【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
专利
本专利技术涉及嵌合抗原受体(car)，其包含结合细胞连接蛋白的至少一个表位的抗原结合蛋白，其中所述细胞连接蛋白位于细胞-细胞连接内，并且在癌细胞中，其中所述细胞连接蛋白的所述一个或多个表位仅可由所述car胞外域接近和/或由所述car胞外域结合。
技术介绍
0、专利技术背景
1、过继t细胞疗法是对癌症患者具有可治愈潜力变革性药物。为了为患者设计这些有力的自体细胞疗法，使用了外周血来获得t细胞，然后对其进行遗传修饰。将嵌合抗原受体(car)引入这些细胞使它们特异性与选择的抗原结合。离体扩增这些经修饰的细胞并再输注到患者中，目的是运输至表达匹配的抗原的癌细胞并随后杀死这些癌细胞(yeku等人,am soc clin oncol educ book.2017；37:193-204；mcbride等人,wiley interdiscip revnanomed nanobiotechnol.2019；11(5):e1557)。
2、car是合成抗原受体，其重定向t细胞特异性、功能和持久性。car由与t细胞激活结构域(例如,cd3复合物的ζ链)和共刺激结构域(例如，cd28或4-1bb)融合的抗原结合蛋白的抗原特异性区(诸如单链可变片段(scfv))构成。这种配置促进抗原特异性激活并增强人原代t细胞的增殖和抗凋亡功能。
3、已证明car-t细胞针对一系列液体肿瘤b细胞恶性肿瘤的引人注目的疗效；早期临床试验结果表明了在多发性骨髓瘤中的活性(sadelain等人,nature.2017；545(76
4、为了针对实体癌生成安全而有效的t细胞疗法，t细胞必须在整个制备过程中保持高而有效的杀伤潜力、能够运输至肿瘤，并克服免疫抑制性肿瘤微环境(tme)。主要的成功因素之一是抗原靶标的选择。通常，选择用于靶向的抗原在癌细胞表面上以足够的量表达，而正常组织表达仍然很低，以确保与健康细胞的低交叉反应性(脱靶效应和中靶效应两者)。实体瘤中的car免疫疗法仍然富有挑战性，很大程度上是由于缺乏其表达限于恶性组织的适当的表面抗原。抗原靶标的肿瘤外表达有引起中靶毒性的可能，其具有取决于受影响的器官组织的不同程度的严重性(watanabe等人,front immunol.2018；9:2486；park等人,sci rep.2017；7(1):14366)。
5、因此，需要鉴定出用于car免疫疗法的新靶标，特别是用于生成针对实体瘤和癌症的t细胞疗法的新靶标。
6、专利技术概述
7、根据第一方面，本文提供了嵌合抗原受体(car)，其包含：
8、a)胞外域，其包含分离的密蛋白3(claudin-3)结合蛋白，其与人密蛋白3上的不连续表位结合，所述不连续表位至少包含seq id no:13的n38和e153；
9、b)跨膜结构域；和
10、c)一个或多个胞内信号传导结构域。
11、在进一步的方面，提供了包含多肽的嵌合抗原受体(car)，该多肽包含：
12、a)包含密蛋白3结合结构域的胞外域，所述密蛋白3结合结构域包含重链可变区(vh)，所述重链可变区包含seq id no:1的重链互补决定区1(cdrh1)序列；seq id no:2的重链互补决定区2(cdrh2)序列；seq id no:3的重链互补决定区3(cdrh3)序列；
13、b)跨膜结构域；和
14、c)一个或多个胞内信号传导结构域。
15、在进一步的方面，提供了分离的密蛋白3结合蛋白，其与人密蛋白3上的不连续表位结合，所述不连续表位至少包含seq id no:13的n38和e153。
16、在进一步的方面，提供了密蛋白3结合蛋白，其包含重链可变区(vh)，所述重链可变区包含seq id no:1的重链互补决定区1(cdrh1)序列；seq id no:2的重链互补决定区2(cdrh2)序列；seq id no:3的重链互补决定区3(cdrh3)序列。
17、在进一步的方面，本文提供了多肽，其包含本文公开的car或密蛋白3结合蛋白的氨基酸序列。
18、根据其他方面，本文提供了包含编码本文公开的car或密蛋白3结合蛋白的序列的多核苷酸、包含本文公开的多核苷酸序列的载体以及包含本文公开的多核苷酸序列和/或载体的载体生产者细胞。
19、在另一个方面，本文提供了免疫效应细胞，其包含本文公开的car、多肽、多核苷酸和/或载体。
20、在另一个方面，本文提供了药物组合物，其包含本文公开的免疫效应细胞或密蛋白3结合蛋白，以及药学上可接受的赋形剂。
21、在另一个方面，本文提供了生成包含本文公开的car的免疫效应细胞的方法；所述方法包括将本文公开的多肽、多核苷酸和/或载体引入至免疫效应细胞中。
22、在另一个方面，本文提供了本文公开的car、密蛋白3结合蛋白、多肽、多核苷酸、载体、免疫效应细胞或药物组合物，其用于治疗癌症。
23、在另一个方面，本文提供了治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的本文公开的car或密蛋白3结合蛋白、多肽、多核苷酸、载体、免疫效应细胞或药物组合物。
24、在另一个方面，本文提供了增加对患有癌症的受试者中的癌细胞的细胞毒性的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的本文公开的car或密蛋白3结合蛋白、多肽、多核苷酸、载体、免疫效应细胞或药物组合物。
25、在另一个方面，本文提供了减少患有癌症的受试者中癌细胞数量的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的本文公开的car或密蛋白3结合蛋白、多肽、多核苷酸、载体、免疫效应细胞或药物组合物。
26、在另一个方面，本文提供了本文公开的car或密蛋白3结合蛋白、多肽、多核苷酸、载体、免疫效应细胞或药物组合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
27、在另一个方面，本文提供了本文公开car或密蛋白3结合蛋白、多肽、多核苷酸、载体、免疫效应细胞或药物组合物，其用于疗法。
技术实现思路
0、概述
1、新表位或新抗原(癌症特异性突变或仅由癌细胞表达的蛋白质)的识别对开发抗癌疗法是重要的。此类新表位允许将癌细胞与健康的、非癌细胞区分，并允许抗癌剂和患者自身的免疫系统被独特地靶向，而健康的、非癌细胞仍然不受影响。一种相似的但特异性较低的方法是靶向肿瘤相关联的自身抗原——与健康的、非癌细胞相比，在癌细胞中上调或过表达的蛋白质或其他细胞组分。然而，这些方法的缺点是真正的本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.包含多肽的嵌合抗原受体，所述多肽包含：
2.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中所述胞外域进一步包含密蛋白3结合结构域，所述密蛋白3结合结构域包含轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:4的轻链互补决定区1(CDRL1)序列；SEQ ID NO:5的轻链互补决定区2(CDRL2)序列；SEQ ID NO:6的轻链互补决定区3(CDRL3)序列。
3.根据权利要求2所述的嵌合抗原受体，其中所述VL位于所述VH的N末端，或其中所述VH位于所述VL的N末端。
4.根据权利要求2至3中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述VL和VH经由肽键彼此直接融合或经由肽接头彼此连接。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述抗原结合结构域选自由以下组成的组：骆驼Ig、Ig NAR、Fab片段、Fab’片段、F(ab)’2片段、F(ab)’3片段、Fv、单链可变片段(scFv)、bis-scFv、(scFv)2、微抗体、双抗体、三抗体、四抗体、二硫键稳定化的Fv蛋白(dsFv)和单结构域抗体(sdAb)。
<...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.包含多肽的嵌合抗原受体，所述多肽包含：
2.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中所述胞外域进一步包含密蛋白3结合结构域，所述密蛋白3结合结构域包含轻链可变区(vl)，所述轻链可变区包含seq id no:4的轻链互补决定区1(cdrl1)序列；seq id no:5的轻链互补决定区2(cdrl2)序列；seq id no:6的轻链互补决定区3(cdrl3)序列。
3.根据权利要求2所述的嵌合抗原受体，其中所述vl位于所述vh的n末端，或其中所述vh位于所述vl的n末端。
4.根据权利要求2至3中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述vl和vh经由肽键彼此直接融合或经由肽接头彼此连接。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述抗原结合结构域选自由以下组成的组：骆驼ig、ig nar、fab片段、fab’片段、f(ab)’2片段、f(ab)’3片段、fv、单链可变片段(scfv)、bis-scfv、(scfv)2、微抗体、双抗体、三抗体、四抗体、二硫键稳定化的fv蛋白(dsfv)和单结构域抗体(sdab)。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述vh包含与seq id no:7具有至少90％或95％序列同一性的氨基酸序列，或相对于seq id no:7具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列，和/或其中所述vl包含与seq idno:8具有至少90％或95％序列同一性的氨基酸序列，或相对于seq id no:8具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述vh包含seq id no:7的氨基酸序列和/或所述vl包含seq id no:8的氨基酸序列。
8.根据权利要求1至6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述胞外域包含与seq idno:11具有至少90％或95％序列同一性的氨基酸序列，或相对于seq id no:11具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列，或其中所述胞外域包含与seqid no:18具有至少90％或95％序列同一性的氨基酸序列，或相对于seq id no:18具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述跨膜结构域衍生自选自由以下组成的组的多肽：t细胞受体的α链或β链、cd3δ、cd3ε、cd3γ、cd3ζ、cd4、cd5、cd8α、cd9、cd16、cd22、cd27、cd28、cd33、cd37、cd45、cd64、cd80、cd86、cd134、cd137(4-1bb)、cd152、cd154、cd278(icos)和pd1。
10.根据权利要求9所述的嵌合抗原受体，其中所述跨膜结构域衍生自cd8α。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述一个或多个胞内信号传导结构域衍生自选自由以下组成的组的胞内信号传导分子：fcrγ、fcrβ、cd3γ、cd3ε、cd3δ、cd3ζ、cd22、cd66d、cd79a和cd79b，或其中所述一个或多个胞内信号传导结构域是cd3ζ。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的嵌合抗原受体，其进一步包含共刺激信号传导结构域。
13.根据权利要求12所述的嵌合抗原受体，其中所述共刺激结构域衍生自选自由以下组成的组的共刺激分子：card11、cd2、cd7、cd27、cd28、cd30、cd40、cd54(icam)、cd83、cd134(ox40)、cd137(4-1bb)、cd278(icos)、dap10、lat、nkd2c、slp76、tlr1、tlr2、tlr3、tlr4、tlr5、tlr6、tlr7、tlr8、tlr9、tlr10、trim和zap70。
14.嵌合抗原受体，其包含：
15.根据权利要求1至14中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述嵌合抗原受体包含与seq id no:12、34、35、36、37、38或39具有至少90％或95％序列同一性的氨基酸序列，或相对于seq id no:12、34、35、36、37、38或39具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸取代、插入或缺失的氨基酸序列，或其中所述嵌合抗原受体包含seq id no:12、34、35、36、37、38或39的氨基酸序列。
16.嵌合抗原受体，其与根据权利要求1至15中任一项所述的嵌合抗原受体竞争结合。
17.工程化免疫效应细胞，其包含根据权利要求1至16中任一项所述的嵌合抗原受体。
18.根据权利要求17所述的免疫效应细胞，其中所述免疫效应细胞选自由以下组成的组：t细胞、细胞毒性t淋巴细胞、自然杀伤t淋巴细胞、巨噬细胞和自然杀伤细胞。
19.根据权利要求17至18中任一项所述的免疫效应细胞，其进一步包含消融元件。
20.根据权利要求17至19中任一项所述的免疫效应细胞，其中所述消融元件衍生自选自由以下组成的组的多肽：截短的人egfr多肽和cd20，或其中所述消融元件是cd20。
21.多核苷酸，其编码根据权利要求1至16中任一项所述的嵌合抗原受体。
22.载体，其包含权利要求21所述的多核苷酸。
23.根据权利要求22所述的载体，其中所述载体选自由以下组成的组：逆转录病毒载体、慢病毒载体、腺相关病毒(aav)载体、人免疫缺陷病毒i(hiv-i)、人免疫缺陷病毒2(hiv-2)、维斯纳-梅迪病毒(vmv)病毒、山羊关节炎脑炎病毒(caev)、马传染性贫血病毒(eiav)、猫免疫缺陷病毒(fiv)、牛免疫缺陷病毒(biv)和猿猴免疫缺陷病毒。
24.药物组合物，其包含根据权利要求17至20中任一项所述的工程化免疫效应细胞、根据权利要求21所述的多核苷酸、或根据权利要求22至23中任一项所述的载体，以及药学上可接受的赋形剂。
25.治疗有此需要的患者的癌症的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的根据权利要求24所述的药物组合物。
26.根据权利要求25所述的方法，其中所述癌症是实体癌、上皮癌、结直肠癌、胰腺癌、乳腺癌、三阴性乳腺癌(tnbc)、卵巢癌、肺癌、非小细胞肺癌(nsclc)、或前列腺癌。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述癌症是结直肠癌。
28.根据权利要求1至18中任一项所述的嵌合抗原受体、根据权利要求19至20中任一项所述的工程化效应细胞、根据权利要求21所述的多核苷酸、根据权利要求22至23中任一项所述的载体或根据权利要求24所述的药物组合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
29.根据权利要求1至18中任一项所述的嵌合抗原受体、根据权利要求19至20中任一项所述的工程化效应细胞、根据权利要求21所述的多核苷酸、根据权利要求22至23中任一项所述的载体或根据权利要求24所述的药物组合物，其用于疗法。
30.根据权利要求1至18中任一项所述的嵌合抗原受体、根据权利要求19至20中任一项所述的工程化效应细胞、根据权利要求21所述的多核苷酸、根据权利要求22至23中任一项所述的载体或根据权利要求24所述的药物组合物，其用于治疗癌症。
31.密蛋白3结合蛋白，其包含重链可变区(vh)，所述重链可变区包含seq id no:1的重链互补决定区1(cdrh1)序列；seq id no:2的重链互补决定区2(cdrh2)序列；seq id no:3的重链互补决定区3(cdrh3)序列。
32.根据权利要求31所述的密蛋白3结合蛋白，其进一步包含轻链可变区(vl)，所述轻链可变区包含seq id no:4的轻链互补决定区1(cdrl1)序列；seq id no:5的轻链互补决定区2(cdrl2)序列；seq id no:6的轻链互补决定区3(cdrl3)序列。
33.根据权利要求31或权利要求32所述的密蛋白3结合蛋白，其中所述密蛋白3结合蛋白选自由以下组成的组：单克隆抗体、人igg1同种型、骆驼ig、ig nar、fab片段、fab’片段、f(ab)’2片段、f(ab)’3片段、fv、单链可变片段(scfv)、bis-scfv、(scfv)2、微抗体、双抗体、三抗体、四抗体、二硫键稳定化的fv蛋白(dsfv)和单结构域抗体(sdab)。
34.根据权利要求31至33所述的密蛋白3结合蛋白，其中所述vl位于所述vh的n末端，或其中所述vh位于所述vl的n末端，和/或其中所述vl和所述vh经由肽键彼此直接融合或经由肽接头彼此连接。
35.根据权利要求31至34所述的密蛋白3结合蛋白，其中所述vh包含与seq id no:7具有至少90％或95％序列同一性的氨基酸序列，或相对于seq id no:7具有一个、两个、三个、四个或五...
【专利技术属性】
技术研发人员：T·索斯盖特，
申请(专利权)人：葛兰素史密斯克莱知识产权发展有限公司，
类型：发明
国别省市：
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