重要。主要分布在心肌细胞中，也被命名为心脏型脂肪酸结合蛋白。
7、心脏型脂肪酸结合蛋白(h-fabp)是一种分子量为15kda的小蛋白，有助于长链脂肪酸的摄取、细胞内代谢和运输，其将脂肪酸和其他亲脂性物质从细胞质转运到细胞核，在那里这些脂质被释放到一组核受体。这种蛋白质具有一种心脏特异性的脂肪酸结合蛋白形式，在心肌细胞中含量丰富，h-fabp的过表达通过细胞周期的负调节和细胞生长因子的下调抑制细胞生长和增殖，但在缺氧或缺血条件下增强细胞存活。
8、h-fabp可用于检测评估不良心脏事件的风险。心脏损伤后30-90分钟内血液中的h-fabp含量升高，在6-8h时达到最大值，24-36h恢复基线水平，由于其快速释放到血液中，因此h-fabp可以作为急性冠脉综合征(acs标志物；另一方面，由其释放更快且具有特异性，在心肌损伤后，它迅速从细胞质基质释放进入循环，所以h-fabp被鉴定为急性心肌梗死(ami)标志物。
9、核酸适配体是短的单链dna、rna或合成的异种核酸(xna)分子，可以与相应的靶标相互作用，具有高亲和力。由于其独特的特性，包括生产成本低、易于化学修饰、高热稳定性、可重复性以及低水平的免疫原性和毒性，核酸适配体可用作诊断和治疗中抗体的替代品。通过指数富集的配基系统进化技术(selex)对适配体进行系统进化是一种用于适配体筛选的实验方法，允许选择和鉴定具有高亲和力和特异性的体外适配体。
10、目前，对h-fabp检测技术常用的方法有如下几种：放射免疫测定法(ria)、荧光免疫测定法(fia)、酶联免疫测定法(elisa)、免疫胶体金技术、胶乳增强免疫比浊法等。其中，胶乳增强免疫比浊法因其成本较低，且检测耗时短，因而在目前使用最为广泛，但是其精密度和灵敏度较差。但是，其他检测方法则存在检测成本高、耗时长的缺陷，且对操作人员的专业度要求较高。而本专利技术筛选发现的h-fabp适配体具有高特异性以及灵敏性，因为适配体为化学合成物质，所以在检测使用过程中不会有批间差异性的问题，同时在检测过程中避免使用了抗体物质大大降低了检测成本，所以h-fabp适配体在临床检测应用市场上具有广阔前景。
技术实现思路
1、为解决现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种特异性结合h-fabp的核酸适配体及其应用，本专利技术筛选发现的h-fabp适配体具有高特异性以及灵敏性，因为适配体为化学合成物质，所以在检测使用过程中不会有批间差异性的问题，同时在检测过程中避免使用了抗体物质大大降低了检测成本。
2、为了实现上述目标，本专利技术采用如下的技术方案：
3、一种特异性结合h-fabp的核酸适配体，核酸适配体的靶标为：5’-ttcagcactccacgcatagc-36n-cctatgcgtgctaccgtgaa-3’seq id no 01，或与靶标同源性至少为88％的序列，或与靶标具有不多于3个不同核苷酸的序列；36n表示36个任意的核苷酸碱基连接而成的序列。
4、一种特异性结合h-fabp的核酸适配体，核酸适配体的序列为：attggcactccacgcataggcctaccacggtagaagtgccatcccctccgacatcccctatgcgtgctaccgtgaa seq id no 06。
5、前述的一种特异性结合h-fabp的核酸适配体，核酸适配体的空间结构由两个茎环组成。
6、前述的一种特异性结合h-fabp的核酸适配体，核酸适配体的空间结构由5'-gcctaccacg-acatccc-3'组成的第一茎环，5'-gtagaagtgccatcccctc-3'组成的第二茎环组成。
7、前述的一种特异性结合h-fabp的核酸适配体，适配体中的一个或多个核苷酸在5’位置以-f、-nh2、-och3修饰，在3’端以反式胸苷修饰。化学修饰提高抗核酸酶能力并提高亲和力，修饰方式不受限制，只要是根据本专利技术的序列的基础上进行的修饰得到的产品均在本专利技术的保护范围内。
8、前述的一种特异性结合h-fabp的核酸适配体的应用，应用于病毒诊断、抗原检测、疾病诊断试剂盒或用于细菌感染、病毒感染、炎性疾病的治疗药物。这里的应用不是穷举，只要是采用本专利技术的序列或与本专利技术的序列有1、2或3个不同的类似序列均在本专利技术的保护范围内。
9、前述的一种特异性结合h-fabp的核酸适配体的应用，应用于多个核酸适配体联用的组合物。
10、前述的一种特异性结合h-fabp的核酸适配体的应用，用于制备h-fabp捕获、分离、纯化制剂。
11、本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种特异性结合H-FABP的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的靶标为：
2.一种特异性结合H-FABP的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的序列为：
3.根据权利要求2所述的一种特异性结合H-FABP的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的空间结构由两个茎环组成。
4.根据权利要求3所述的一种特异性结合H-FABP的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的空间结构由5'-GCCTACCACG-ACATCCC-3'组成的第一茎环，
5.根据权利要求2所述的一种特异性结合H-FABP的核酸适配体，其特征在于，所述适配体中的一个或多个核苷酸在5’位置以-F、-NH2、-OCH3修饰，在3’端以反式胸苷修饰。
6.根据权利要求1或2所述的一种特异性结合H-FABP的核酸适配体的应用，其特征在于，应用于病毒诊断、抗原检测、疾病诊断试剂盒或用于细菌感染、病毒感染、炎性疾病的治疗药物。
7.根据权利要求5所述的一种特异性结合H-FABP的核酸适配体的应用，其特征在于，应用于多个核酸适配体联用的组合物。>
8.根据权利要求5所述的一种特异性结合H-FABP的核酸适配体的应用，其特征在于，用于制备H-FABP捕获、分离、纯化制剂。
9.根据权利要求5所述的一种特异性结合H-FABP的核酸适配体的应用，其特征在于，用于在制备H-FABP检测或诊断试剂、试剂盒或传感器。
10.根据权利要求5所述的一种特异性结合H-FABP的核酸适配体的应用，其特征在于，用于在制备或构建H-FABP靶向给药系统中。
11.根据权利要求5所述的一种特异性结合H-FABP的核酸适配体的应用，其特征在于，用于检测评估不良心脏事件的早期筛查和快速诊断的产品。
...【技术特征摘要】
1.一种特异性结合h-fabp的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的靶标为：
2.一种特异性结合h-fabp的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的序列为：
3.根据权利要求2所述的一种特异性结合h-fabp的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的空间结构由两个茎环组成。
4.根据权利要求3所述的一种特异性结合h-fabp的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的空间结构由5'-gcctaccacg-acatccc-3'组成的第一茎环，
5.根据权利要求2所述的一种特异性结合h-fabp的核酸适配体，其特征在于，所述适配体中的一个或多个核苷酸在5’位置以-f、-nh2、-och3修饰，在3’端以反式胸苷修饰。
6.根据权利要求1或2所述的一种特异性结合h-fabp的核酸适配体的应用，其特征在于，应用于病毒诊...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴超超，姬红，高强，牛成镇，
申请(专利权)人：杭州佰辰医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。