【技术实现步骤摘要】
本公开涉及高亲和力的抗igf-1r igg4抗体及其在治疗甲状腺相关眼病中的用途。
技术介绍
1、自身免疫性疾病是机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织损伤而引起的疾病，如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、甲状腺相关眼病(thyroid eye disease，以下简称“ted”)等，其致病机制主要是由于各种原因诱发的自身抗原暴露和释放，进而被免疫系统的抗原提呈细胞(如树突状细胞、巨噬细胞等)识别，提呈给t细胞，并使之活化，而活化后的t细胞和b细胞相互作用，并促进b细胞的增殖、活化及分泌自身抗体。自身抗体和自身抗原结合，沉积在组织中(如肾脏、皮肤等)，进而诱发补体活化等级联反应，造成组织损伤，这是自身免疫性疾病的核心发病机制。
2、ted是一种累及眼眶和周围组织的自身免疫性疾病，以活动期的炎症、水肿以及非活动期的软组织纤维化为主要表现，为成年人最常见的眼眶疾病。研究显示，ted常与graves病相伴发生，其年发病率女性约为16/100000，男性约为3/100000。根据bartalena的一项队列研究，graves病患者中约50％存在眼部症状，其中确诊为ted者约占20-30％，发展为严重视力障碍者(因压迫性视神经病变或角膜溃疡等因素)约为3-5％。
3、rundle及wilson最先对ted的临床进程进行了准确描述，将其分为活动期和非活动期。活动期可持续3年，以炎症、充血、水肿为主要表现，常见症状包括眼睑退缩(92％)、眼球突出(62％)、眼外肌运动障碍(43％)、眼眶疼痛(30％)、流泪(23％)和压
4、有研究表明，ted患者的眼外肌成纤维细胞存在高表达的igf-1(insulin-likegrowth factor 1)受体，ted患者眼眶成纤维细胞上过度表达的促甲状腺素受体(thyroidstimulating hormone receptor，tshr)和胰岛素样生长因子1受体(insulin-like growthfactor 1receptor，igf-1r)可以形成桥接的功能性复合物，被gd-igg激活后，促进眼眶成纤维细胞进一步分泌炎性因子和亲水性糖胺聚糖(glycosaminoglycans，gag)，加重眼部炎症和眼眶组织肿胀。此外，ted患者的t细胞和b细胞中的igf-1r表达量也比正常人明显增高。igf-1r是参与ted发生发展的重要自身抗原。
5、目前，临床上常用糖皮质激素来治疗ted，但糖皮质激素存在诸多副作用，且1/3的患者对这种疗法应答不佳。除糖皮质激素外，其它的生物制剂也逐渐用到ted的治疗中，例如rituximab(anti-cd20)，减少自身免疫的b细胞产生自身免疫抗体，但同时带来感染风险；tocilizumab(anti-il-6)和adalimumab(anti-tnf-alfa)，虽然能够缓解急性期的炎症，例如疼痛和水肿，但不能减轻眼球突出，也不能缓解眼外运动受限的症状。
6、抗igf-1r抗体可以结合igf-1r，阻止igf-1和gd-igg诱导的眼眶成纤维细胞释放炎性细胞因子，也可抑制眼眶成纤维细胞进一步分化成脂肪细胞和gag分泌，改善眼球突出等眼部组织病变。现有专利文献，例如wo2004087756已记载，抗igf-1r抗体治疗活动期ted的疗效已得到充分验证并应用于临床，但实际在临床实践中发现其有诱发听力损伤和高血糖等严重不良反应事件的风险。这可能与这些已公开的igf-1r抗体(wo2004087756，wo2006069202，wo2003059951)的研发思路只集中于清除肿瘤细胞的角度有关。
7、例如，teprotumumab-trbw是人igf1-r的特异性igg1型抗体，不识别啮齿类或者其它常见的动物模型的igf1-r。因此无论是igf-1和/或tsh诱导的小鼠甲状腺相关眼病(tao，thyroid associated ophthalmopathy)模型(2002-animal models ofthyroid-associated ophthalmopathy；2017-review of mouse models of gravesdisease and orbiopathy)还是通过过表达htshr的小鼠tao模型(2019-an improvedmouse model of graves disease by once immunization with ad-tshr289)，都无法用teprotumumab-trbw进行完整的药效验证试验，更无法评价抗体治疗过程中免疫细胞的参与情况。
8、文献报道显示，teprotumumab-trbw可以结合到tao患者的眼眶成纤维细胞上的igf1-r，并阻止由igf1-r介导的细胞内信号转导(2018-igf-ireceptor and thyroid-associated ophthalmopathy)，阻断纤维细胞的增生和局部组织结构的重塑(remodeling)。igf-1和tsh可以刺激眼眶成纤维细胞分泌炎性细胞因子，例如il-6和il-8。il-6可以促进t细胞表面il-2r的表达，增强il-1和tnf对th细胞的致有丝分裂作用；在急性炎症反应中诱导急性期反应蛋白的合成，促进b细胞增殖、分化并产生抗体；还能有效地促进tnf和il-1诱导的恶病质。il-8是一种属于趋化因子家族的细胞因子，主要生物学活性是吸引和激活中性粒细胞，可导致和加重局部的炎症反应，此外il-8对嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和淋巴细胞也有一定作用。
9、但是，本领域中仍然需要用于治疗甲状腺相关眼病的治疗性抗体。
技术实现思路
1、本专利技术部分基于专利技术人的如下发现。专利技术人发现甲状腺相关眼病患者的眼眶组织中除了有纤维细胞的增生和重建，在急性炎症期还会有大量的免疫细胞浸入。现有技术的抗体诸如teprotumumab-trbw通过抗原结合区结合到igf-1r上，阻断igf-1r介导的细胞内信号转导和增殖；同时teprotumumab-trbw的igg-1fc区域可以结合补体，产生补体依赖的细胞毒性作用(complement dependent cytotoxicity,cdc)；以及结合到t淋巴细胞的fcr上，介导抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用(antibody-dependent cell-mediatedcytotoxicity,adcc)，从而导致眼眶成纤维细胞的破坏，加重眼眶局部的炎症反应。因此，甲状腺相关眼病治疗性抗体的设计需要同时考虑抗体对眼眶成纤维细胞的影响以本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种对于IGF-1R具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
2.权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
3.权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含含有如SEQ ID NO:1所示的序列的重链，和/或含有如SEQ ID NO:2所示的序列的轻链。
4.权利要求1-3任一项所述抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是鼠源抗体、嵌合抗体或人源化抗体。
5.权利要求1-4任一项所述抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段由Fc介导的免疫细胞激活效应，以及抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，ADCC)效应低于IgG1同种型。
6.分离的核酸分子，其编码权利要求1-5任一项所述的抗体或其抗原结合片段、其重链和/或轻链、或其重链可变区和/或轻链可变区。
7.载体，其包含权利要求6所述的分离的核酸分子；优选地，所述载体为克隆
8.宿主细胞，其包含权利要求6所述的分离的核酸分子或权利要求7所述的载体。
9.制备权利要求1-5任一项所述的抗体或其抗原结合片段的方法，其包括，在允许所述抗体或其抗原结合片段表达的条件下，培养权利要求8所述的宿主细胞，和从培养的宿主细胞培养物中回收所述抗体或其抗原结合片段。
10.多特异性抗体，所述多特异性包含第一抗体或其片段，和另外的抗体或其片段，或抗体类似物；其中所述第一抗体或其片段是权利要求1-5任一项所述的特异性结合IGF-1R的抗体或其抗原结合片段；优选地，所述多特异性抗体是双特异性抗体或三特异性抗体或四特异性抗体。
11.缀合物，其包括抗体或其抗原结合片段以及偶联部分，其中所述抗体或其抗原结合片段为1-5中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，所述偶联部分为可检测的标记，如放射性同位素、荧光物质、发光物质、有色物质或酶，或者所述偶联部分为药品，如化疗药、放射性核素或毒素。
12.一种表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其包含或表达权利要求1-5任一项所述的抗体或其抗原结合片段，权利要求6所述的核酸或权利要求7所述的载体；优选地，所述细胞来源于免疫细胞，或所述的抗原结合片段选自scFv；更优选地，所述细胞来源于T淋巴细胞、NK细胞、单核细胞、巨噬细胞或树突状细胞及其任意组合。
13.溶瘤病毒，其包括权利要求6所述的核酸或权利要求7所述的载体。
14.融合蛋白，其包括抗体或其抗原结合片段以及非免疫球蛋白部分，其中所述抗体或其抗原结合片段为1-5中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，所述非免疫球蛋白部分为多肽，例如细胞因子或其拮抗多肽和抗体，优选地，细胞因子选自IL-2、IL-15、IL-7、IL-12、IL-18、IL-21、TNF-α或IFNγ。
15.药物组合物，其含有权利要求1-5任一项所述的抗体或其抗原结合片段、权利要求6所述的分离的核酸分子、权利要求7所述的载体、权利要求8所述的宿主细胞、权利要求10所述的多特异性抗体、权利要求11所述的缀合物、权利要求12所述的CAR细胞、权利要求13所述的溶瘤病毒、和/或权利要求14所述的融合蛋白，优选地药物组合物还包含一种或多种促甲状腺激素受体TSHR抑制剂和/或药学上可接受的载体和/或赋形剂。
16.权利要求1-5任一项所述的抗体或其抗原结合片段、权利要求6所述的分离的核酸分子、权利要求7所述的载体、权利要求8所述的宿主细胞、权利要求10所述的多特异性抗体、权利要求11所述的缀合物、权利要求12所述的CAR细胞、权利要求13所述的溶瘤病毒、权利要求14所述的融合蛋白、权利要求15所述的药物组合物在制备用于预防和/或治疗甲状腺相关眼病的药物中的应用。
17.权利要求16所述的应用，其特征在于，所述甲状腺相关眼病包括眼球突出、畏光、流泪、疼痛、眼红、眼部肿胀、眼球运动障碍、复视、眼睑闭合不全、视力下降和/或压迫视神经引发的失明。
18.一种用于在受试者中预防和/或治疗甲状腺相关眼病的方法，所述方法包括向有此需要的受试者施用有效量的权利要求15所述的药物组合物，其中所述受试者是哺乳动物；优选地，所述受试者是人。
19.权利要求1所述抗体和一种或多种促甲状腺激素受体TSHR抑制剂的联合应用，所述联合应用用于治疗甲状腺眼病，优选地，其中所述促甲状腺激素受体TSHR抑制剂为小分子抑制剂或抗TSHR的抗体，优选地，所述甲状腺相关眼病包括眼球突出、畏...
【技术特征摘要】
1.一种对于igf-1r具有结合特异性的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
2.权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
3.权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含含有如seq id no:1所示的序列的重链，和/或含有如seq id no:2所示的序列的轻链。
4.权利要求1-3任一项所述抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是鼠源抗体、嵌合抗体或人源化抗体。
5.权利要求1-4任一项所述抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段由fc介导的免疫细胞激活效应，以及抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，adcc)效应低于igg1同种型。
6.分离的核酸分子，其编码权利要求1-5任一项所述的抗体或其抗原结合片段、其重链和/或轻链、或其重链可变区和/或轻链可变区。
7.载体，其包含权利要求6所述的分离的核酸分子；优选地，所述载体为克隆载体或表达载体。
8.宿主细胞，其包含权利要求6所述的分离的核酸分子或权利要求7所述的载体。
9.制备权利要求1-5任一项所述的抗体或其抗原结合片段的方法，其包括，在允许所述抗体或其抗原结合片段表达的条件下，培养权利要求8所述的宿主细胞，和从培养的宿主细胞培养物中回收所述抗体或其抗原结合片段。
10.多特异性抗体，所述多特异性包含第一抗体或其片段，和另外的抗体或其片段，或抗体类似物；其中所述第一抗体或其片段是权利要求1-5任一项所述的特异性结合igf-1r的抗体或其抗原结合片段；优选地，所述多特异性抗体是双特异性抗体或三特异性抗体或四特异性抗体。
11.缀合物，其包括抗体或其抗原结合片段以及偶联部分，其中所述抗体或其抗原结合片段为1-5中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，所述偶联部分为可检测的标记，如放射性同位素、荧光物质、发光物质、有色物质或酶，或者所述偶联部分为药品，如化疗药、放射性核素或毒素。
12.一种表达嵌合抗原受体(car)的细胞，其包含或表达权利要求1-5任一项所述的抗体或其抗原结合片段，权利要求6所述的核酸或权利要求7所述的载体；优选地，所述细胞来源于免疫细胞，或...
【专利技术属性】
技术研发人员：向宇，张丹丹，王瀚博，
申请(专利权)人：上海琅钰健康科技集团有限公司，
类型：发明
国别省市：
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