用真核表达系统制备泛素结合酶ＵｂｃＨ１０的方法技术方案

本发明专利技术属于医学研究领域，特别涉及一种用真核表达系统制备泛素蛋白质降解系统中的泛素结合酶ＵｂｃＨ１０的方法。本研究中制备的ＵｂｃＨ１０蛋白，为今后进一步研究泛素结合酶ＵｂｃＨ１０在肿瘤发生、发展中的作用机理奠定了研究基础，采用杂交瘤技术获得ＵｂｃＨ１０特异性单克隆抗体或免疫动物获得多价特异性抗血清，可为肿瘤的基因诊断提供方便。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种用真核表达系统制备泛素结合酶ＵｂｃＨ１０的方法，其特征在于：　　主要包括如下步骤：　　（１）从大肠癌组织中提取基因组总ＲＮＡ，以此为模板通过ＲＴ－ＰＣＲ扩增泛素结合酶ＵｂｃＨ１０，并将其构建至克隆载体ｐＭＤ１８－Ｔ中；　　（２）通过ＥｃｏＲ　Ⅰ和ＨｉｎｄⅠ　Ⅱ双酶切构建成重组表达载体ｐｃＤＮＡ３．１－ＵｂｃＨ１０；　　（３）重组质粒经酶切和序列测定后，转染大肠癌细胞株ＬｏＶｏ，进行Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ分析检测；　　（４）经Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ分析表明构建的重组表达载体ｐｃＤＮＡ３．１－ＵｂｃＨ１０能在真核表达细胞中高表达ＵｂｃＨ１０蛋白。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈世敏，刘贤锡，
申请(专利权)人：陈世敏，
类型：发明
国别省市：88[中国|济南]