【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种人源化的结合cd20的抗体或cd20抗原结合片段及应用。
技术介绍
1、b淋巴瘤细胞表达的cd20抗原是公认的治疗靶点。cd20由位于11号染色体上的ms4a家族基因编码。已经确定了多个转录起始位点，该基因的翻译区域位于第三(第一百九十三个核甘酸)和第八个外显子(第二百一十六个核苷酸)，在编码序列的894个碱基对中分布了六个外显子。此外，cd20基因的选择性剪切被凸现出来，发生在5'非翻译区，这导致在人b淋巴细胞中的同一种蛋白会被三种可替换的cd20 mrna翻译。选择性剪接仍然是一个前核糖核酸成熟中的关键过程，并可以导致蛋白质的翻译和表型多样性的增加。
2、嵌合抗原受体(car)是一种基因工程改造分子，目的是赋予t细胞一个识别肿瘤相关表面抗原的能力。在其最简单的结构里，car包括含有可变区片段结构的靶向单链(单链fv，scfv)，将抗体连接到各种细胞内信号转导结构域，从而使t细胞活化。这种方法结合了抗体的特异性与细胞的细胞毒性的能力。早期有很多的临床试验是用car-t细胞治疗表达cd19或cd20阳性表达的b细胞恶性肿瘤，有显著的治疗效果，用于治疗复发/难治性疾病。尽管取得了这些成就，也只是刚刚开始理解并正在努力处理并利用cart细胞生物治疗的复杂性，并用它治疗难治性恶性血液肿瘤。
3、目前研究者在临床试验中出现的不良反应与潜在的风险除了脱靶效应、肿瘤溶解综合征、细胞因子释放综合征之外，另一个影响car-t疗效的主要原因就是car-t的在体内的维持时间短，患者易复
4、leu16为抗cd20的单克隆抗体，是n gadol等人于1988年首次提出，之后陆续有研究基于此抗体序列进行实验。2005年stephen d gillies在blood上发表文章介绍了一种基于leu16抗cd20抗体的抗cd20-白细胞介素2（il-2）免疫细胞因子（anti-cd20-il-2immunocytokine），并证明其在已建立的人b淋巴瘤的scid小鼠模型中非常有效。2017年dina schneider等人在j immunother cancer上发表文章介绍了一种cd19/cd20双靶向的cart细胞，证明了其对白血病细胞系的杀伤能力，其中抗cd19的scfv来自fmc63，抗cd20的scfv则来自leu16。但鼠源的cd20抗体血清半衰期短，容易复发耐药，不能彻底杀灭肿瘤细胞。
5、一定程度上，人源化抗体相比于鼠源抗体有更多优势。鼠源抗体，指恒定区和可变区序列均来自小鼠基因的单克隆抗体，其鼠源成分达到100%；鼠源单抗制备仰赖杂交瘤技术，即将小鼠暴露于特定抗原之下，随后筛选并提取其体内产生抗体的b淋巴细胞；而后将该类细胞与不能产生抗体的小鼠骨髓瘤细胞融合，继而筛选出不会凋亡，能无限增殖，亦能分泌特定抗体的鼠杂交融合细胞。缺点第一是具有较强的免疫原性，易引发hama反应（即鼠源抗体本身被人体免疫系统视为抗原，引起不必要的免疫反应），轻则加速抗体被人体内被清除、缩短半衰期进而影响疗效，重则引发严重免疫疾病；第二鼠源抗体的可变区难以与人类抗原交互，更难诱发adcc作用，因此无法有效杀灭目标；第三鼠源抗体的恒定区与人类恒定区序列不同，引发的后继免疫反应因而更弱。因此本专利技术需要对鼠源抗体进行人源化改造。
6、人源化抗体，指以鼠源抗体等异种来源抗体为框架，在此基础上增添来自人类基因序列部分的抗体。将鼠源抗体人源化，其优点是第一、有效地减弱了人抗鼠抗体排异反应，降低免疫原性的同时也降低了毒副作用；第二、其不易被免疫系统自识别的特性极大地增加了抗体在体内留存时间，延长了体内半衰期；第三、拥有人源恒定区的抗体较鼠源抗体能够起到更全面的免疫作用。但也有缺点，人源化抗体较鼠源性抗体在体外的结合活性可能减弱，不易观测其免疫效力；且制备周期较长、技术复杂性相对较高，生产时间较长。
7、在car-t疗法中可以放大人源化抗体的特点及优势：
8、第一，人源化抗体疗效比较稳健，目前临床试验中构建car的胞外scfv多为鼠源性单抗，但car结构中鼠源scfv特定结合抗原的免疫表位引起的hla抗原t细胞介导的免疫反应，一方面会阻碍car与靶抗原之间的相互作用以抑制car-t细胞的功能，一方面也会影响细胞的活化、扩增、甚至导致car-t细胞在患者体内的失活；而人源化scfv可通过降低car的免疫原性发挥疗效稳定性更高。
9、第二，人源化抗体可有效延长复发时间，经car-t治疗后，car-t的耗尽、肿瘤微环境的改变等因素都可能导致疾病复发，鼠源抗体高免疫原性激发的hama会缩短其在人体内的半衰期，从而可能会缩短疾病复发时间。
10、第三，人源化scfv构建car-t可多次治疗，而鼠源抗体二次治疗效果弱，如以cd19为靶点的肿瘤，首次采用鼠源car-t治疗并复发后，再次使用鼠源car-t疗效减弱，高免疫原性可能会引发体内产生抗鼠源抗原抗体，表现为耐药性，此时二次治疗采用人源化scfv构建car-t可能可以缓解复发肿瘤。
11、第四，相比鼠源car-t，人源化car-t具有更低的耐药性，鼠源car-t在目前阶段仍可以被免疫系统识别出来，并触发免疫系统介导的排斥反应，这使得在反复用药时身体会产生大量针对car-t细胞的抗体，并使其药效严重减弱。而人源化car-t（人源化scfv）由于序列与人体自身的受体更接近，在回输进入人体之后不易被免疫系统识别。人源化抗cd19car-t目前仍处在试验阶段（nct02374333)，但早期临床试验显示它在重复用药时，药效减弱程度较鼠源car-t更小。在car中将抗体人源化使得hama发生概率逐步降低，安全性、疗效及时间得到改善。
技术实现思路
1、为了避免鼠源等异种生物来源的结合cd20的抗体或cd20抗原结合片段在疾病治疗过程中对人体带来的危害，本专利技术将其框架区进行了人源化改造，获得了一种人源化的结合cd20的抗体或cd20抗原本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种人源化的结合CD20的抗体或CD20抗原结合片段，其特征在于，包含：
2.根据权利要求1所述的人源化的结合CD20的抗体或CD20抗原结合片段，其特征在于，所述人源化的CD20抗原结合片段是人源化抗CD20 scFv，所述人源化的CD20抗原结合片段包含：
3.核酸，其特征在于，编码根据权利要求1或2所述的人源化的结合CD20的抗体或CD20抗原结合片段。
4.根据权利要求3所述的核酸，其特征在于，包含：
5.载体，其特征在于，包含根据权利要求3或4所述的核酸。
6.宿主细胞，其特征在于，包含根据权利要求3或4所述的核酸或者根据权利要求5所述的载体。
7.用于产生抗体或抗原结合片段的方法，其特征在于，培养根据权利要求6所述的宿主细胞并从培养物回收所述抗体或抗原结合片段。
8.一种抗CD20 CAR，其特征在于，包含抗CD20 scFv；所述抗CD20 scFv为根据权利要求1所述人源化的CD20抗原结合片段；所述人源化的CD20抗原结合片段是单链Fv。
9.抗CD20 CAR-
10.根据权利要1或2所述的人源化的结合CD20的抗体或CD20抗原结合片段，或根据权利要求3所述的核酸，或根据权利要求5所述的载体，或根据权利要求6所述的宿主细胞，或根据权利要求8所述的抗CD20 CAR，或根据权利要求9所述的抗CD20 CAR-T或抗CD20 CAR-NK或抗CD20 CAR-M在制备抗肿瘤药物或治疗B细胞衍生的自身免疫性疾病药物中的应用。
11.根据权利要求1或2所述的人源化的结合CD20的抗体或CD20抗原结合片段在降低CD20的细胞表面水平或降低CD20的细胞内水平方面的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种人源化的结合cd20的抗体或cd20抗原结合片段，其特征在于，包含：
2.根据权利要求1所述的人源化的结合cd20的抗体或cd20抗原结合片段，其特征在于，所述人源化的cd20抗原结合片段是人源化抗cd20 scfv，所述人源化的cd20抗原结合片段包含：
3.核酸，其特征在于，编码根据权利要求1或2所述的人源化的结合cd20的抗体或cd20抗原结合片段。
4.根据权利要求3所述的核酸，其特征在于，包含：
5.载体，其特征在于，包含根据权利要求3或4所述的核酸。
6.宿主细胞，其特征在于，包含根据权利要求3或4所述的核酸或者根据权利要求5所述的载体。
7.用于产生抗体或抗原结合片段的方法，其特征在于，培养根据权利要求6所述的宿主细胞并从培养物回收所述抗体或抗原结合片段。
8.一种抗cd20 car，其特征在于，包含抗cd20 scfv；所...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱红佳，徐南，叶晶，谭靖雯，李明昊，康立清，余宙，
申请(专利权)人：上海优卡迪生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。