【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、跨膜药物递送系统可用于跨越血脑屏障(bbb)的药物递送、口服药物递送、细胞内药物递送等。目前，在诸如受体介导的跨血脑屏障药物递送等非侵入性血脑屏障药物递送技术中，转铁蛋白受体(tfr)是研究最广泛的靶蛋白。这些tfr靶向载体包括呈fabs、scfv或双可变结构域免疫球蛋白形式的抗体克隆ox26和8d3，gyr22肽，以及具有tfr结合特性的人igg的工程化fc区。虽然大多数此类方法仍处于临床前阶段，但一些研究已经在临床试验中显示出有希望的结果，即使存在若干限制。
2、tfr抗体的亲和力和效价可以改变tfr和递送的治疗实体的细胞内运输；高亲和力的二价tfr抗体可将抗体-tfr复合物转移到溶酶体中，导致tfr降解和表达水平降低。因此，用于跨膜药物递送的tfr抗体需要在对tfr的亲和力方面是最佳的和/或单价的，以实现更高效率的胞吞转运(transcytosis)进入脑。tfr靶向递送技术的效率可因待递送实体的生物学或生物化学特性而异，抗tfr抗体也可导致急性临床症状和循环网织红细胞计数减少。tfr在全身的普遍表达表明，tfr靶向策略将可能导致tfr靶向药物进入外周区室(诸如骨髓、肝脏和脾脏)的摄取增加。
3、除了少数例外，口服给药目前仅是表现出可接受肠吸收的小药物分子的选择。作为一类迅速发展的药物，生物制剂目前主要通过注射给药。几十年来的重大研究努力探索了使得能够口服递送生物制剂的技术，但进展相对不太令人印象深刻。这一领域的药物递送策略主要利用吸收或渗透促进剂诸如snac，或专注于质量相对较小的
技术实现思路
1、本申请提供了一种通过使用转铁蛋白结合蛋白使分子跨细胞膜转运的方法。转铁蛋白结合蛋白能够特异性结合转铁蛋白，并且不干扰转铁蛋白与转铁蛋白受体之间的相互作用。
2、一方面，本申请提供了通过使用转铁蛋白结合蛋白将分子转运穿过细胞膜的方法。
3、在一些实施方案中，转铁蛋白结合蛋白包含转铁蛋白结合抗体或其片段。
4、在一些实施方案中，该方法用于将药物递送穿过极化和/或未极化细胞的细胞膜。
5、在一些实施方案中，极化和/或未极化细胞在其细胞膜上表达转铁蛋白受体。
6、在一些实施方案中，穿过极化细胞的细胞膜的药物递送包括细胞内递送药物，和/或将内吞药物再循环回到血液循环中。
7、在一些实施方案中，穿过未极化细胞的细胞膜的药物递送包括靶向中枢神经系统(cns)的全身给药的药物穿过血脑屏障(bbb)、口服给药的药物穿过肠上皮、和/或药物穿透实体组织中的多层细胞。
8、在一些实施方案中，药物包括治疗或诊断物质。
9、在一些实施方案中，药物包括小分子化合物、合成肽、重组蛋白、抗体或抗体片段、酶、核苷酸序列片段、脂质体、脂质纳米颗粒、药物载体、合成核苷酸序列、经修饰的病毒和/或基因治疗载体。
10、在一些实施方案中，药物通过化学偶联或基因融合与转铁蛋白结合蛋白相结合。
11、另一方面，本申请提供了转铁蛋白结合蛋白，其能够延长其结合的实体的循环半衰期。
12、在一些实施方案中，转铁蛋白结合蛋白使得包含转铁蛋白结合蛋白的药物能够穿过血脑屏障(bbb)。
13、在一些实施方案中，转铁蛋白结合蛋白用于药物的口服递送。
14、在一些实施方案中，转铁蛋白结合蛋白使得其结合的实体能够通过细胞内递送至表达转铁蛋白受体的细胞。
15、在一些实施方案中，转铁蛋白结合蛋白能够特异性结合转铁蛋白，并且不干扰转铁蛋白与转铁蛋白受体1之间的相互作用。
16、在一些实施方案中，转铁蛋白是人转铁蛋白。
17、在一些实施方案中，转铁蛋白结合蛋白对含铁的铁饱和转铁蛋白的亲和力高于对不含铁的脱铁转铁蛋白的亲和力。
18、在一些实施方案中，转铁蛋白结合蛋白包括单克隆抗体、单链抗体片段、单结构域抗体片段、工程蛋白或肽。
19、在一些实施方案中，抗体或抗体片段包含动物来源的序列、人源化序列、全人源序列、嵌合序列或合成序列。
20、在一些实施方案中，抗体或抗体片段是单结构域抗体片段vhh。
21、在一些实施方案中，转铁蛋白结合蛋白包含cdr3，cdr3包含如seq id no:45-69中任一项所示的氨基酸序列。
22、在一些实施方案中，转铁蛋白结合蛋白包含cdr1、cdr2和cdr3，并且cdr3包含如seq id no:45-69中任一项所示的氨基酸序列。
23、在一些实施方案中，转铁蛋白结合蛋白包含重链可变区vh，重链可变区vh包含如seq id no:70-104中任一项所示的氨基酸序列。
24、另一方面，本申请提供了包含转铁蛋白结合蛋白和治疗实体的多肽。
25、在一些实施方案中，治疗实体包括工程细胞毒性假单胞菌属外毒素a(pe38)。
26、在一些实施方案中，治疗实体是胰高血糖素样肽-1(glp-1)或其变体。
27、在一些实施方案中，将治疗实体与所述抗原结合蛋白直接或间接连接。
28、在一些实施方案中，治疗实体与转铁蛋白结合蛋白通过连接子连接。
29、在另一个方面，本申请提供了一种或多种分离的核酸分子，其编码转铁蛋白结合蛋白或seq id no:70-106中任一项所示的多肽。
30、在另一方面，本申请提供了载体，其包含编码如seq id no:70-106中任一项所示的多肽的核酸分子。
31、在另一个方面，本申请提供了细胞，其包含表达如seq id no:70-106中任一项所示的多肽的核酸分子或载体。
32、另一方面，本申请提供了制备转铁蛋白结合蛋白或多肽的方法，其包括在允许转铁蛋白结合蛋白或多肽表达的条件下培养细胞。
33、另一方面，本申请提供了药物组合物，其包含转铁蛋白结合蛋白或多肽。
34、另一方面，本申请提供了用于延长治疗实体的循环半衰期的方法，其中所述治疗实体与转铁蛋白结合蛋白直接或间接连接。
35、另一方面，本申请提供了用于将治疗药物或诊断试剂递送至表达转铁蛋白受体的细胞或器官的方法，其包括使用转铁蛋白结合实体。
36、另一方面，本申请提供了用于将靶向药物递送穿过血脑屏障、肠上皮和/或表达转铁蛋白受体的细胞膜的方法，其包括使用转铁蛋白结合实体。
【技术保护点】
1.一种通过转铁蛋白结合蛋白将分子转运穿过细胞膜的方法。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述转铁蛋白结合蛋白包括转铁蛋白结合抗体或其片段。
3.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述方法用于将药物递送穿过极化和/或未极化细胞的细胞膜。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述极化和/或未极化细胞在其细胞膜上表达转铁蛋白受体。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述穿过极化细胞的细胞膜的药物递送包括药物的细胞内递送，和/或内吞的药物再循环回到血液循环中。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述穿过未极化细胞的细胞膜的药物递送包括靶向中枢神经系统(CNS)的全身给药的药物穿过血脑屏障(BBB)、口服给药的药物穿过肠上皮、和/或药物穿透实体组织中的多层细胞。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述药物包括治疗或诊断物质。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述药物包括小分子化合物、合成肽、重组蛋白、抗体或抗体片段、酶、核苷酸序列片段、脂质体、脂质
9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述药物通过化学偶联或基因融合而与所述转铁蛋白结合蛋白结合。
10.一种转铁蛋白结合蛋白，能够延长其结合的实体的循环半衰期。
11.根据权利要求10所述的转铁蛋白结合蛋白，其使得包含所述转铁蛋白结合蛋白的融合蛋白能够穿过血脑屏障(BBB)。
12.根据权利要求10-11中任一项所述的转铁蛋白结合蛋白，其用于药物的口服递送。
13.根据权利要求10-12中任一项所述的转铁蛋白结合蛋白，实现其结合的实体胞内递送到表达转铁蛋白受体的细胞。
14.根据权利要求10-13中任一项所述的转铁蛋白结合蛋白，其能够特异性结合转铁蛋白并且不干扰转铁蛋白与转铁蛋白受体1之间的相互作用。
15.根据权利要求10-14中任一项所述的转铁蛋白结合蛋白，其中所述转铁蛋白是人转铁蛋白。
16.根据权利要求10-15中任一项所述的转铁蛋白结合蛋白，其对含铁的铁饱和转铁蛋白的亲和力高于对不含铁的脱铁转铁蛋白的亲和力。
17.根据权利要求10-16中任一项所述的转铁蛋白结合蛋白，其包含单克隆抗体、单链抗体片段、单结构域抗体片段、工程蛋白或肽。
18.根据权利要求10-17中任一项所述的转铁蛋白结合蛋白，其中所述抗体或抗体片段包含动物来源的序列、人源化序列、全人源序列、嵌合序列或合成序列。
19.根据权利要求10-18中任一项所述的转铁蛋白结合蛋白，其中所述抗体或抗体片段是单结构域抗体片段VHH。
20.根据权利要求10-19中任一项所述的转铁蛋白结合蛋白，其包含CDR3，其中所述CDR3包含如SEQ ID NO:45-69中任一项所示的氨基酸序列。
21.根据权利要求10-20中任一项所述的转铁蛋白结合蛋白，其包含CDR2，其中所述CDR2包含如SEQ ID NO:22-44中任一项所示的氨基酸序列。
22.根据权利要求10-21中任一项所述的转铁蛋白结合蛋白，其包含CDR1，其中所述CDR1包含如SEQ ID NO:1-21中任一项所示的氨基酸序列。
23.根据权利要求10-22中任一项所述的转铁蛋白结合蛋白，其包含重链可变区VH，且所述重链可变区VH包含如SEQ ID NO:70-104中任一项所示的氨基酸序列。
24.一种多肽，其包含权利要求10-23中任一项的转铁蛋白结合蛋白和治疗实体。
25.根据权利要求24中任一项所述的多肽，其中所述治疗实体是工程细胞毒性假单胞菌外毒素A(PE38)。
26.根据权利要求24中任一项所述的多肽，其中所述治疗实体为胰高血糖素样肽-1(GLP-1)或其变体。
27.根据权利要求24-26中任一项所述的多肽，其中所述治疗实体与所述抗原结合蛋白直接或间接连接。
28.根据权利要求24-26中任一项所述的多肽，其中所述治疗实体与所述转铁蛋白结合蛋白通过连接子连接。
29.一种或多种分离的核酸分子，其编码权利要求10-23中任一项的转铁蛋白结合蛋白或权利要求24-29中任一项的多肽。
30.一种载体，其包含权利要求29的核酸分子。
31.一种细胞，其包含权利要求32的核酸分子或权利要求30的载体。
32.一种方法，其用于制备权利要求10-23中任一项的转铁蛋白结合蛋白...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种通过转铁蛋白结合蛋白将分子转运穿过细胞膜的方法。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述转铁蛋白结合蛋白包括转铁蛋白结合抗体或其片段。
3.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述方法用于将药物递送穿过极化和/或未极化细胞的细胞膜。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述极化和/或未极化细胞在其细胞膜上表达转铁蛋白受体。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述穿过极化细胞的细胞膜的药物递送包括药物的细胞内递送，和/或内吞的药物再循环回到血液循环中。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述穿过未极化细胞的细胞膜的药物递送包括靶向中枢神经系统(cns)的全身给药的药物穿过血脑屏障(bbb)、口服给药的药物穿过肠上皮、和/或药物穿透实体组织中的多层细胞。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述药物包括治疗或诊断物质。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述药物包括小分子化合物、合成肽、重组蛋白、抗体或抗体片段、酶、核苷酸序列片段、脂质体、脂质纳米颗粒、药物载体、经修饰的病毒和/或基因治疗载体。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述药物通过化学偶联或基因融合而与所述转铁蛋白结合蛋白结合。
10.一种转铁蛋白结合蛋白，能够延长其结合的实体的循环半衰期。
11.根据权利要求10所述的转铁蛋白结合蛋白，其使得包含所述转铁蛋白结合蛋白的融合蛋白能够穿过血脑屏障(bbb)。
12.根据权利要求10-11中任一项所述的转铁蛋白结合蛋白，其用于药物的口服递送。
13.根据权利要求10-12中任一项所述的转铁蛋白结合蛋白，实现其结合的实体胞内递送到表达转铁蛋白受体的细胞。
14.根据权利要求10-13中任一项所述的转铁蛋白结合蛋白，其能够特异性结合转铁蛋白并且不干扰转铁蛋白与转铁蛋白受体1之间的相互作用。
15.根据权利要求10-14中任一项所述的转铁蛋白结合蛋白，其中所述转铁蛋白是人转铁蛋白。
16.根据权利要求10-15中任一项所述的转铁蛋白结合蛋白，其对含铁的铁饱和转铁蛋白的亲和力高于对不含铁的脱铁转铁蛋白的亲和力。
17.根据权利要求10-16中任一项所述的转铁蛋白结合蛋白，其包含单克隆抗体、单链抗体片段、单结构域抗体片段、工程蛋白或肽。
18.根据权利要求10-17中任一项所述的转铁蛋白结合蛋白，其中所述抗体或抗体片段包含动物来源的序列、人源化序列、全人源序列、嵌合序列或合成序列。
19.根据权利要求10-18中任一项所述的转铁蛋白结合蛋白，其中所述抗体或抗体片段是单结构域抗体片段vhh。
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【专利技术属性】
技术研发人员：韩照中，潘红芽，彭孟凡，
申请(专利权)人：领诺上海医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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