一种从生物体中提取ＧＰ４Ｇ的方法技术

本发明专利技术提供了一种从生物体中提取ＧＰ４Ｇ（四磷酸二鸟苷）的方法，采用以下步骤对ＧＰ４Ｇ进行提取：原料预处理、脱水、破碎、浸取、中和、吸附、洗脱、脱盐和真空浓缩，借助于本发明专利技术提供的技术方案，可以达到收率高、生产成本低，有利于工业化生产的优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种提取生物体中活性物质的方法，特别涉及一种从生物体中提取 GP4G(四磷酸二鸟苷)的方法。
技术介绍
GP4G(P1, P4-Di (guanosine 5' ) tetraphosphate)，化学名为四磷酸二鸟苷，在化 妆界被称为细胞活化再生素，能渗透至真皮层，具有活化肌肤，帮助修复受损细胞，加强细 胞的再生功能，让细胞之间的养分疏通效率更高；促进胶原蛋白成分合成，提升细胞整体活 力，延缓皱纹产生，改善和淡化皱纹，帮助肌肤恢复紧致与弹性。在化妆品行业具有广阔的 市场前景。目前有报道的关于GP4G的提取方法见于F. J. FINAM0RE和A. H. WARNER于1963 年在 The Journal of Biological Chemistry 发表白勺文章 The occurrence of P1， P4-Diguanosine 5' -Tetraphosphate inBrine shrimp eggs。但是*艮据此文献才艮道的提 取GP4G的方法，其GP4G的收率低，设备要求条件高，生产成本高，不利于工业化生产。
技术实现思路
鉴于此，本专利技术的目的是提供一种从生物体中提取GP4G的方法，与文献中方法相 比，具有收率高、生产成本低，有利于工业化生产的特点。本专利技术采用以下的技术方案用含有GP4G的生物材料作为原材料，进行以下步骤 的操作原料预处理称取1000kg 2000kg生物原材料，用100 200目的筛网进行筛选，去除杂物，再进行清洗；脱水将处理后的生物原材料放置到设有100 200目筛网的传送机上进行脱水， 并以0. 5m/min 2m/min的速度传送；破碎将脱水后的生物原材料进行破碎；浸取将破碎后的生物原材料的折纯干重与lmol/L 3mol/L的_10°C 20°C的 酸性溶液按1 1 10kg L的比例混合，充分搅拌30min 120min，分离上清液；中和真空浓缩1 10倍后，用2mol/L 5mol/L碱性溶液调整浸取后的上清液 pH至7 8，收集固体析出物，去除清液，将固体析出物按5% 30%浓度采用蒸馏水或去 离子水溶解，再采用2mol/L 5mol/L酸性溶液调清液pH至2 5，准备上柱；吸附上述溶液用强酸性阳离子交换树脂进行吸附，吸附饱和后，注入脱盐水或去 离子水进行压料；洗脱用0. 5mol/L 2mol/L的酸性洗脱剂进行洗脱解吸，并分段收集目标产物；脱盐然后采用弱碱性阴离子交换树脂进行过流工艺脱色脱盐处理；真空浓缩在操作压力为-0. 085MPa _0. 092MPa，温度为30°C 60°C的真空状 态下，当溶液中GP4G的含量达到6%时，开始收集GP4G。3所述含有gp4g的生物材料为含高盐及含高矿物或耐高盐的海洋浮游生物及内陆 湖里的壳类生物。优选为含高盐及含高矿物或耐高盐的卤虫或卤虫卵。所述浸取步骤中用到的酸性溶液为hc1，hcio4，h2so4, hno3, hc00h, ch3c00h中的一 种或几种。所述浸取步骤中上清液的分离方法为虹吸、离心、过滤中的一种或几种方式。所述中和步骤中所用到的碱性溶液为naoh，k0h，氨水中的一种或几种。所述洗脱步骤中的酸性洗脱剂为甲酸、乙酸、HC1、H2S04中的一种或几种。所述最终获得的gp4g产物为液态或固态，优选为液态。在实际操作中，浸取过程中用到的酸性溶液中经常加入NaCl，(NH4)2S04, KC1等盐 类用来加强浸取的效果；在第一次将上清液浸取完毕后，还有一些固体不溶物剩余，将这些 固体不溶物和酸性溶液按1 1 10的比例进行二次、三次浸取，后两次浸取液可依次作 为下一批次的第一次、第二次浸取液进行使用，这样操作的好处可以降低溶剂用量和废水 量，同时可以提高浸提收率和节省浸提时间。再将剩余的固体不溶物用板框过滤机，操作压 力为lOMPa 20MPa进行过滤处理，收集上清液，滤渣用于其他用途。得到真空浓缩的gp4g后，可按最终产品不同的规格要求，分别作后续加工。本专利技术与文献中提到的方法相比，具有以下优点(1)本专利技术没有采用直接调ph 沉淀的方法，而是采取先浓缩后调ph，这样大大提高了收率，同时也节省了碱的用量；(2) 在采用阳离子柱吸附时是在吸附饱和后才进行压水洗脱，这样增加了树脂吸附量，提高了 使用效率，降低了成本；(3)脱盐时是采用弱碱性阴离子交换树脂进行过流工艺脱色脱盐 处理，而不是文献中提到的木炭吸附或透析除盐，这样可以同时起到脱盐和脱色的作用，提 高了效率。另外，在实际操作中还采用板框过滤替代高速离心和布氏漏斗的工艺，操作条件 要求低，利于工业化、规模化生产。综上所述，本专利技术具有收率高、生产成本低，利于工业化 生产的特点。具体实施例方式结合具体实施例进行说明。实施例1通过以下步骤进行gp4g的提取第一步称取1000kg盐水丰年虫卵，用100目筛网的机械振动筛振动，去除尘土和 细小的固体杂质，卤虫卵及比较大的固体杂质留在筛上，然后进入单向流动清洗池，利用比 重不同，在池另一端将浮在水面的卤虫卵采用120目的筛网进行捞取；第二步将捞取的盐水丰年虫卵放置在有120目筛网、30°倾角的带式传送机上， 以2m/min的速度进行传送，使卤虫卵带有的水份通过筛网漏下，而且传送机的另一端与粉 碎机进料口相连，使得滴干水的卤虫卵直接进入粉碎机；第三步通过粉碎机将虫卵破碎到其颗粒大小能通过140目的筛网为佳；第四步将破碎后的盐水丰年虫卵的折纯干重与lmol/L的_4°C的酸性溶液HC1 按1 lkg L的比例混合，充分搅拌30min，采用离心方式分离上清；第五步真空浓缩2倍后，用2mol/L碱性溶液调整浸取后的上清液pH至7 8，收 集固体析出物，去除清液，将固体析出物按30%浓度用蒸馏水或去离子水溶解，再用2mol/L酸性溶液调清液pH至2 5，准备上柱；第六步上述中和后的溶液以0. 5BV/h速度在732强酸性阳离子交换树脂进行上 柱吸附，吸附饱和后，停止上柱，然后采用脱盐水进行压料，压液颜色变淡停止，压料水进行 串柱吸附；第七步用0. 5mol/L的HC1酸性洗脱剂进行洗脱解吸，分段收集目标产物；第八步上柱速度为0. 5BV/h，采用弱碱性阴离子交换树脂进行过流工艺脱色脱 盐处理；至收集溶液pH为6. 5时停止脱盐处理；第九步在真空操作压力为-0. 090MPa，温度为40°C的真空状态下，当溶液中GP4G 的含量达到6%时，开始收集GP4G。用1000kg盐水丰年虫卵采用文献中的方法进行提取，将所得的GP4G收率与本发 明中GP4G的收率进行对比，见下表 实施例2通过以下步骤进行GP4G的提取第一步称取1500kg的Artemia Salina虫卵，用100目筛网的机械振动筛振动， 去除尘土和细小的固体杂质，卤虫卵及比较大的固体杂质留在筛上，然后进入单向流动清 洗池，利用比重不同，在池另一端将浮在水面的卤虫卵采用120目的筛网进行捞取；第二步将捞取的卤虫卵放置在有120目筛网、30°倾角的带式传送机上，以lm/ min的速度进行传送，使卤虫卵带有的水份通过筛网漏下，而且传送机的另一端与粉碎机进 料口相连，使得滴干水分的卤虫卵直接进入粉碎机；第三步通过粉碎机将虫卵破碎到本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从生物体中提取ＧＰ４Ｇ的方法，其特征在于：采用含有ＧＰ４Ｇ的生物材料作为原材料，进行以下步骤的操作：原料预处理：称取１０００ｋｇ～２０００ｋｇ生物原材料，用１００～２００目筛网进行筛选，去除杂物，再进行清洗；脱水：将处理后的生物原材料放置到设有１００～２００目筛网的传送机上进行脱水，并以０．５ｍ／ｍｉｎ～２ｍ／ｍｉｎ的速度传送；破碎：将脱水后的生物原材料进行破碎；浸取：将破碎后的生物原材料的折纯干重与１ｍｏｌ／Ｌ～３ｍｏｌ／Ｌ的－１０～２０℃的酸性溶液按１∶１～１０ｋｇ∶Ｌ的比例混合，充分搅拌３０ｍｉｎ～１２０ｍｉｎ，分离上清液；中和：真空浓缩１～１０倍后，采用２ｍｏｌ／Ｌ～５ｍｏｌ／Ｌ碱性溶液调整浸取后的上清液ｐＨ至７～８，收集固体析出物，去除清液，将固体析出物按５％～３０％浓度用蒸馏水或去离子水溶解，再用１～５ｍｏｌ／Ｌ酸性溶液调清液ｐＨ至２～５，准备上柱；吸附：溶液用强酸性阳离子交换树脂进行吸附，吸附饱和后，注入脱盐水或去离子水进行压料；洗脱：用０．５ｍｏｌ／Ｌ～２ｍｏｌ／Ｌ的酸性洗脱剂进行洗脱解吸，并分段收集目标产物；脱盐：然后采用弱碱性阴离子交换树脂进行过流工艺脱色脱盐处理；真空浓缩：在真空操作压力为－０．０８５ＭＰａ～－０．０９２ＭＰａ，温度为３０℃～６０℃的真空状态下浓缩，当溶液中ＧＰ４Ｇ的含量达到６％时，开始收集ＧＰ４Ｇ。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：郑春阳，魏国祥，
申请(专利权)人：天津强微特生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]